혈관 기능, 미세 순환 및 혈전증에 대한 전자 담배 흡입의 급성 영향

22명의 건강한 여성 및 남성 간헐적 흡연자 또는 스누스 사용자(18-55세, 매월 담배 10개비, 매월 스누스 10파우치)가 포함됩니다. 연구 대상자는 노출 전 최소 24시간 동안 알코올 및 카페인 섭취를 삼가해야 합니다. 담배 사용(스웨디시 습식 코담배 포함) 또는 전자 담배 사용은 노출 전 7일 이내에 허용되지 않습니다.

모든 피험자는 정상적인 건강 신고서를 작성해야 합니다.

무작위 교차 방식으로 모든 피험자는 eVic-Primo SE(Shenzhen Joyetech Co., Ltd., 중국) 전자 담배 한 개에서 증기(30분 동안 30회 퍼프)를 흡입합니다. 환기가 잘 되는 특별히 준비된 방에서.

시장에는 많은 전자담배 액상 제조업체와 유통업체가 있습니다. 독립적인 내용물 분석에 따르면 전자담배 액상 배치 전체에 걸쳐 니코틴 변동이 적고 제조업체가 명시한 니코틴 양이 정확한 경우가 많습니다. 니코틴(19 mg/ml)이 있거나 없는 전자 액체(Valeo laboratories GmbH, Germany)가 사용됩니다. 함량 분석은 제조업체 홈페이지(http://www.e-liquid-wholesale.com)에서 무료로 제공됩니다. 3세대 EC는 설정(온도 230°C, 효과 32W, 저항 0,20Ω)과 함께 사용됩니다.

연구 피험자는 노출 시퀀스 전 최소 24시간 동안 알코올 섭취를 자제하고 12시간 동안 카페인 섭취를 삼가해야 합니다. 두 행사는 최소 1주일 간격으로 진행됩니다. 피험자는 노출 전 15분 동안 휴식을 취합니다.

초기 15분의 휴식 후 다양한 심혈관 종점에 대한 측정이 기준선에서 그리고 두 노출 후 최대 2시간 동안 수행됩니다. 이는 다음과 같은 방법으로 수행됩니다.

혈관 기능 측정

Photopletysmography(PPG) 동맥 경직도는 혈관 손상 및 위험의 독립적인 척도이며 골드 표준 기술 맥파 속도(PWV)로 가장 잘 평가됩니다. 그러나 이 방법은 기술적으로 특수 장비(예: SphygmoCor)와 교육받은 연구 인력이 필요합니다. 그러나 Finger photoplethysmography는 잠재적으로 PWV와 동일한 정보를 제공하며 동맥 경화의 지속적인 측정에 이상적입니다.

펄스 전파 시간(PPT), 맥파의 수축기에서 확장기 피크까지의 간격. PPT는 동맥 경직 및 혈관 노화에 대한 향후 마커입니다. 동시에 마이크로폰의 ECG 및 열음이 녹음되어 분석을 보다 쉽게 ​​검증할 수 있습니다.

미세순환 이온도입법 및 레이저 스펙클 대비 이미징(LSCI) 미세순환은 두 가지 물질(아세틸콜린 및 니트로프루시드)을 피부 표면의 작은 챔버(0.5ml)에 적용하는 비침습적 방법으로 평가합니다. 미세순환의 변화는 레이저 도플러로 측정됩니다. 이 방법은 완전히 무해하고 통증이 없습니다. 드물지만 그럴듯한 부작용은 일시적인 국소 피부 발진입니다.

심장이 박동할 때마다 압력파가 생성되어 신체의 가장 말초 부분까지 도달합니다. 빛 흡수의 변화를 측정함으로써 예를 들어 손가락 끝과 같은 피하 조직의 말초 동맥 및 세동맥의 팽창(심지어 아주 작은)을 평가할 수 있습니다. 미세순환은 또한 피부의 미세순환을 평가하기 위한 비침습적 완전 무통 방법인 레이저 반점 대조 영상(LSCI)에 의해 측정될 수 있습니다.

혈압 반자동 오실로메트릭 혈압계를 사용하여 혈압과 심박수를 측정합니다.

혈액 샘플링 노출 후 0시간, 1시간 및 2시간에 기준선에서 1/10 0.129M 구연산나트륨, EDTA 및 혈청을 함유하는 시험관에 혈액 샘플을 채취합니다. 혈장은 나중에 실온(RT)에서 20분 동안 2000g에서 원심분리한 후 수집한 다음 분석할 때까지 -70°C에서 동결합니다.

혈전 형성 측정(T-TAS) T-TAS®(총 혈전 형성 분석 시스템)는 소량의 혈액 샘플을 사용하여 가변 흐름 조건에서 혈전 형성을 평가하는 수단입니다.

코티닌의 측정 코티닌의 수준은 상업적으로 이용 가능한 ELISA 기술을 사용하여 혈청에서 측정될 것입니다.

손가락 중 하나의 손발톱 바닥 모세혈관의 직접 현미경을 통해 모세혈관 혈류를 평가할 수 있습니다(모세혈관 속도, CBV, mm/s). 이것은 수행하는 데 약 15분이 소요되는 완전히 통증이 없고 비침습적인 방법입니다.

MV 혈장의 측정은 해동되고 실온에서 20분 동안 2000g에서 원심분리됩니다. 그런 다음 상청액을 실온에서 2분 동안 13,000g에서 재원심분리합니다. 20 μl의 샘플을 phalloidin-Alexa-660(Invitrogen, Paisley, UK), lactadherin-FITC(Haematologic Technologies, Vermont, USA), CD42a-PE(Platelet-MP(PMP), BD, 클론 Alma-16), CD45-PC7(백혈구-MV(LMV), Beckman Coulter, 더블린, 아일랜드) 및 CD144-APC(내피-MV(EMV), AH 진단, 스톡홀름, SWE). PMV는 또한 CD154-PE(CD40L, abcam, Cambridge, UK)로, EMV는 CD62E(E-selectin, Beckman Coulter, Dublin, Ireland)로 표시됩니다. MV는 Beckman Gallios 기기(CA, USA)에서 유동 세포 계측법으로 측정됩니다. MV-게이트는 직경이 각각 0.5μm, 0.9μm 및 3.0μm인 비드가 혼합된 Megamix 비드(BioCytex, 프랑스 마르세이유)를 사용하여 결정됩니다. MV는 크기가 1.0 μm 미만인 입자로 정의되며, (세포막 조각을 배제하기 위해) phalloidin에 음성이고 lactadherin에 양성입니다. 인간 항원에 대한 반응성이 없는 컨쥬게이트 이소형 일치 면역글로불린(IgG1-FITC, IgG1-PE, IgG1-APC 및 IgG1-PC7)은 세포측정 분석의 배경 노이즈를 정의하기 위한 음성 대조군으로 사용됩니다. MV의 절대 수는 다음 공식을 사용하여 계산됩니다. (MV 계산 x 표준 비드 ⁄ L) ⁄ 표준 비드 계산(FlowCount, Beckman Coulter).

활성화 또는 세포사멸로 인해 MV가 방출되는지 확인하기 위해 MV는 SYTO 13으로 표시됩니다. SYTO 13(Molecular Probes)은 세포 투과성이며 DNA 또는 RNA에 결합할 때 높은 형광 수율을 나타냅니다. 우리의 가설은 세포 사멸 세포에서 방출된 MV가 더 많은 DNA 또는 RNA를 발현한다는 것입니다.

MV의 전응고 효과 트롬빈 생성에 대한 MV의 영향 및 MV에 의해 제공되는 음으로 하전된 표면의 상대적 기여도를 조사하기 위해 시험관 내 실험을 수행합니다. 간단히 혈장 샘플을 해동하고 위에서 설명한 원심분리 단계 후에 샘플을 추가로 원심분리합니다(45분에 21,000g, RT). MV 농축 펠릿을 얻습니다. 그런 다음 펠릿을 TF 또는 인지질을 첨가하지 않고 상업용 혈장(Haemochrom, Diagnostica, Essen, Germany)에 첨가합니다. 혈장 내 트롬빈 생성은 Hemker et al. 계산된 곡선 아래 면적은 시간 경과에 따라 생성된 총 트롬빈 양을 나타내며 내인성 트롬빈 전위(ETP)라고 합니다. 트롬빈 생성 시작까지의 시간(지체 시간), 트롬빈 ​​생성의 최대 농도(피크 트롬빈) 및 최대 트롬빈 생성까지의 시간(피크 트롬빈까지의 시간)도 CAT 분석에서 평가됩니다.