慢性片頭痛におけるエレヌマブ治療の神経生理学的、生体分子的および心理学的側面

この研究は、IRCCS Mondino Foundation の頭痛科学センターの神経内科医による最初のスクリーニング訪問で構成され、その間に完全な神経学的および一般的な検査が行われ、Mondino Foundation に参加するすべての患者が使用する定期的な頭痛日記で収集されたデータが使用されました。包含/除外基準を確認するためにチェックされます。

患者が基準を満たした場合、その患者は 1 か月間のベースライン観察期間に登録されました。 ベースライン観察期間（T0）の終わりに、包含/除外基準がまだ満たされている場合、患者は次の手順を完了しました：臨床的および人口統計学的特徴の記録、バイタルサインの評価、神経生理学的評価、およびDSM（The Diagnostic and Statical Manual of Mental Disorders)、静脈採血、および心理状態、健康状態、生活の質に関する一連の自記式アンケートの編集。

T0 で、患者は皮下に erenumab 70 mg の初回投与で治療されました。

28 日 (丸 4 週間) 後、患者は 2 回目の来院 (T1) に戻り、臨床変数と有害事象を報告しました。 T1 の間に、エレヌマブ 70 mg の 2 回目の注射が投与され、エレヌマブ 70 mg の 3 回目と最後の投与量は、追加の 28 日間の間隔 (T2) の後、患者自身によって自宅で自己投与されました。 試験の最後の来院 (T3) は、T1 から 56 日後、つまりエレヌマブの最終投与から 28 日後に計画されました。 T3 で、患者は T0 で行われたのと同じ学際的評価でテストされました: 臨床的および人口統計学的特徴の記録、バイタルサイン評価、神経生理学的評価、静脈血サンプリング、および患者の心理状態、健康状態および質に関するアンケートの編集。人生の。

侵害受容の引きこもり反射の測定。 侵害受容逃避反射 (NWR) は、脊髄侵害受容伝達の研究のための客観的で堅実な神経生理学的手法と見なされます。 09:00 AM から 11:00 AM の間に専門の技術者によって静かな環境で、十分に検証された手順に従って反射が下肢で記録されました。 患者は快適な姿勢で、足首は 90°、膝は 130°に曲がっていました。 腓腹神経は、一対の Ag/AgCl 表面電極を用いて、外果の後ろで電気的に刺激されました。 電気刺激は、60 ～ 120 秒ごとにランダムに送達される 5 つの連続する方形パルス (1 ms、200 Hz) で作成されました。 筋電図スイープ（Synergy、Medelec、英国）は、一対のAg / AgCl表面電極を使用して、同側大腿二頭筋の短頭から記録されました。 すべてのしきい値評価に階段法が使用され、1 ステップあたり 0.3 mA ずつ強度が増加しました。 記録パラメーターは、分析時間 300 ms、感度 20 mV、フィルター バンドパス 3 ～ 3000 Hz でした。

研究者は最初に、少なくとも 20 mV および 10 ms の 3 つの連続した安定した筋肉反応を誘発できる最低強度 (mA) として定義される NWR (RTh) の単一刺激反射閾値を評価しました。 また、平均 AUC (曲線下面積 - mV x ms)、平均潜時 (ms)、および 0 ～ 10 ポイントの視覚的アナログ スケール (VAS-RTh) で評価された主観的な痛みの知覚も評価しました。

次に、調査員は、2 Hz の周波数で一連の 5 つの電気刺激を使用して、時間的加算閾値 (TST) を評価しました。 TST は、4 回目と 5 回目の筋電図スイープで少なくとも 20 mV と 10 ms の安定した筋肉反応を 3 回連続して誘発できる最低強度 (mA) として定義されました。 彼らはまた、TSTの最初の刺激（VAS-TST-1）と5番目の刺激（VAS-TST-5）の主観的な痛みの知覚を、0～10点の視覚的アナログスケールで評価しました。

マイクロRNAの発現。 マイクロ RNA 発現は、末梢血単核細胞 (PBMC) におけるリアルタイム逆転写 (RT) PCR によって評価されました。

PBMC の分離: 血液サンプル (10 ml) は、参加者からエチレンジアミン四酢酸を含むチューブ内に収集されました。 血液サンプルは、リン酸緩衝生理食塩水 (PBS) (Sigma) で 1:1 の比率で希釈しました。 希釈した血液サンプルをフィコール分離溶液 (10 ml) (Sigma) にゆっくりとロードし、室温で 30 分間、800 g で遠心分離しました。 中央の白い単層として蓄積した PBMC を、無菌 PBS で 300 g で 15 分間、2 回洗浄しました。 洗浄後、ＰＢＭＣをペレット化し、使用するまで－８０℃で保存した。

マイクロＲＮＡ遺伝子発現：ＰＢＭＣからのＲＮＡの単離は、Ｄｉｒｅｃｔ−ｚｏｌ ＲＮＡ Ｍｉｎｉ ｐｒｅｐ ｐｌｕｓ（Ｚｙｍｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）を用いて行った。 RNA 濃度は、NanoDrop 分光光度計 (Nanodrop™ Thermo Fisher Scientific、Euroclone Milano) を使用して、230 nm および 280 nm での吸光度によって決定しました。 ｍｉｒＸＭｉｒｎａ Ｆｉｒｓｔ ｓｔｒａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｔａｋａｒａ－Ｄｉａｔｅｃｈ、Ｊｅｓｉ－Ａｎ Ｉｔａｌｙ）を用いてｃＤＮＡの合成を行い、ＴＢ Ｇｒｅｅｎ ｑ－Ｒｔ ＰＣＲ（Ｔａｋａｒａ－Ｄｉａｔｅｃｈ、Ｊｅｓｉ－Ａｎ Ｉｔａｌｙ）を用いてｍｉＲＮＡ－３４ａ－５ｐの発現レベルを決定した。およびmiRNA-382-5p。 変性は 95°C で行い、増幅は Light Cycler 480 Instrument RT-PCR Detection System (Roche、Milan、Italy) を使用して 40 サイクルの 2 段階サイクリング (95 ～ 60°C) で行いました。 標的遺伝子の発現レベルは、ハウスキーピング遺伝子として使用される U6 (小さな核 RNA の一種) で正規化されました。 遺伝子発現レベルは、Ct 値を使用して 2-ΔCt = 2 - (Ct 遺伝子 - Ct ハウスキーピング遺伝子) 式に従って計算されました。

障害と心理的評価。

バッテリーには、次の評価が含まれています。

4) 片頭痛に関連する障害および関連する特徴:

• 片頭痛障害評価 (MIDAS) テスト: 0-5 (グレード I): 軽度の障害、6-10 (グレード II): 軽度の障害、11-20 (グレード III): 中等度の障害、21-40 (グレード IVa):重度の障害、41 以上 (グレード IVb): 非常に重度の障害。
• Headache Impact Test-6 (HIT-6): 49 以下: 影響なし、50-55: 多少の影響、56-59: かなりの影響、60-78 深刻な影響。
• 片頭痛の痛みの平均強度を評価するための侵害受容評価尺度: 0 痛みなし - 10 非常に重度。

• アロディニア症状チェックリスト (ASC-12): 0 ～ 3: 軽度の皮膚アロディニア、6 ～ 8: 中等度の皮膚アロディニア、9 以上: 重度の皮膚アロディニア。

  5) 生活の質:

• 片頭痛固有の生活の質に関するアンケート (MSQ): 14 項目の評価で、各項目は 6 段階 (「まったくない」から「常に」までの範囲) で評価されます。 生スコアは 100 点スケールに変換され、スコアが高いほど生活の質が向上します。
• Short Form Health Survey (SF-36): 2 つの主要なサブドメイン、すなわち精神コンポーネントの概要 (MCS) と身体コンポーネントの概要 (PCS) を参照する 11 項目の評価。

• 健康 0 ～ 100: 患者は、評価の正確な時点での一般的な健康状態を 0 ～ 100 のスケール範囲で採点するよう求められました。

  6) 心理状態:

• Hospital Anxiety and Depression Scale (HADS): 不安と抑うつの症状を評価する 4 点 (0-3) リッカート尺度の 14 項目のアンケート。 2 つの異なる領域で 8 以上のスコアは、不安および/またはうつ病に有意であると見なされます。
• Leeds Dependence Questionnaire (LDQ): さまざまな物質への依存を測定するための 0 ～ 3 スケールの 10 項目の手段。 依存を示すカットオフスコアは確立されていません。
• トロント アレキシサイミア スケール (TAS-20): アレキシサイミアの特徴、つまり自分の感情を言葉で表現することの難しさを評価する 5 点 (1-5) リッカート スケールの 20 項目のアンケート。 61 以上のスコアは、アレキシサイミアの存在について有意であると見なされました。
• 小児期のトラウマに関するアンケート: トラウマ体験の総数に関して考慮された、さまざまなタイプの小児期のトラウマに言及する 13 項目を含む。
• ストレスの多いライフイベントに関するアンケート: 58 のストレスの多いライフイベント (引っ越し、離婚、新しい仕事、解雇など) のリストで構成されています。 患者は、過去 10 年間に起こった出来事にチェックを入れるように求められました。