Neurofysiologiske, biomolekylære og psykologiske aspekter af Erenumab-behandling ved kronisk migræne

Denne undersøgelse bestod af et første screeningsbesøg hos en neurolog fra Headache Science Center i IRCCS Mondino Foundation, hvorunder en fuldstændig neurologisk og generel undersøgelse blev udført, og dataene indsamlet på den rutinemæssige hovedpinedagbog, der blev brugt af alle patienter, der gik i Mondino Foundation, kontrolleret for at bekræfte inklusions-/eksklusionskriterier.

Hvis en patient opfyldte kriterierne, blev han/hun indskrevet i en baseline-observationsperiode i en måned. Ved afslutningen af ​​baseline-observationsperioden (T0), hvis inklusions-/eksklusionskriterierne stadig var opfyldt, gennemførte patienterne følgende procedurer: registrering af kliniske og demografiske træk, evaluering af vitale tegn, neurofysiologisk vurdering og psykologisk interview baseret på DSM (The Diagnostic and Statical Manual of Mental Disorders), venøs blodprøvetagning og kompilering af et sæt selvadministrerede spørgeskemaer om psykologisk tilstand, sundhedstilstand og livskvalitet.

Ved T0 blev patienterne behandlet med den første dosis erenumab 70 mg subkutant.

Efter 28 dage (4 hele uger) vendte patienterne tilbage til det andet besøg (T1) for at rapportere kliniske variabler og bivirkninger. Under T1 blev den anden injektion af erenumab 70 mg givet, mens en tredje og sidste dosis af erenumab 70 mg blev administreret selv hjemme af patienterne selv efter yderligere 28 dages interval (T2). Det sidste besøg i undersøgelsen (T3) var så planlagt 56 dage fra T1, det vil sige 28 dage efter den sidste dosis af erenumab. På T3 blev patienterne testet med den samme tværfaglige evaluering udført på T0: registrering af kliniske og demografiske træk, vurdering af vitale tegn, neurofysiologisk vurdering, venøs blodprøvetagning og udarbejdelse af spørgeskemaer vedrørende patienters psykologiske tilstand, helbredstilstand og kvalitet. af livet.

Nociceptive abstinensrefleksmålinger. Den nociceptive abstinensrefleks (NWR) betragtes som en objektiv og solid neurofysiologisk teknik til undersøgelse af spinal nociceptiv transmission. Refleksen blev registreret i underekstremiteterne i henhold til en velvalideret procedure i rolige omgivelser af en ekspert tekniker mellem 09:00 og 11:00. Patienterne var i en behagelig stilling med deres ankel bøjet ved 90° og knæ bøjet ved 130°. Suralnerven blev stimuleret elektrisk bag den laterale malleolus med et par Ag/AgCl overfladeelektroder. Den elektriske stimulation blev lavet af 5 på hinanden følgende kvadratiske impulser (1 ms, 200 Hz), afgivet tilfældigt hvert 60.-120. sekund. Det elektromyografiske sweep (Synergy, Medelec, Storbritannien) blev registreret fra capitis brevis på den homolaterale biceps femoris med et par Ag/AgCl overfladeelektroder. En trappemetode blev brugt til alle tærskelevalueringer, og intensiteten blev øget med 0,3 mA pr. trin. Optagelsesparametrene var: analysetid 300 ms, følsomhed 20 mV og filterbåndpas 3 til 3000 Hz.

Forskerne evaluerede først den enkelte stimulusreflekstærskel for NWR (RTh), defineret som den laveste intensitet (mA), der er i stand til at inducere 3 på hinanden følgende stabile muskulære reaktioner på mindst 20 mV og 10 ms. De evaluerede også den gennemsnitlige AUC (Area Under the Curve - mV x ms), den gennemsnitlige latens (ms) og den subjektive smerteopfattelse vurderet på en 0-10 point visuel analog skala (VAS-RTh).

Derefter evaluerede efterforskerne den tidsmæssige summeringstærskel (TST) ved hjælp af et tog af 5 elektriske stimuli ved en frekvens på 2 Hz. TST blev defineret som den laveste intensitet (mA), der var i stand til at fremkalde 3 på hinanden følgende stabile muskulære responser på mindst 20 mV og 10 ms i det fjerde og femte elektromyografiske sweep. De evaluerede også den subjektive smerteopfattelse af den første (VAS-TST-1) og femte (VAS-TST-5) stimulus af TST på en 0-10 point visuel analog skala.

MikroRNAs ekspression. MikroRNA-ekspressionen blev evalueret ved real-time revers transcription (RT) PCR i perifere blod mononukleære celler (PBMC'er).

Isolering af PBMC'er: blodprøver (10 ml) blev opsamlet i et ethylendiamintetraeddikesyreholdigt rør fra deltagerne. Blodprøverne blev fortyndet i forholdet 1:1 med phosphatbuffer saltvand (PBS) (Sigma). Fortyndede blodprøver blev langsomt fyldt i Ficoll-separeringsopløsning (10 ml) (Sigma) og centrifugeret ved 800 g i 30 minutter ved stuetemperatur. PBMC'er akkumuleret som det mellemste hvide monolag, blev vasket to gange i steril PBS ved 300 g i 15 min. Efter vask blev PBMC'er pelleteret og opbevaret ved -80°C indtil brug.

MicroRNAs genekspression: isolering af RNA fra PBMC'er blev udført under anvendelse af Direct-zol RNA Mini prep plus (Zymo Research). RNA-koncentrationen blev bestemt ved absorbans ved 230 og 280 nm under anvendelse af NanoDrop Spectrophotometer (Nanodrop™ Thermo Fisher Scientific, Euroclone Milano). Syntese af cDNA blev udført ved hjælp af MirXMirna Første strengsyntese (Takara-Diatech, Jesi-An Italien) og TB Green q-Rt PCR anvendes (Takara-Diatech, Jesi-An Italien) til at bestemme ekspressionsniveauer af miRNA-34a-5p og miRNA-382-5p. Denatureringen blev udført ved 95°C, og amplifikationen blev udført gennem to-trins cykling (95-60°C) i 40 cykler med et Light Cycler 480 Instrument RT-PCR-detektionssystem (Roche, Milano, Italien). Målgenekspressionsniveauer blev normaliseret med U6 (en type lille nuklear RNA), der blev brugt som husholdningsgen. Genekspressionsniveauer blev beregnet i henhold til 2-∆Ct = 2 - (Ct-gen - Ct-husholdningsgen) formel ved at bruge Ct-værdier.

Handicap og psykologiske evalueringer.

Batteriet inkluderede evalueringer for:

4) Migrænerelateret handicap og tilknyttede funktioner:

• migræne handicapvurdering (MIDAS) testen: 0-5 (grad I): minimalt handicap, 6-10 (grad II): let handicap, 11-20 (grad III): moderat handicap, 21-40 (grad IVa): alvorligt handicap, 41 og højere (grad IVb): meget alvorligt handicap;
• Hovedpine Impact Test-6 (HIT-6): 49 eller mindre: ingen påvirkning, 50-55: nogen påvirkning, 56-59: væsentlig påvirkning, 60-78 alvorlig påvirkning;
• Nociceptiv vurderingsskala til vurdering af den gennemsnitlige intensitet af migrænesmerter: 0 ingen smerter - 10 meget alvorlige;

• Allodyni Symptom Tjekliste (ASC-12): 0-3: mild kutan allodyni, 6-8: moderat kutan allodyni, 9 og højere: svær kutan allodyni.

  5) Livskvalitet:

• det migrænespecifikke livskvalitetsspørgeskema (MSQ): 14 punkters vurdering, hvor hvert emne bedømt på en 6-trins skala (spænder fra "ingen af ​​tiden" til "hele tiden"). Rå scorer transformeres derefter til en 100-punkts skala, hvor højere score indikerer bedre livskvalitet;
• Short Form Health Survey (SF-36): 11-punktsvurdering, der refererer til to hovedunderdomæner, nemlig Mental Component Summary (MCS) og Physical Component Summary (PCS);

• SUNDHED 0-100: Patienterne blev bedt om at score på en skala fra 0-100 deres generelle sundhedstilstand på det præcise tidspunkt for evalueringen.

  6) Psykologisk tilstand:

• Hospital Anxiety and Depression Scale (HADS): et spørgeskema med 14 punkter på en 4-punkts (0-3) Likert-skala, der vurderer symptomer på angst og depression. En score på 8 eller højere i de to forskellige domæner anses for at være signifikant for angst og/eller depression;
• Leeds Dependence Questionnaire (LDQ): et 10-element instrument på 0-3 skala til at måle afhængighed af en række stoffer. Der er ikke etableret nogen cut-off score, der indikerer afhængighed;
• Toronto Alexithymia Scale (TAS-20): et spørgeskema med 20 punkter på en 5-punkts (1-5) Likert-skala, der vurderer alexithymia-træk, dvs. individers vanskeligheder med at udtrykke deres egne følelser i ord. En score på 61 eller højere blev anset for at være signifikant for tilstedeværelsen af ​​alexithymi;
• Spørgeskema for barndomstraumer: inklusive 13 punkter, der refererer til forskellige typer barndomstraumer, der blev betragtet i forhold til det samlede antal traumatiske oplevelser;
• Spørgeskema med stressende livsbegivenheder: bestående af en liste over 58 stressende livsbegivenheder (f.eks. flytning, skilsmisse, nyt arbejde, afskedigelse osv.). Patienterne blev bedt om at sætte kryds ved de hændelser, der var opstået for dem i de sidste 10 år.