Aspectos neurofisiológicos, biomoleculares e psicológicos do tratamento com erenumabe na enxaqueca crônica

Este estudo consistiu numa primeira visita de triagem com um Neurologista do Centro de Ciências da Cefaleia da Fundação Mondino do IRCCS, durante a qual foi realizado um exame neurológico e geral completo, e os dados recolhidos no diário de cefaleias de rotina utilizado por todos os doentes que frequentam a Fundação Mondino foram verificados para confirmar os critérios de inclusão/exclusão.

Se um paciente preenchesse os critérios, ele/ela era inscrito em um período de observação inicial por um mês. No final do período de observação inicial (T0), se os critérios de inclusão/exclusão ainda fossem satisfeitos, os pacientes completavam os seguintes procedimentos: registro de características clínicas e demográficas, avaliação de sinais vitais, avaliação neurofisiológica e entrevista psicológica com base no DSM (The Diagnostic and Statical Manual of Mental Disorders), coleta de sangue venoso e compilação de um conjunto de questionários autoaplicáveis ​​sobre estado psicológico, estado de saúde e qualidade de vida.

Em T0, os pacientes foram tratados com a primeira dose de erenumabe 70 mg por via subcutânea.

Após 28 dias (4 semanas completas), os pacientes retornaram para a segunda visita (T1) para relatar variáveis ​​clínicas e eventos adversos. Durante T1, foi administrada a segunda injeção de erenumabe 70 mg, enquanto uma terceira e última dose de erenumabe 70 mg foi autoadministrada em casa pelo próprio paciente após um intervalo adicional de 28 dias (T2). A última visita do estudo (T3) foi então planejada 56 dias a partir de T1, ou seja, 28 dias após a última dose de erenumabe. Em T3, os pacientes foram testados com a mesma avaliação multidisciplinar realizada em T0: registro de características clínicas e demográficas, avaliação de sinais vitais, avaliação neurofisiológica, coleta de sangue venoso e compilação de questionários sobre estado psicológico, estado de saúde e qualidade dos pacientes da vida.

Medições do reflexo de retirada nociceptiva. O reflexo de retirada nociceptiva (NWR) é considerado uma técnica neurofisiológica objetiva e sólida para o estudo da transmissão nociceptiva espinhal. O reflexo foi registrado no membro inferior de acordo com um procedimento bem validado, em ambiente silencioso por um técnico especializado entre 09h00 e 11h00. Os pacientes estavam em uma posição confortável com o tornozelo flexionado a 90° e o joelho flexionado a 130°. O nervo sural foi estimulado eletricamente atrás do maléolo lateral com um par de eletrodos de superfície Ag/AgCl. A estimulação elétrica foi feita de 5 pulsos quadrados consecutivos (1 ms, 200 Hz), entregues aleatoriamente a cada 60-120 segundos. A varredura eletromiográfica (Synergy, Medelec, Reino Unido) foi registrada a partir da cabeça curta do bíceps femoral homolateral com um par de eletrodos de superfície Ag/AgCl. Um método de escada foi usado para todas as avaliações de limiar, e a intensidade foi aumentada em 0,3 mA por passo. Os parâmetros de gravação foram: tempo de análise 300 ms, sensibilidade 20 mV e filtro passa-banda 3 a 3000 Hz.

Os pesquisadores primeiro avaliaram o limiar reflexo de estímulo único do NWR (RTh), definido como a menor intensidade (mA) capaz de induzir 3 respostas musculares estáveis ​​consecutivas de pelo menos 20 mV e 10 ms. Eles também avaliaram a AUC média (área sob a curva - mV x ms), a latência média (ms) e a percepção subjetiva da dor avaliada em uma escala analógica visual de 0 a 10 pontos (VAS-RTh).

Em seguida, os investigadores avaliaram o limiar de soma temporal (TST), por meio de um trem de 5 estímulos elétricos na frequência de 2 Hz. TST foi definido como a menor intensidade (mA) capaz de eliciar 3 respostas musculares estáveis ​​consecutivas de pelo menos 20 mV e 10 ms na quarta e quinta varreduras eletromiográficas. Eles também avaliaram a percepção subjetiva da dor do primeiro (VAS-TST-1) e quinto (VAS-TST-5) estímulo do TST em uma escala analógica visual de 0 a 10 pontos.

Expressão de microRNAs. A expressão de microRNA foi avaliada por PCR de transcrição reversa (RT) em tempo real em células mononucleares de sangue periférico (PBMCs).

Isolamento de PBMCs: amostras de sangue (10 ml) foram coletadas em tubos contendo ácido etilenodiamina tetra-acético dos participantes. As amostras de sangue foram diluídas na proporção de 1:1 com tampão fosfato salino (PBS) (Sigma). Amostras de sangue diluídas foram carregadas lentamente em solução de separação Ficoll (10 ml) (Sigma) e centrifugadas a 800 g por 30 min em temperatura ambiente. As PBMCs acumuladas como a monocamada branca intermediária foram lavadas duas vezes em PBS estéril a 300 g por 15 min. Após a lavagem, as PBMCs foram peletizadas e armazenadas a -80°C até o uso.

Expressão gênica de microRNAs: o isolamento de RNA de PBMCs foi realizado usando o Direct-zol RNA Mini prep plus (Zymo Research). A concentração de RNA foi determinada por absorbância a 230 e 280 nm usando o Espectrofotômetro NanoDrop (Nanodrop™ Thermo Fisher Scientific, Euroclone Milano). A síntese de cDNA foi realizada usando MirXMirna First string Synthesis (Takara-Diatech, Jesi-An Itália) e TB Green q-Rt PCR é usado (Takara-Diatech, Jesi-An Itália) para determinar os níveis de expressão de miRNA-34a-5p e miRNA-382-5p. A desnaturação foi realizada a 95°C e a amplificação foi realizada por meio de ciclagem em duas etapas (95-60°C) por 40 ciclos com um Light Cycler 480 Instrument RT-PCR Detection System (Roche, Milão, Itália). Os níveis de expressão do gene alvo foram normalizados com U6 (um tipo de pequeno RNA nuclear), usado como gene de limpeza. Os níveis de expressão gênica foram calculados de acordo com a fórmula 2-∆Ct = 2 - (Ct gene - Ct housekeeping gene) usando valores de Ct.

Deficiência e avaliações psicológicas.

A bateria incluiu avaliações para:

4) Incapacidade relacionada à enxaqueca e características associadas:

• o teste Migraine Disability Assessment (MIDAS): 0-5 (grau I): incapacidade mínima, 6-10 (grau II): incapacidade leve, 11-20 (grau III): incapacidade moderada, 21-40 (grau IVa): incapacidade grave, 41 e superior (grau IVb): incapacidade muito grave;
• o Headache Impact Test-6 (HIT-6): 49 ou menos: nenhum impacto, 50-55: algum impacto, 56-59: impacto substancial, 60-78 impacto severo;
• Escala de classificação nociceptiva para avaliação da intensidade média da dor da enxaqueca: 0 sem dor - 10 muito intensa;

• Lista de verificação de sintomas de alodinia (ASC-12): 0-3: alodinia cutânea leve, 6-8: alodinia cutânea moderada, 9 e superior: alodinia cutânea grave.

  5) Qualidade de vida:

• o Questionário de Qualidade de Vida Específico para Enxaqueca (MSQ): avaliação de 14 itens, com cada item classificado em uma escala de 6 pontos (variando de "nenhum tempo" a "todo o tempo"). As pontuações brutas são então transformadas em uma escala de 100 pontos, com pontuações mais altas indicando melhor qualidade de vida;
• Short Form Health Survey (SF-36): avaliação de 11 itens referentes a dois subdomínios principais, a saber, o Resumo do Componente Mental (MCS) e o Resumo do Componente Físico (PCS);

• SAÚDE 0-100: os pacientes foram solicitados a pontuar em uma escala de 0-100 seu estado geral de saúde no momento preciso da avaliação.

  6) Estado psicológico:

• Escala Hospitalar de Ansiedade e Depressão (HADS): um questionário de 14 itens em uma escala Likert de 4 pontos (0-3) avaliando sintomas de ansiedade e depressão. Uma pontuação de 8 ou mais nos dois diferentes domínios é considerada significativa para ansiedade e/ou depressão;
• Leeds Dependence Questionnaire (LDQ): um instrumento de 10 itens na escala de 0-3 para medir a dependência de uma variedade de substâncias. Nenhuma pontuação de corte indicativa de dependência foi estabelecida;
• Toronto Alexithymia Scale (TAS-20): um questionário de 20 itens em uma escala Likert de 5 pontos (1-5) que avalia os traços de alexitimia, ou seja, a dificuldade do indivíduo em expressar seus próprios sentimentos em palavras. Uma pontuação de 61 ou mais foi considerada significativa para a presença de alexitimia;
• Questionário de traumas na infância: incluindo 13 itens referentes a diferentes tipos de traumas na infância que foram considerados em termos do número total de experiências traumáticas;
• Questionário de eventos de vida estressantes: consiste em uma lista de 58 eventos de vida estressantes (por exemplo, mudança, divórcio, novo trabalho, demissão, etc.). Os pacientes foram solicitados a assinalar os eventos que lhes ocorreram nos últimos 10 anos.