Aspectos neurofisiológicos, biomoleculares y psicológicos del tratamiento con erenumab en la migraña crónica

Este estudio consistió en una primera visita de selección con un neurólogo del Centro de Ciencias del Dolor de Cabeza de la Fundación IRCCS Mondino, durante la cual se realizó un examen neurológico y general completo, y los datos recopilados en el diario de dolor de cabeza de rutina utilizado por todos los pacientes que asisten a la Fundación Mondino fueron verificado para confirmar los criterios de inclusión/exclusión.

Si un paciente cumplía con los criterios, se le inscribía en un período de observación inicial durante un mes. Al final del período de observación inicial (T0), si aún se cumplían los criterios de inclusión/exclusión, los pacientes completaron los siguientes procedimientos: registro de características clínicas y demográficas, evaluación de signos vitales, evaluación neurofisiológica y entrevista psicológica basada en DSM (The Diagnostic and Manual estático de los trastornos mentales), toma de muestras de sangre venosa y elaboración de un conjunto de cuestionarios autoadministrados sobre el estado psicológico, el estado de salud y la calidad de vida.

En T0, los pacientes fueron tratados con la primera dosis de erenumab 70 mg por vía subcutánea.

Después de 28 días (4 semanas completas), los pacientes regresaron para la segunda visita (T1) para informar variables clínicas y eventos adversos. Durante T1, se administró la segunda inyección de erenumab 70 mg, mientras que una tercera y última dosis de erenumab 70 mg fue autoadministrada en casa por los propios pacientes después de un intervalo adicional de 28 días (T2). La última visita del estudio (T3) se planeó entonces 56 días después de T1, es decir, 28 días después de la última dosis de erenumab. En T3, los pacientes fueron evaluados con la misma evaluación multidisciplinaria realizada en T0: registro de características clínicas y demográficas, evaluación de signos vitales, evaluación neurofisiológica, muestreo de sangre venosa y compilación de cuestionarios sobre el estado psicológico, el estado de salud y la calidad de los pacientes. de vida.

Mediciones del reflejo de retirada nociceptivo. El reflejo de retirada nociceptiva (NWR) se considera una técnica neurofisiológica objetiva y sólida para el estudio de la transmisión nociceptiva espinal. El reflejo fue registrado en el miembro inferior según un procedimiento bien validado, en un ambiente tranquilo por un técnico experto entre las 09:00 y las 11:00 horas. Los pacientes estaban en una posición cómoda con el tobillo flexionado a 90° y la rodilla flexionada a 130°. El nervio sural se estimuló eléctricamente detrás del maléolo lateral con un par de electrodos de superficie Ag/AgCl. La estimulación eléctrica constaba de 5 pulsos cuadrados consecutivos (1 ms, 200 Hz), entregados aleatoriamente cada 60-120 segundos. El barrido electromiográfico (Synergy, Medelec, Reino Unido) se registró a partir de la capitis brevis del bíceps femoral homolateral con un par de electrodos de superficie Ag/AgCl. Se utilizó un método de escalera para todas las evaluaciones de umbral y la intensidad se incrementó en 0,3 mA por paso. Los parámetros de registro fueron: tiempo de análisis 300 ms, sensibilidad 20 mV y filtro paso banda 3 a 3000 Hz.

Los investigadores primero evaluaron el umbral de reflejo de estímulo único de la NWR (RTh), definido como la intensidad más baja (mA) capaz de inducir 3 respuestas musculares estables consecutivas de al menos 20 mV y 10 ms. También evaluaron el AUC promedio (Área bajo la curva - mV x ms), la latencia promedio (ms) y la percepción subjetiva del dolor calificada en una escala analógica visual de 0 a 10 puntos (VAS-RTh).

Luego los investigadores evaluaron el umbral de suma temporal (TST), por medio de un tren de 5 estímulos eléctricos a una frecuencia de 2 Hz. La TST se definió como la intensidad más baja (mA) capaz de provocar 3 respuestas musculares estables consecutivas de al menos 20 mV y 10 ms en el cuarto y quinto barrido electromiográfico. También evaluaron la percepción subjetiva del dolor del primer (VAS-TST-1) y quinto (VAS-TST-5) estímulo del TST en una escala analógica visual de 0-10 puntos.

Expresión de microARN. La expresión de microARN se evaluó mediante PCR de transcripción inversa (RT) en tiempo real en células mononucleares de sangre periférica (PBMC).

Aislamiento de PBMC: se recogieron muestras de sangre (10 ml) dentro de un tubo que contenía ácido etilendiaminotetraacético de los participantes. Las muestras de sangre se diluyeron en una proporción de 1:1 con solución salina tamponada con fosfato (PBS) (Sigma). Las muestras de sangre diluida se cargaron lentamente en solución de separación de Ficoll (10 ml) (Sigma) y se centrifugaron a 800 g durante 30 min a temperatura ambiente. Las PBMC acumuladas como monocapa blanca intermedia se lavaron dos veces en PBS estéril a 300 g durante 15 min. Después del lavado, las PBMC se sedimentaron y almacenaron a -80 °C hasta su uso.

Expresión génica de microARN: el aislamiento de ARN de PBMC se llevó a cabo utilizando Direct-zol RNA Mini prep plus (Zymo Research). La concentración de ARN se determinó por absorbancia a 230 y 280 nm utilizando el espectrofotómetro NanoDrop (Nanodrop™ Thermo Fisher Scientific, Euroclone Milano). La síntesis de cDNA se realizó utilizando MirXMirna First strand Synthesis (Takara-Diatech, Jesi-An Italy) y TB Green q-Rt PCR (Takara-Diatech, Jesi-An Italy) para determinar los niveles de expresión de miRNA-34a-5p y miARN-382-5p. La desnaturalización se realizó a 95 °C y la amplificación se realizó mediante ciclos de dos pasos (95-60 °C) durante 40 ciclos con un sistema de detección de RT-PCR Light Cycler 480 Instrument (Roche, Milán, Italia). Los niveles de expresión del gen objetivo se normalizaron con U6 (un tipo de ARN nuclear pequeño), utilizado como gen de mantenimiento. Los niveles de expresión génica se calcularon de acuerdo con la fórmula 2-∆Ct = 2 - (gen Ct - gen doméstico Ct) utilizando valores Ct.

Invalidez y evaluaciones psicológicas.

La batería incluye evaluaciones de:

4) Discapacidad relacionada con la migraña y características asociadas:

• la prueba de Evaluación de Discapacidad de Migraña (MIDAS): 0-5 (grado I): discapacidad mínima, 6-10 (grado II): discapacidad leve, 11-20 (grado III): discapacidad moderada, 21-40 (grado IVa): discapacidad severa, 41 años y más (grado IVb): discapacidad muy severa;
• Headache Impact Test-6 (HIT-6): 49 o menos: ningún impacto, 50-55: algún impacto, 56-59: impacto sustancial, 60-78 impacto severo;
• Escala de calificación nociceptiva para la evaluación de la intensidad media del dolor de migraña: 0 sin dolor - 10 muy intenso;

• Lista de verificación de síntomas de alodinia (ASC-12): 0-3: alodinia cutánea leve, 6-8: alodinia cutánea moderada, 9 y más: alodinia cutánea grave.

  5) Calidad de vida:

• el Cuestionario de calidad de vida específico para la migraña (MSQ): evaluación de 14 ítems, con cada ítem calificado en una escala de 6 puntos (que van desde "ninguna vez" hasta "todo el tiempo"). Los puntajes brutos luego se transforman a una escala de 100 puntos, donde los puntajes más altos indican una mejor calidad de vida;
• Encuesta de salud de formato corto (SF-36): evaluación de 11 elementos que se refieren a dos subdominios principales, a saber, el Resumen del componente mental (MCS) y el Resumen del componente físico (PCS);

• SALUD 0-100: se pidió a los pacientes que puntuaran en un rango de escala de 0-100 su estado de salud general en el momento preciso de la evaluación.

  6) Estado Psicológico:

• Escala Hospitalaria de Ansiedad y Depresión (HADS): un cuestionario de 14 ítems en una escala de Likert de 4 puntos (0-3) que evalúa los síntomas de ansiedad y depresión. Una puntuación de 8 o más en los dos dominios diferentes se considera significativa para la ansiedad y/o la depresión;
• Cuestionario de dependencia de Leeds (LDQ): un instrumento de 10 elementos en una escala de 0 a 3 para medir la dependencia de una variedad de sustancias. No se ha establecido una puntuación de corte indicativa de dependencia;
• Escala de alexitimia de Toronto (TAS-20): un cuestionario de 20 ítems en una escala de Likert de 5 puntos (1-5) que evalúa los rasgos de alexitimia, es decir, la dificultad de las personas para expresar sus propios sentimientos con palabras. Una puntuación de 61 o más se consideró significativa para la presencia de alexitimia;
• Cuestionario de trauma infantil: incluye 13 ítems que se refieren a diferentes tipos de traumas infantiles que se consideraron en términos de número total de experiencias traumáticas;
• Cuestionario de eventos vitales estresantes: consiste en una lista de 58 eventos vitales estresantes (por ejemplo, mudanza, divorcio, nuevo trabajo, despido, etc.). Se solicitó a los pacientes que marcaran aquellos eventos que les habían ocurrido en los últimos 10 años.