Neurofyziologické, biomolekulární a psychologické aspekty léčby erenumabem u chronické migrény

Tato studie sestávala z první screeningové návštěvy neurologa z Centra pro vědu o bolestech hlavy IRCCS Mondino Foundation, během níž bylo provedeno úplné neurologické a obecné vyšetření a údaje shromážděné do rutinního deníku bolesti hlavy používaného všemi pacienty navštěvujícími Mondino Foundation byly zaškrtnuto pro potvrzení kritérií pro zařazení/vyloučení.

Pokud pacient splnil kritéria, byl zařazen do základního období pozorování po dobu jednoho měsíce. Na konci základního pozorovacího období (T0), pokud byla kritéria pro zařazení/vyloučení stále splněna, pacienti dokončili následující procedury: záznam klinických a demografických rysů, vyhodnocení vitálních funkcí, neurofyziologické posouzení a psychologický rozhovor na základě DSM (Diagnostický a Statický manuál duševních poruch), odběry žilní krve a sestavení souboru samoobslužných dotazníků o psychickém stavu, zdravotním stavu a kvalitě života.

V T0 byli pacienti léčeni první dávkou erenumabu 70 mg subkutánně.

Po 28 dnech (4 celé týdny) se pacienti vrátili na druhou návštěvu (T1), aby hlásili klinické proměnné a nežádoucí účinky. Během T1 byla podána druhá injekce erenumabu 70 mg, zatímco třetí a poslední dávka erenumabu 70 mg si pacienti sami podali doma po dalším 28denním intervalu (T2). Poslední návštěva studie (T3) pak byla plánována 56 dní od T1, tedy 28 dní po poslední dávce erenumabu. V T3 byli pacienti testováni stejným multidisciplinárním hodnocením jako v T0: záznam klinických a demografických rysů, hodnocení vitálních funkcí, neurofyziologické vyšetření, odběr žilní krve a sestavení dotazníků týkajících se psychického stavu, zdravotního stavu a kvality pacientů. života.

Měření nociceptivního abstinenčního reflexu. Nociceptivní abstinenční reflex (NWR) je považován za objektivní a solidní neurofyziologickou techniku ​​pro studium spinálního nociceptivního přenosu. Reflex byl zaznamenán na dolní končetině podle dobře ověřeného postupu v tichém prostředí odborným technikem mezi 09:00 a 11:00. Pacienti byli v pohodlné poloze s kotníkem ohnutým o 90° a kolenem o 130°. N. suralis byl elektricky stimulován za laterálním kotníkem pomocí páru Ag/AgCl povrchových elektrod. Elektrická stimulace byla provedena z 5 po sobě jdoucích čtvercových pulzů (1 ms, 200 Hz), náhodně dodávaných každých 60-120 sekund. Elektromyografický sweep (Synergy, Medelec, Velká Británie) byl zaznamenán z capitis brevis homolaterálního bicepsu femoris pomocí páru Ag/AgCl povrchových elektrod. Pro všechna prahová hodnocení byla použita schodišťová metoda a intenzita byla zvýšena o 0,3 mA na krok. Parametry záznamu byly: čas analýzy 300 ms, citlivost 20 mV a pásmová propust filtru 3 až 3000 Hz.

Vyšetřovatelé nejprve vyhodnotili práh reflexu jednoho stimulu NWR (RTh), definovaný jako nejnižší intenzita (mA), která je schopna vyvolat 3 po sobě jdoucí stabilní svalové reakce alespoň 20 mV a 10 ms. Hodnotili také průměrnou AUC (plochu pod křivkou - mV x ms), průměrnou latenci (ms) a subjektivní vnímání bolesti hodnocené na vizuální analogové škále 0-10 bodů (VAS-RTh).

Poté vyšetřovatelé vyhodnotili temporální sumační práh (TST) pomocí sledu 5 elektrických stimulů o frekvenci 2 Hz. TST byla definována jako nejnižší intenzita (mA) schopná vyvolat 3 po sobě jdoucí stabilní svalové odezvy alespoň 20 mV a 10 ms ve čtvrtém a pátém elektromyografickém cyklu. Hodnotili také subjektivní vnímání bolesti prvního (VAS-TST-1) a pátého (VAS-TST-5) stimulu TST na vizuální analogové škále 0-10 bodů.

Exprese mikroRNA. Exprese mikroRNA byla hodnocena pomocí PCR s reverzní transkripcí (RT) v reálném čase v mononukleárních buňkách periferní krve (PBMC).

Izolace PBMC: vzorky krve (10 ml) byly od účastníků odebrány do zkumavky obsahující kyselinu ethylendiamintetraoctovou. Vzorky krve byly zředěny v poměru 1:1 fyziologickým roztokem s fosfátovým pufrem (PBS) (Sigma). Zředěné vzorky krve byly pomalu naneseny do separačního roztoku Ficoll (10 ml) (Sigma) a centrifugovány při 800 g po dobu 30 minut při teplotě místnosti. PBMC nahromaděné jako střední bílá monovrstva byly dvakrát promyty sterilním PBS při 300 g po dobu 15 minut. Po promytí byly PBMC peletovány a skladovány při -80 °C až do použití.

Exprese genu MicroRNAs: izolace RNA z PBMC byla provedena pomocí Direct-zol RNA Mini prep plus (Zymo Research). Koncentrace RNA byla stanovena absorbancí při 230 a 280 nm pomocí spektrofotometru NanoDrop (Nanodrop™ Thermo Fisher Scientific, Euroclone Milano). Syntéza cDNA byla provedena pomocí MirXMirna First vlákno Synthesis (Takara-Diatech, Jesi-An Itálie) a TB Green q-Rt PCR se použila (Takara-Diatech, Jesi-An Itálie) ke stanovení hladin exprese miRNA-34a-5p. a miRNA-382-5p. Denaturace byla prováděna při 95 °C a amplifikace byla prováděna prostřednictvím dvoukrokového cyklování (95-60 °C) po 40 cyklů s detekčním systémem Light Cycler 480 Instrument RT-PCR (Roche, Milán, Itálie). Hladiny exprese cílového genu byly normalizovány pomocí U6 (typ malé jaderné RNA), použitého jako provozní gen. Hladiny genové exprese byly vypočteny podle vzorce 2-∆Ct = 2 - (Ct gen - Ct housekeeping gen) pomocí hodnot Ct.

Postižení a psychologická hodnocení.

Baterie obsahovala hodnocení pro:

4) Postižení související s migrénou a související funkce:

• test Migraine Disability Assessment (MIDAS): 0-5 (stupeň I): minimální postižení, 6-10 (stupeň II): lehké postižení, 11-20 (stupeň III): střední postižení, 21-40 (stupeň IVa): těžké postižení, 41 a vyšší (stupeň IVb): velmi těžké postižení;
• test nárazu při bolesti hlavy-6 (HIT-6): 49 nebo méně: žádný náraz, 50-55: určitý náraz, 56-59: podstatný náraz, 60-78 silný náraz;
• Nociceptivní hodnotící stupnice pro hodnocení průměrné intenzity migrénové bolesti: 0 žádná bolest - 10 velmi silná;

• Kontrolní seznam příznaků alodynie (ASC-12): 0-3: mírná kožní alodynie, 6-8: střední kožní alodynie, 9 a vyšší: těžká kožní alodynie.

  5) Kvalita života:

• dotazník kvality života specifického pro migrénu (MSQ): 14bodové hodnocení, přičemž každá položka je hodnocena na 6bodové škále (v rozsahu od „nikdy“ po „vždy“). Nezpracované skóre se pak transformuje na 100bodovou stupnici, přičemž vyšší skóre ukazuje na lepší kvalitu života;
• Short Form Health Survey (SF-36): 11bodové hodnocení týkající se dvou hlavních subdomén, jmenovitě souhrnu duševních složek (MCS) a souhrnu fyzických složek (PCS);

• ZDRAVÍ 0-100: pacienti byli požádáni, aby skórovali na škále 0-100 jejich celkový zdravotní stav v přesném okamžiku hodnocení.

  6) Psychický stav:

• Hospital Anxiety and Depression Scale (HADS): 14-položkový dotazník na 4bodové (0-3) Likertově škále hodnotící příznaky úzkosti a deprese. Skóre 8 nebo vyšší ve dvou různých doménách je považováno za významné pro úzkost a/nebo depresi;
• Leedsův dotazník závislosti (LDQ): 10položkový nástroj na stupnici 0-3 pro měření závislosti na různých látkách. Nebylo stanoveno žádné hraniční skóre indikující závislost;
• Torontská škála Alexithymie (TAS-20): dotazník o 20 položkách na 5bodové (1-5) Likertově škále hodnotící rysy alexithymie, tj. potíže jednotlivců vyjádřit své vlastní pocity slovy. Skóre 61 nebo vyšší bylo považováno za významné pro přítomnost alexithymie;
• Dotazník dětských traumat: obsahuje 13 položek odkazujících na různé typy dětských traumat, které byly uvažovány z hlediska celkového počtu traumatických zážitků;
• Dotazník stresujících životních událostí: skládající se ze seznamu 58 stresujících životních událostí (např. stěhování, rozvod, nová práce, propuštění atd.). Pacienti byli požádáni, aby zaškrtli ty události, které se jim staly za posledních 10 let.