Neurophysiologische, biomolekulare und psychologische Aspekte der Behandlung mit Erenumab bei chronischer Migräne

Diese Studie bestand aus einem ersten Screening-Besuch bei einem Neurologen des Headache Science Center der IRCCS Mondino Foundation, bei dem eine vollständige neurologische und allgemeine Untersuchung durchgeführt wurde, und die Daten wurden im routinemäßigen Kopfschmerztagebuch gesammelt, das von allen Patienten der Mondino Foundation verwendet wurde überprüft, um Einschluss-/Ausschlusskriterien zu bestätigen.

Wenn ein Patient die Kriterien erfüllte, wurde er/sie für einen Monat in eine Baseline-Beobachtungsphase aufgenommen. Wenn die Einschluss-/Ausschlusskriterien noch erfüllt waren, absolvierten die Patienten am Ende des Basisbeobachtungszeitraums (T0) die folgenden Verfahren: Aufzeichnung der klinischen und demografischen Merkmale, Bewertung der Vitalfunktionen, neurophysiologische Beurteilung und psychologisches Interview auf der Grundlage von DSM (The Diagnostic and Statical Manual of Mental Disorders), venöse Blutentnahme und Zusammenstellung einer Reihe von selbst auszufüllenden Fragebögen über psychischen Zustand, Gesundheitszustand und Lebensqualität.

Zu T0 wurden die Patienten mit der ersten subkutanen Dosis von 70 mg Erenumab behandelt.

Nach 28 Tagen (4 vollen Wochen) kehrten die Patienten zum zweiten Besuch (T1) zurück, um klinische Variablen und unerwünschte Ereignisse zu melden. Während T1 wurde die zweite Injektion von Erenumab 70 mg verabreicht, während eine dritte und letzte Dosis von Erenumab 70 mg von den Patienten nach einem weiteren 28-tägigen Intervall (T2) zu Hause selbst verabreicht wurde. Der letzte Besuch der Studie (T3) wurde dann 56 Tage nach T1 geplant, das war 28 Tage nach der letzten Erenumab-Dosis. Zu T3 wurden die Patienten mit der gleichen multidisziplinären Bewertung getestet, die zu T0 durchgeführt wurde: Aufzeichnung klinischer und demografischer Merkmale, Bewertung der Vitalfunktionen, neurophysiologische Beurteilung, venöse Blutentnahme und Zusammenstellung von Fragebögen zum psychischen Zustand, Gesundheitszustand und der Qualität der Patienten des Lebens.

Nozizeptive Rückzugsreflexmessungen. Der nozizeptive Rückzugsreflex (NWR) gilt als objektive und solide neurophysiologische Technik zur Untersuchung der spinalen nozizeptiven Übertragung. Der Reflex wurde in der unteren Extremität gemäß einem gut validierten Verfahren in einer ruhigen Umgebung von einem erfahrenen Techniker zwischen 09:00 und 11:00 Uhr aufgezeichnet. Die Patienten befanden sich in einer bequemen Position mit einem um 90° gebeugten Knöchel und einem um 130° gebeugten Knie. Der Suralnerv wurde hinter dem Außenknöchel mit einem Paar Ag/AgCl-Oberflächenelektroden elektrisch stimuliert. Die elektrische Stimulation bestand aus 5 aufeinanderfolgenden rechteckigen Impulsen (1 ms, 200 Hz), die zufällig alle 60–120 Sekunden abgegeben wurden. Der elektromyographische Sweep (Synergy, Medelec, Vereinigtes Königreich) wurde von der Capitis brevis des homolateralen Bizeps femoris mit einem Paar Ag/AgCl-Oberflächenelektroden aufgezeichnet. Für alle Schwellenauswertungen wurde ein Treppenverfahren verwendet, und die Intensität wurde um 0,3 mA pro Schritt erhöht. Die Aufnahmeparameter waren: Analysezeit 300 ms, Empfindlichkeit 20 mV und Filterbandpass 3 bis 3000 Hz.

Die Forscher bewerteten zuerst die Einzelreizreflexschwelle des NWR (RTh), definiert als die niedrigste Intensität (mA), die in der Lage ist, 3 aufeinanderfolgende stabile Muskelreaktionen von mindestens 20 mV und 10 ms zu induzieren. Sie bewerteten auch die durchschnittliche AUC (Fläche unter der Kurve – mV x ms), die durchschnittliche Latenzzeit (ms) und die subjektive Schmerzwahrnehmung, bewertet auf einer visuellen Analogskala von 0–10 Punkten (VAS-RTh).

Dann werteten die Forscher die zeitliche Summationsschwelle (TST) durch eine Folge von 5 elektrischen Reizen mit einer Frequenz von 2 Hz aus. TST wurde als die niedrigste Intensität (mA) definiert, die in der Lage war, 3 aufeinanderfolgende stabile Muskelreaktionen von mindestens 20 mV und 10 ms im vierten und fünften elektromyographischen Sweep hervorzurufen. Sie bewerteten auch die subjektive Schmerzwahrnehmung des ersten (VAS-TST-1) und fünften (VAS-TST-5) Stimulus des TST auf einer visuellen Analogskala von 0–10 Punkten.

MicroRNAs-Expression. Die microRNA-Expression wurde durch Echtzeit-Reverse-Transkription (RT)-PCR in peripheren mononukleären Blutzellen (PBMCs) bewertet.

Isolierung von PBMCs: Blutproben (10 ml) wurden in einem Röhrchen, das Ethylendiamintetraessigsäure enthielt, von den Teilnehmern gesammelt. Die Blutproben wurden im Verhältnis 1:1 mit phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) (Sigma) verdünnt. Verdünnte Blutproben wurden langsam in Ficoll-Trennlösung (10 ml) (Sigma) geladen und bei 800 g für 30 min bei Raumtemperatur zentrifugiert. Als mittlere weiße Monoschicht angesammelte PBMCs wurden zweimal in sterilem PBS bei 300 g für 15 min gewaschen. Nach dem Waschen wurden die PBMCs pelletiert und bis zur Verwendung bei –80°C gelagert.

MicroRNAs-Genexpression: Die Isolierung von RNA aus PBMCs wurde unter Verwendung des Direct-zol RNA Mini prep plus (Zymo Research) durchgeführt. Die RNA-Konzentration wurde durch Absorption bei 230 und 280 nm unter Verwendung des NanoDrop-Spektrophotometers (Nanodrop TM Thermo Fisher Scientific, Euroclone Milano) bestimmt. Die cDNA-Synthese wurde unter Verwendung von MirXMirna First Strang Synthesis (Takara-Diatech, Jesi-An, Italien) und TB Green q-Rt-PCR (Takara-Diatech, Jesi-An, Italien) durchgeführt, um die Expressionsniveaus von miRNA-34a-5p zu bestimmen und miRNA-382-5p. Die Denaturierung wurde bei 95°C durchgeführt und die Amplifikation wurde durch zweistufige Zyklen (95–60°C) für 40 Zyklen mit einem Light Cycler 480 Instrument RT-PCR Detection System (Roche, Mailand, Italien) durchgeführt. Die Zielgenexpressionsniveaus wurden mit U6 (einer Art kleiner nuklearer RNA), das als Haushaltsgen verwendet wird, normalisiert. Genexpressionsniveaus wurden gemäß der Formel 2-∆Ct = 2 – (Ct-Gen – Ct-Haushaltsgen) unter Verwendung von Ct-Werten berechnet.

Behinderung und psychologische Bewertungen.

Der Akku enthielt Auswertungen für:

4) Migränebedingte Behinderung und damit verbundene Merkmale:

• Migraine Disability Assessment (MIDAS)-Test: 0-5 (Grad I): minimale Behinderung, 6-10 (Grad II): leichte Behinderung, 11-20 (Grad III): mäßige Behinderung, 21-40 (Grad IVa): Schwerbehinderung ab 41 (Grad IVb): sehr schwere Behinderung;
• der Headache Impact Test-6 (HIT-6): 49 oder weniger: keine Auswirkung, 50–55: einige Auswirkung, 56–59: beträchtliche Auswirkung, 60–78 schwere Auswirkung;
• Nozizeptive Ratingskala zur Beurteilung der durchschnittlichen Intensität von Migräneschmerzen: 0 keine Schmerzen – 10 sehr stark;

• Allodynie-Symptom-Checkliste (ASC-12): 0-3: leichte kutane Allodynie, 6-8: mäßige kutane Allodynie, 9 und höher: schwere kutane Allodynie.

  5) Lebensqualität:

• der migränespezifische Fragebogen zur Lebensqualität (MSQ): 14-Punkte-Bewertung, wobei jeder Punkt auf einer 6-Punkte-Skala bewertet wird (von „nicht immer“ bis „immer“). Rohwerte werden dann in eine 100-Punkte-Skala umgewandelt, wobei höhere Werte eine bessere Lebensqualität anzeigen;
• Short Form Health Survey (SF-36): 11-Punkte-Bewertung, die sich auf zwei Hauptunterbereiche bezieht, nämlich die Zusammenfassung der psychischen Komponenten (MCS) und die Zusammenfassung der physischen Komponenten (PCS);

• GESUNDHEIT 0–100: Die Patienten wurden gebeten, auf einer Skala von 0–100 ihren allgemeinen Gesundheitszustand zum genauen Zeitpunkt der Bewertung zu bewerten.

  6) Psychischer Zustand:

• Hospital Anxiety and Depression Scale (HADS): ein 14-Punkte-Fragebogen auf einer 4-Punkte (0-3) Likert-Skala zur Bewertung der Symptome von Angst und Depression. Eine Punktzahl von 8 oder höher in den beiden unterschiedlichen Bereichen wird als signifikant für Angst und/oder Depression angesehen;
• Leeds Dependence Questionnaire (LDQ): ein 10-Punkte-Instrument auf einer Skala von 0-3 zur Messung der Abhängigkeit von einer Vielzahl von Substanzen. Es wurde kein Grenzwert festgelegt, der auf eine Abhängigkeit hinweist;
• Toronto Alexithymie-Skala (TAS-20): ein 20-Punkte-Fragebogen auf einer 5-Punkte (1-5) Likert-Skala zur Bewertung von Alexithymie-Merkmalen, d. h. der Schwierigkeit von Personen, ihre eigenen Gefühle in Worten auszudrücken. Ein Wert von 61 oder höher wurde als signifikant für das Vorliegen einer Alexithymie angesehen;
• Fragebogen zu Kindheitstraumata: einschließlich 13 Items, die sich auf verschiedene Arten von Kindheitstraumata beziehen, die im Hinblick auf die Gesamtzahl traumatischer Erfahrungen berücksichtigt wurden;
• Fragebogen zu belastenden Lebensereignissen: bestehend aus einer Liste von 58 belastenden Lebensereignissen (z. B. Umzug, Scheidung, neue Arbeit, Entlassung usw.). Die Patienten wurden gebeten, die Ereignisse anzukreuzen, die ihnen in den letzten 10 Jahren widerfahren waren.