Neurofizjologiczne, biomolekularne i psychologiczne aspekty leczenia erenumabem w przewlekłej migrenie

Badanie to składało się z pierwszej wizyty przesiewowej u Neurologa Centrum Nauki o Bólach Głowy Fundacji IRCCS Mondino, podczas której przeprowadzono pełne badanie neurologiczne i ogólne, a dane zebrane w rutynowym dzienniczku bólu głowy używanym przez wszystkich pacjentów zgłaszających się do Fundacji Mondino zostały zaznaczone w celu potwierdzenia kryteriów włączenia/wyłączenia.

Jeśli pacjent spełniał kryteria, był włączany do wyjściowego okresu obserwacji przez miesiąc. Pod koniec podstawowego okresu obserwacji (T0), jeśli kryteria włączenia/wyłączenia były nadal spełnione, pacjenci wykonywali następujące procedury: rejestrację cech klinicznych i demograficznych, ocenę parametrów życiowych, ocenę neurofizjologiczną oraz wywiad psychologiczny w oparciu o DSM (The Diagnostic and Statyczny Podręcznik Zaburzeń Psychicznych), pobranie krwi żylnej oraz opracowanie zestawu samodzielnie wypełnionych kwestionariuszy dotyczących stanu psychicznego, stanu zdrowia i jakości życia.

W T0 chorzy otrzymywali pierwszą dawkę erenumabu 70 mg podskórnie.

Po 28 dniach (4 pełne tygodnie) pacjenci wrócili na drugą wizytę (T1), aby zgłosić zmienne kliniczne i zdarzenia niepożądane. W T1 podawano drugie wstrzyknięcie erenumabu 70 mg, a trzecią i ostatnią dawkę erenumabu 70 mg samodzielnie w domu po dodatkowej 28-dniowej przerwie (T2). Ostatnią wizytę badania (T3) zaplanowano wówczas na 56 dni od T1, czyli 28 dni po ostatniej dawce erenumabu. W T3 pacjentów przebadano z taką samą multidyscyplinarną oceną jak w T0: rejestracją cech klinicznych i demograficznych, oceną parametrów życiowych, oceną neurofizjologiczną, pobraniem krwi żylnej i zestawieniem kwestionariuszy dotyczących stanu psychicznego, stanu zdrowia i jakości pacjentów życia.

Pomiary nocyceptywnego odruchu wycofania. Nocyceptywny odruch wycofania (NWR) jest uważany za obiektywną i solidną technikę neurofizjologiczną do badania rdzeniowej transmisji nocyceptywnej. Odruch został zarejestrowany w kończynie dolnej zgodnie z dobrze zwalidowaną procedurą, w cichym otoczeniu przez biegłego technika w godzinach od 09:00 do 11:00. Pacjenci znajdowali się w wygodnej pozycji z kostką zgiętą pod kątem 90° i kolanem zgiętą pod kątem 130°. Nerw łydkowy stymulowano elektrycznie za kostką boczną za pomocą pary elektrod powierzchniowych Ag/AgCl. Stymulację elektryczną wykonano z 5 kolejnych impulsów do kwadratu (1 ms, 200 Hz), dostarczanych losowo co 60-120 sekund. Przemiatanie elektromiograficzne (Synergy, Medelec, Wielka Brytania) zarejestrowano z capitis brevis homolateralnego mięśnia dwugłowego uda za pomocą pary elektrod powierzchniowych Ag/AgCl. Do wszystkich ocen progowych zastosowano metodę schodkową, a intensywność zwiększono o 0,3 mA na krok. Parametrami rejestracji były: czas analizy 300 ms, czułość 20 mV, pasmo przepustowe filtra od 3 do 3000 Hz.

Badacze najpierw ocenili próg odruchu pojedynczego bodźca NWR (RTh), zdefiniowany jako najniższa intensywność (mA) zdolna do wywołania 3 kolejnych stabilnych odpowiedzi mięśniowych o wartości co najmniej 20 mV i 10 ms. Oceniono również średnie AUC (obszar pod krzywą – mV x ms), średnie opóźnienie (ms) oraz subiektywne odczuwanie bólu oceniane w wizualnej skali analogowej od 0 do 10 punktów (VAS-RTh).

Następnie badacze ocenili próg sumowania czasowego (TST) za pomocą ciągu 5 bodźców elektrycznych o częstotliwości 2 Hz. TST zdefiniowano jako najniższą intensywność (mA) zdolną do wywołania 3 kolejnych stabilnych odpowiedzi mięśniowych o wartości co najmniej 20 mV i 10 ms w czwartym i piątym cyklu elektromiograficznym. Oceniali również subiektywne odczuwanie bólu pierwszego (VAS-TST-1) i piątego (VAS-TST-5) bodźca TST w wizualnej skali analogowej od 0 do 10 punktów.

Ekspresja mikroRNA. Ekspresję mikroRNA oceniono metodą PCR z odwrotną transkrypcją w czasie rzeczywistym (RT) w komórkach jednojądrzastych krwi obwodowej (PBMC).

Izolacja PBMC: próbki krwi (10 ml) pobrano od uczestników w probówce zawierającej kwas etylenodiaminotetraoctowy. Próbki krwi rozcieńczono w stosunku 1:1 solą fizjologiczną buforowaną fosforanem (PBS) (Sigma). Rozcieńczone próbki krwi powoli ładowano do roztworu rozdzielającego Ficoll (10 ml) (Sigma) i wirowano przy 800 g przez 30 minut w temperaturze pokojowej. PBMC nagromadzone jako środkowa biała pojedyncza warstwa przemyto dwukrotnie sterylnym PBS przy 300 g przez 15 minut. Po przemyciu PBMC osadzono i przechowywano w temperaturze -80°C aż do użycia.

Ekspresja genów mikroRNA: izolację RNA z PBMC przeprowadzono stosując Direct-zol RNA Mini prep plus (Zymo Research). Stężenie RNA określono przez absorbancję przy 230 i 280 nm przy użyciu spektrofotometru NanoDrop (Nanodrop™ Thermo Fisher Scientific, Euroclone Milano). Syntezę cDNA przeprowadzono przy użyciu MirXMirna First nici Synthesis (Takara-Diatech, Jesi-An Italy) i zastosowano TB Green q-Rt PCR (Takara-Diatech, Jesi-An Italy) w celu określenia poziomów ekspresji miRNA-34a-5p i miRNA-382-5p. Denaturację przeprowadzono w 95°C, a amplifikację przeprowadzono w dwuetapowych cyklach (95-60°C) przez 40 cykli z systemem Light Cycler 480 Instrument RT-PCR Detection System (Roche, Mediolan, Włochy). Docelowe poziomy ekspresji genów znormalizowano za pomocą U6 (rodzaj małego jądrowego RNA), stosowanego jako gen metabolizmu podstawowego. Poziomy ekspresji genów obliczono zgodnie ze wzorem 2-∆Ct = 2 - (gen Ct - gen metabolizmu podstawowego Ct) przy użyciu wartości Ct.

Niepełnosprawność i oceny psychologiczne.

Bateria zawierała oceny dla:

4) Niepełnosprawność związana z migreną i związane z nią cechy:

• test oceny niesprawności migreny (MIDAS): 0-5 (stopień I): niepełnosprawność minimalna, 6-10 (stopień II): niepełnosprawność lekka, 11-20 (stopień III): niepełnosprawność umiarkowana, 21-40 (stopień IVa): znaczny stopień niepełnosprawności, 41 lat i wyższy (stopień IVb): bardzo ciężki stopień niepełnosprawności;
• Headache Impact Test-6 (HIT-6): 49 lub mniej: brak uderzenia, 50-55: niewielkie uderzenie, 56-59: znaczne uderzenie, 60-78 silne uderzenie;
• Nocyceptywna Skala Oceny do oceny średniego natężenia bólu migrenowego: 0 brak bólu - 10 bardzo silny;

• Lista kontrolna objawów allodynii (ASC-12): 0-3: łagodna allodynia skórna, 6-8: umiarkowana allodynia skórna, 9 i więcej: ciężka allodynia skórna.

  5) Jakość życia:

• Kwestionariusz Jakości Życia Specyficznej dla Migreny (MSQ): 14-punktowa ocena, z każdą pozycją ocenianą w 6-punktowej skali (od „nigdy” do „cały czas”). Surowe wyniki są następnie przekształcane w 100-punktową skalę, gdzie wyższe wyniki wskazują na lepszą jakość życia;
• Skrócona Ankieta Zdrowia (SF-36): 11-punktowa ocena odnosząca się do dwóch głównych subdomen, a mianowicie Podsumowanie Komponentów Psychicznych (MCS) i Podsumowanie Komponentów Fizycznych (PCS);

• ZDROWIE 0-100: pacjenci byli proszeni o ocenę w skali od 0-100 ich ogólnego stanu zdrowia w momencie oceny.

  6) Stan psychiczny:

• Szpitalna Skala Lęku i Depresji (HADS): 14-punktowy kwestionariusz na 4-punktowej (0-3) skali Likerta oceniający objawy lęku i depresji. Wynik 8 lub wyższy w dwóch różnych domenach jest uważany za istotny dla lęku i/lub depresji;
• Kwestionariusz uzależnienia od Leeds (LDQ): 10-punktowy instrument w skali 0-3 do pomiaru uzależnienia od różnych substancji. Nie ustalono wyniku odcięcia wskazującego na uzależnienie;
• Toronto Alexithymia Scale (TAS-20): 20-itemowy kwestionariusz na 5-punktowej (1-5) skali Likerta oceniający cechy aleksytymii, tj. Trudność jednostek w wyrażaniu własnych uczuć słowami. Wynik 61 lub wyższy uznano za istotny dla obecności aleksytymii;
• Kwestionariusz traumy z dzieciństwa: zawiera 13 pozycji odnoszących się do różnych rodzajów traum z dzieciństwa, które rozpatrywano pod kątem ogólnej liczby traumatycznych doświadczeń;
• Kwestionariusz stresujących wydarzeń życiowych: składający się z listy 58 stresujących wydarzeń życiowych (np. przeprowadzka, rozwód, nowa praca, zwolnienie itp.). Pacjenci zostali poproszeni o zaznaczenie tych zdarzeń, które miały miejsce w ciągu ostatnich 10 lat.