COVID-19: 小児患者における SARS-CoV-2 腸からの脱落の感染の可能性 (INPOSIS) (INPOSIS)

バックグラウンド：

明らかな COVID-19 は、子供の頻度がはるかに低いと報告されています。 中国の研究では、10 歳未満の子供は診断的に確認された症例のわずか 0.9%、10 ～ 19 歳の子供はわずか 1.2% でした 1。 非常によく似たデータがイタリアのレジストリによって公開されており、それぞれ 0.5% と 0.7% を示しています2。 これまでに発表された 2,000 人を超える子供を対象とした最大の小児科研究では、4% が無症候性の経過をたどり、90% が軽度または中等度の臨床経過をたどり、6% の症例で重度の症状が報告され、そのほとんどは 1 歳未満の乳児でした 3。 いくつかの報告では、個々の年齢グループ内の影響を受けた子供の 16 ～ 30% が無症候性の経過をたどっていることが示されています 3,4。 発熱や空咳などの一般的な症状 (症例の 40 ～ 100%) に加えて、COVID-19 の小児 (症例の 10 ～ 30%) では下痢が頻繁に観察され、明らかな病気の成人 (症例の 4%) とは対照的です。 5-11. 糞便へのウイルスの排出は、急性感染症の回復後 1 か月以上にわたって小児で一般的に観察されました 7,10。 しかし、関連するウイルスSARS-CoVおよびMERS-CoV（中東呼吸器症候群コロナウイルス）で実証されている腸内ウイルス排出の感染力は、現在SARS-CoV-212,13では不明です。 COVID-19 は軽度または無症候性であるため、子供は病気の伝染の重要な原因となる可能性があります。 ワクチン接種を受ける大人の数が増え、さまざまな特性を示すウイルスの新しい亜種が出現するにつれて、子供の状況は確実に変化する可能性があり、再評価が必要になる可能性があります. したがって、オーストリアの病院のさまざまな小児科施設と共同で提案された研究は、小児科集団に関連する COVID-19 のさまざまな側面に対処する絶好の機会を提供します。

仮説:

• 便への SARS-CoV-2 の排出は、無症候性の子供の割合で検出可能です
• COVID-19の患者では、腸内ウイルス排泄の頻度が高く、感染後も長期間持続します
• 便と一緒に排泄されたウイルスは感染力を示す可能性があります

研究デザイン:

12 か月の研究期間中、COVID-19 とは無関係の理由で病院に入院した約 500 人の小児患者を調査することを目的としています。ウイルスを運ぶ疑いはありません。 募集される小児患者の示されている数は、概説された研究期間内に達成可能な最大数に基づいています。 現在、SARS-CoV-2 の腸排泄患者の割合を予測することはできません。 さらに、研究者は、COVID-19 の約 100 人の小児患者をスクリーニングして、腸からのウイルス排出の頻度と期間を決定します。 大多数の患者は入院時にのみ調査され、最初の分析で陽性と判定された患者からフォローアップサンプルが取得され、ウイルスが検出された期間が記録されます。 さらに、さまざまな適応症で入院した小児患者の便検体を含む、バイオレポジトリーに保存されている生体材料を分析して、分子スクリーニングによって SARS-CoV-2 の検出可能性を判断し、陽性の症例はさらなる分析の対象となります。以下に指定されているとおり。

SARS-CoV-2 の分子検査は、ドイツのレファレンス センターであるベルリンのロベルト コッホ研究所のガイドラインに従って確立された、検証および認定された RTQ-PCR アッセイによって実施されます。 臨床検体の処理は、関連するバイオセーフティ規制に沿って行われます。 特に便（および鼻咽頭スワブの可能性がある）を含む臨床検体で検出された SARS-CoV-2 病原体の感染特性の検査は、BSL3 施設で（ウィーン医科大学のウィリンガー教授と共同で）実施されます。適切な培養条件下で許容細胞株 (VeroE6、CaCo2、または HCT116)。 読み出しは、確立された RTQ-PCR テストを使用した細胞変性効果とサブゲノム mRNA の発現の記録に基づいています。

サンプルの収集と取り扱いのロジスティクス:

前向き分析 - 糞便サンプル (および咽頭、口腔、鼻、および手のひらからのスワブを含む他の部位からのさまざまな対照標本) を収集し、中央研究所 Labdia Labordiagnostik に転送するまで 4°C で保存します。 サンプルは、バイオ セーフティ規制 (UN3373) に従って迅速な配送サービス (EMS など) によって転送され、サンプルが 3 日以内 (通常は同日) に到着するようにします。 受領次第、サンプルはすぐに処理され（リン酸緩衝生理食塩水中のウイルス溶出）、分子分析にかけられます。 陽性の場合は、糞便抽出物をできるだけ早く使用して許容細胞に接種します (例: VeroE6) を BSL3 安全条件下で実行し、ウイルスの感染力を判定します。 読み出しは、細胞の細胞変性効果の評価とサブゲノム mRNA の発現に基づいて行われます。一次サンプルと分離された RNA は、Labdia の専用冷凍庫で研究終了まで -80°C で保存され、廃棄されます。その後。

回顧的分析 - Labdia Labordiagnostik のバイオレポジトリに収集および保存された生体材料

倫理的な考慮事項と統計:

患者および/またはその法定代理人、およびスタッフメンバーから、研究の倫理的承認および研究への参加に関するインフォームドコンセントが得られています。

個人データは、診断テストを実施する認定臨床検査室 Labdia Labordiagnostik でのみ利用できます。 本研究のデータ処理は、シリアル番号を割り当てることにより仮名化された方法で行われます。

この研究の主な目的に沿って、フィッシャーの正確確率検定を使用して、咽頭検体と便検体での SARS-CoV-2 の検出可能性の発生率を比較し、便検体での感染性ウイルスの発生を評価します。

期待される成果と今後の予定:

特定の小児科環境における COVID-19 に関するデータは比較的少ないため、提案された研究は、上で概説した臨床的および疫学的に関連するトピックに関する重要な洞察を提供します。 得られたデータは、ウイルスの腸内排出の感染の可能性と、さまざまな子供施設に必要な対策に対処する大規模な研究の基礎として役立ちます。

特に大便 (および場合によっては鼻咽頭スワブ) を含む臨床検体で検出された SARS-CoV-2 病原体の感染特性のテストは、適切な培養条件下で許容細胞株 (VeroE6、CaCo2、または HCT116) を使用して実行されます。 読み出しは、確立された RTQ-PCR テストを使用した細胞変性効果とサブゲノム mRNA の発現の文書化に基づいています。

一般に、サンプルの収集は、入院時に各患者の単一の時点で実行されます。 研究の前向きな部分では、ウイルスが便に排出されていることを示す COVID-19 患者からフォローアップサンプルが収集されます。 細胞変性効果とサブゲノム mRNA の発現の評価には、可能な限り新鮮なサンプルを使用します。 他のすべての場合、サンプルは-80°Cで凍結され、確立されたプロトコルを使用して後で分析されます。

臨床的な意義：

病気の症状を示さない可能性のある小児では、長期にわたる SARS-CoV-2 排出が明らかに一般的に発生しているため、根拠として、このウイルス感染の推定方法が臨床的および疫学的に関連しているかどうかを理解することが最も重要です。適切な保護手段を開発するため。 感染モードの解明は、SARS-CoV-2 の拡散を封じ込めるための現在および将来のアプローチにとって重要です。