COVID-19：儿科患者 SARS-CoV-2 肠道脱落的感染潜力 (INPOSIS) (INPOSIS)

背景：

据报道，公开的 COVID-19 在儿童中的发生率要低得多。 在中国的一项研究中，10 岁以下儿童仅占诊断确诊病例的 0.9%，10-19 岁儿童仅占 1.2%1。 意大利登记处公布的数据非常相似，分别为 0.5% 和 0.7%2。 在迄今为止发表的最大规模的儿科研究中，有超过 2000 名儿童，其中 4% 有无症状病程，90% 有轻度或中度临床病程，6% 的病例有严重表现，主要涉及 1 岁以下的婴儿3。 一些报告表明，在个别年龄组 3、4 中，多达 16-30% 的受影响儿童出现无症状病程。 除了发烧和干咳（40-100% 的病例）等常见症状外，腹泻是 COVID-19 儿童（10-30% 的病例）的常见症状，而成人有明显疾病（4%例数）5-11。 在急性感染消退后 1 个多月的时间里，通常观察到病毒排入粪便中 7、10。 然而，SARS-CoV-212,13 相关病毒 SARS-CoV 和 MERS-CoV（中东呼吸综合征冠状病毒）的肠道病毒脱落的感染潜力目前尚不清楚。 由于 COVID-19 的病程较轻甚至无症状，儿童可能是疾病传播的重要来源。 随着接种疫苗的成年人数量的增加以及显示不同特性的病毒新变种的出现，儿童的情况肯定会发生变化，可能需要重新评估。 因此，拟议的研究与奥地利医院的不同儿科机构合作，提供了一个极好的机会来解决与儿科人群有关的 COVID-19 的不同方面。

假设：

• 在一部分无症状儿童中可检测到粪便中有 SARS-CoV-2 脱落
• 在 COVID-19 患者中，肠道病毒排泄频率更高，并且在感染后持续很长时间
• 随粪便排出的病毒可能具有传染性

学习规划：

在 12 个月的研究期间，旨在调查约 500 名因与 COVID-19 无关的原因而入院的儿科患者，目的是筛查 SARS-CoV-2 排入粪便中的儿童没有被怀疑携带病毒。 所招募的儿科患者的指定数量是基于在概述的研究期间内可实现的最大数量。 目前，无法预测肠道排泄 SARS-CoV-2 的患者比例。 此外，研究人员将筛查约 100 名患有 COVID-19 的儿科患者，以确定肠道病毒脱落的频率和持续时间。 大多数患者将仅在入院时接受调查，并将在首次分析检测呈阳性的患者中获取后续样本，以记录病毒可检测性的持续时间。 此外，将分析存储在生物库中的生物材料，包括因各种适应症住院的儿科患者的粪便标本，以通过分子筛查确定 SARS-CoV-2 的可检测性，并对阳性病例进行进一步分析，如下所述。

SARS-CoV-2 的分子检测将通过经过验证和认证的 RTQ-PCR 测定法进行，该测定法是根据德国参考中心柏林罗伯特科赫研究所的指南建立的。 临床标本的处理将按照相关的生物安全法规进行。 将在 BSL3 设施中（与维也纳医科大学 Willinger 教授合作）对在临床标本中检测到的 SARS-CoV-2 病原体的感染特性进行测试，特别是粪便（和可能的鼻咽拭子）在适当的培养条件下，允许细胞系（VeroE6、CaCo2 或 HCT116）。 读数将基于使用已建立的 RTQ-PCR 测试记录的细胞病变效应和亚基因组 mRNA 的表达。

样品采集和处理物流：

前瞻性分析——粪便样本（以及来自其他部位的各种对照样本，包括来自咽、口腔、鼻子和手掌的拭子）将被收集并储存在 4°C 下，直到转移到中央实验室 Labdia Labordiagnostik。 样品将根据生物安全法规（UN3373）通过快速递送服务（EMS或类似服务）进行转移，以确保样品在三天内（通常在同一天）到达。 收到后，将立即处理样本（磷酸盐缓冲盐水中的病毒洗脱）并进行分子分析。 在阳性病例中，将尽快使用粪便提取物接种允许细胞（例如 VeroE6) 在 BSL3 安全条件下，将确定病毒的传染潜力。 读数将基于对细胞病变效应的评估和亚基因组 mRNA 的表达。初级样本和分离的 RNA 将储存在 Labdia 的 -80°C 专用冰箱中，直到研究结束，并将被丢弃此后。

回顾性分析——收集并储存在 Labdia Labdiagnostik 生物储存库中的生物材料

道德考虑和统计数据：

已获得患者和/或其法定代表以及工作人员对研究的伦理批准和参与研究的知情同意。

个人数据将仅在执行诊断测试的认证临床实验室 Labdia Labordiagnostik 中提供。 本研究的数据处理将通过分配序列号以假名的方式进行。

根据该研究的主要目标，将采用 Fisher 精确检验来比较咽部和粪便标本中 SARS-CoV-2 可检测性的发生率，并评估粪便标本中传染性病毒的发生率。

预期成果和未来计划：

由于特定儿科环境中有关 COVID-19 的数据相对缺乏，拟议研究将为上述临床和流行病学相关主题提供重要见解。 获得的数据将作为后续大规模研究的基础，以解决病毒肠道脱落的传染潜力以及各种儿童设施所需的措施。

将在适当的培养条件下使用允许细胞系（VeroE6、CaCo2 或 HCT116）对临床标本（尤其是粪便（可能还有鼻咽拭子））中检测到的 SARS-CoV-2 病原体的感染特性进行测试。 读数将基于使用已建立的 RTQ-PCR 测试记录的细胞病变效应和亚基因组 mRNA 的表达

一般来说，样本的收集将在每位患者入院后的单一时间点进行。 在该研究的前瞻性部分中，将从 COVID-19 患者身上收集后续样本，这些患者显示有病毒脱落到粪便中。 为了评估细胞病变效应和亚基因组 mRNA 的表达，将尽可能使用新鲜样品。 在所有其他情况下，样品将在 -80°C 下冷冻，并在稍后使用既定方案进行分析。

临床意义：

由于可能没有任何疾病症状的儿童肠道 SARS-CoV-2 长时间排毒显然很常见，因此了解这种假定的病毒传播方式是否具有临床和流行病学相关性至关重要，以此作为基础制定适当的保护措施。 阐明传播模式对于当前和未来遏制 SARS-CoV-2 传播的方法至关重要。