COVID-19: Potencial infeccioso de la eliminación intestinal del SARS-CoV-2 en pacientes pediátricos (INPOSIS) (INPOSIS)

Fondo:

Según los informes, el COVID-19 manifiesto es niños mucho menos frecuentes. En un estudio de China, los niños menores de 10 años representaron solo el 0,9 % y los niños entre 10 y 19 años solo el 1,2 % de los casos confirmados por diagnóstico1. Datos muy similares fueron publicados por el registro italiano, indicando 0,5% y 0,7%, respectivamente2. En el estudio pediátrico más grande publicado hasta la fecha que incluyó a más de 2000 niños, el 4 % tuvo cursos asintomáticos, el 90 % tuvo cursos clínicos leves o moderados y se documentaron manifestaciones graves en el 6 % de los casos, en su mayoría en lactantes menores de 1 año3. Algunos informes indicaron cursos asintomáticos en hasta el 16-30% de los niños afectados dentro de los grupos de edad individuales3,4. Además de síntomas comunes como fiebre y tos seca (40-100% de los casos), la diarrea fue una observación frecuente en niños con COVID-19 (10-30% de los casos), en contraste con adultos con enfermedad manifiesta (4% de casos) 5-11. La eliminación del virus en las heces se observó comúnmente en niños durante más de un mes después de la resolución de la infección aguda7,10. Sin embargo, el potencial infeccioso de la excreción intestinal de virus, que se ha demostrado para los virus relacionados SARS-CoV y MERS-CoV (coronavirus del síndrome respiratorio de Oriente Medio), actualmente no está claro para el SARS-CoV-212,13. Debido a los cursos leves o incluso asintomáticos de COVID-19, los niños pueden representar una fuente importante de transmisión de enfermedades. Con el número cada vez mayor de adultos que se vacunan y la aparición de nuevas variantes del virus que muestran diferentes propiedades, la situación en los niños ciertamente podría cambiar y es posible que deba reevaluarse. Por lo tanto, el estudio propuesto en colaboración con diferentes instalaciones pediátricas en hospitales austriacos ofrece una excelente oportunidad para abordar diferentes aspectos de COVID-19 relacionados con la población pediátrica.

Hipótesis:

• La eliminación de SARS-CoV-2 en las heces es detectable en una proporción de niños asintomáticos
• En pacientes con COVID-19, la frecuencia de excreción intestinal del virus es mayor y persiste por periodos de tiempo prolongados post infección
• Los virus excretados con las heces pueden mostrar potencial infeccioso

Diseño del estudio:

Durante el período de estudio de 12 meses, se pretende investigar ~500 pacientes pediátricos ingresados ​​en el hospital por motivos no relacionados con COVID-19, con el objetivo de detectar la aparición de SARS-CoV-2 en las heces en niños que no se sospecha que portan el virus. El número indicado de pacientes pediátricos que se reclutarán se basa en el número máximo alcanzable dentro del período de estudio descrito. Actualmente, no es posible predecir la proporción de pacientes con excreción intestinal de SARS-CoV-2. Además, los investigadores evaluarán a ~100 pacientes pediátricos con COVID-19 para determinar la frecuencia y la duración de la diseminación intestinal del virus. La mayoría de los pacientes solo serán investigados al ingresar al hospital y se obtendrán muestras de seguimiento en pacientes que dieron positivo en el primer análisis para documentar la duración de la detectabilidad del virus. Además, el biomaterial almacenado en un biodepósito, incluidas muestras de heces de pacientes pediátricos que fueron hospitalizados por una variedad de indicaciones, se analizará para determinar la detectabilidad del SARS-CoV-2 mediante detección molecular, y los casos positivos se someterán a análisis adicionales. como se especifica a continuación.

Las pruebas moleculares de SARS-CoV-2 se realizarán mediante un ensayo RTQ-PCR validado y certificado establecido de acuerdo con las pautas del centro de referencia alemán, el Instituto Robert Koch en Berlín. El procesamiento de muestras clínicas se llevará a cabo de acuerdo con las normas de bioseguridad pertinentes. Las pruebas de propiedades infecciosas de los patógenos del SARS-CoV-2 detectados en muestras clínicas, incluidas particularmente heces (y posiblemente hisopos nasofaríngeos), se llevarán a cabo en una instalación BSL3 (en colaboración con el Prof. Dr. Willinger, Universidad Médica de Viena) mediante el uso de líneas celulares permisivas (VeroE6, CaCo2 o HCT116) en condiciones de cultivo apropiadas. La lectura se basará en la documentación de los efectos citopáticos celulares y la expresión del ARNm subgenómico utilizando pruebas RTQ-PCR establecidas.

Logística de recogida y manipulación de muestras:

Análisis prospectivos: las muestras de heces (y varias muestras de control de otros sitios, incluidos hisopos de la faringe, la cavidad oral, la nariz y las palmas) se recolectarán y almacenarán a 4 °C hasta que se transfieran al laboratorio central, Labdia Labordiagnostik. Las muestras se transferirán de acuerdo con las normas de bioseguridad (UN3373) mediante un servicio de entrega rápida (EMS o similar), para garantizar la llegada de las muestras en un plazo de tres días (normalmente el mismo día). Una vez recibidas, las muestras se procesarán inmediatamente (elución del virus en solución salina tamponada con fosfato) y se someterán a análisis molecular. En casos positivos, los extractos de heces se utilizarán lo más rápido posible para inocular células permisivas (p. VeroE6) bajo condiciones de seguridad BSL3, y se determinará el potencial infeccioso de los virus. La lectura se basará en la evaluación de los efectos citopáticos celulares y en la expresión del ARNm subgenómico. Las muestras primarias y el ARN aislado se almacenarán en Labdia en un congelador dedicado a -80 °C hasta el final del estudio y se desecharán. después de eso.

Análisis retrospectivos: biomaterial que se recolectó y almacenó en un biodepósito de Labdia Labordiagnostik

Consideraciones éticas y estadísticas:

Se ha obtenido la aprobación ética para el estudio y el consentimiento informado para la participación en el estudio de los pacientes y/o sus representantes legales, así como de los miembros del personal.

Los datos personales estarán disponibles exclusivamente en el laboratorio clínico certificado, Labdia Labordiagnostik, que realiza las pruebas de diagnóstico. El procesamiento de datos para el presente estudio se realizará de forma seudonimizada mediante la asignación de números de serie.

De acuerdo con los objetivos principales del estudio, se empleará la prueba exacta de Fisher para comparar la incidencia de la detectabilidad del SARS-CoV-2 en muestras de faringe y heces, y para evaluar la aparición de virus infecciosos en muestras de heces.

Resultado esperado y planes futuros:

Debido a la relativa escasez de datos sobre COVID-19 en entornos pediátricos específicos, el estudio propuesto proporcionará información importante sobre los temas relevantes desde el punto de vista clínico y epidemiológico descritos anteriormente. Los datos obtenidos servirán de base para posteriores estudios a gran escala que aborden el potencial infeccioso de la diseminación intestinal del virus y las medidas necesarias para varias instalaciones infantiles.

Las pruebas de las propiedades infecciosas de los patógenos del SARS-CoV-2 detectados en muestras clínicas, incluidas en particular las heces (y posiblemente los hisopos nasofaríngeos), se realizarán mediante el uso de líneas celulares permisivas (VeroE6, CaCo2 o HCT116) en condiciones de cultivo apropiadas. La lectura se basará en la documentación de los efectos citopáticos celulares y la expresión del ARNm subgenómico utilizando pruebas RTQ-PCR establecidas.

Con carácter general, la recogida de muestras se realizará en un único momento en cada paciente, en el momento del ingreso en el hospital. Dentro de la parte prospectiva del estudio, se recolectarán muestras de seguimiento de pacientes con COVID-19 que muestren la diseminación del virus en las heces. Para la evaluación de los efectos citopáticos y la expresión de ARNm subgenómico, se utilizarán muestras frescas, siempre que sea posible. En todos los demás casos, las muestras se congelarán a -80 °C y se analizarán en un punto posterior utilizando un protocolo establecido.

Significación clínica:

Debido a la ocurrencia aparentemente común de excreción intestinal prolongada de SARS-CoV-2 en niños, que pueden no mostrar ningún síntoma de enfermedad, es de suma importancia comprender si esta supuesta forma de transmisión del virus tiene relevancia clínica y epidemiológica, como base. para desarrollar las medidas de protección adecuadas. La aclaración de los modos de transmisión es fundamental para los enfoques actuales y futuros para contener la propagación del SARS-CoV-2.