COVID-19: Potencial Infeccioso de Excreção Intestinal de SARS-CoV-2 em Pacientes Pediátricos (INPOSIS) (INPOSIS)

Fundo:

O COVID-19 aberto é declaradamente muito menos frequente em crianças. Em um estudo da China, crianças <10 anos de idade representaram apenas 0,9% e crianças entre 10-19 anos de idade apenas 1,2% dos casos diagnosticados confirmados1. Dados muito semelhantes foram publicados pelo registro italiano, indicando 0,5% e 0,7%, respectivamente2. No maior estudo pediátrico publicado até o momento, incluindo mais de 2.000 crianças, 4% tiveram cursos assintomáticos, 90% tiveram cursos clínicos leves ou moderados e manifestações graves foram documentadas em 6% dos casos, principalmente envolvendo lactentes com menos de 1 ano de idade3. Alguns relatórios indicaram cursos assintomáticos em até 16-30% das crianças afetadas dentro de faixas etárias individuais3,4. Além de sintomas comuns como febre e tosse seca (40-100% dos casos), a diarreia foi uma observação frequente em crianças com COVID-19 (10-30% dos casos), em contraste com adultos com doença manifesta (4% dos casos). de casos) 5-11. A eliminação do vírus nas fezes foi comumente observada em crianças por mais de um mês após a resolução da infecção aguda7,10. No entanto, o potencial infeccioso da disseminação do vírus intestinal, demonstrado para os vírus relacionados SARS-CoV e MERS-CoV (coronavírus da síndrome respiratória do Oriente Médio), atualmente não está claro para o SARS-CoV-212,13. Devido aos cursos leves ou mesmo assintomáticos do COVID-19, as crianças podem representar uma importante fonte de transmissão da doença. Com o aumento do número de adultos vacinados e o surgimento de novas variantes do vírus com diferentes propriedades, a situação das crianças certamente pode mudar e precisa ser reavaliada. O estudo proposto em colaboração com diferentes instalações pediátricas em hospitais austríacos oferece, portanto, uma excelente oportunidade para abordar diferentes aspectos do COVID-19 pertencentes à população pediátrica.

Hipóteses:

• A eliminação de SARS-CoV-2 nas fezes é detectável em uma proporção de crianças assintomáticas
• Em pacientes com COVID-19, a frequência de excreção viral intestinal é maior e persiste por períodos prolongados após a infecção
• Vírus excretados com as fezes podem apresentar potencial infeccioso

Design de estudo:

Durante o período de estudo de 12 meses, pretende-se investigar ~500 pacientes pediátricos admitidos no hospital por motivos não relacionados ao COVID-19, com o objetivo de rastrear a ocorrência de disseminação de SARS-CoV-2 nas fezes em crianças que não são suspeitos de portar o vírus. O número indicado de pacientes pediátricos a serem recrutados é baseado no número máximo alcançável dentro do período de estudo delineado. Atualmente, não é possível prever a proporção de pacientes com excreção intestinal de SARS-CoV-2. Além disso, os investigadores farão a triagem de cerca de 100 pacientes pediátricos com COVID-19 para determinar a frequência e a duração da disseminação do vírus intestinal. A maioria dos pacientes só será investigada na admissão ao hospital e amostras de acompanhamento serão obtidas em pacientes que testaram positivo na primeira análise para documentar a duração da detectabilidade do vírus. Além disso, o biomaterial armazenado em um biorrepositório, incluindo amostras de fezes de pacientes pediátricos hospitalizados por diversas indicações, será analisado para determinar a detectabilidade do SARS-CoV-2 por triagem molecular, e os casos positivos serão submetidos a análises adicionais, conforme especificado abaixo.

O teste molecular do SARS-CoV-2 será realizado por um ensaio RTQ-PCR validado e certificado, estabelecido de acordo com as diretrizes do centro de referência alemão, o Robert Koch Institute em Berlim. O processamento de amostras clínicas será realizado de acordo com os regulamentos de biossegurança pertinentes. O teste de propriedades infecciosas de patógenos SARS-CoV-2 detectados em espécimes clínicos, incluindo particularmente fezes (e zaragatoas potencialmente nasofaríngeas), será realizado em uma instalação BSL3 (em colaboração com o Prof. Dr. Willinger, Medical University of Vienna) usando linhas celulares permissivas (VeroE6, CaCo2 ou HCT116) sob condições de cultura apropriadas. A leitura será baseada na documentação dos efeitos citopáticos celulares e na expressão do mRNA subgenômico usando testes RTQ-PCR estabelecidos.

Logística de coleta e manuseio de amostras:

Análises prospectivas - amostras de fezes (e várias amostras de controle de outros locais, incluindo zaragatoas da faringe, cavidade oral, nariz e palmas das mãos) serão coletadas e armazenadas a 4°C até a transferência para o laboratório central, Labdia Labordiagnostik. As amostras serão transferidas de acordo com os regulamentos de biossegurança (UN3373) por um serviço de entrega rápida (EMS ou similar), para garantir a chegada das amostras em três dias (geralmente no mesmo dia). Após o recebimento, as amostras serão processadas imediatamente (eluição do vírus em solução salina tamponada com fosfato) e submetidas à análise molecular. Em casos positivos, extratos de fezes serão usados ​​o mais rápido possível para inocular células permissivas (por exemplo, VeroE6) sob condições de segurança BSL3, e o potencial infeccioso dos vírus será determinado. A leitura será baseada na avaliação dos efeitos citopáticos celulares e na expressão de mRNA subgenômico. As amostras primárias e o RNA isolado serão armazenados no Labdia em um freezer dedicado a -80°C até o final do estudo, e serão descartados Depois disso.

Análises retrospectivas - biomaterial que foi coletado e armazenado em um biorrepositório do Labdia Labordiagnostik

Considerações éticas e estatísticas:

A aprovação ética para o estudo e o consentimento informado para participação no estudo foram obtidos dos pacientes e/ou seus representantes legais, bem como dos membros da equipe.

Os dados pessoais estarão disponíveis exclusivamente no laboratório clínico certificado, Labdia Labordiagnostik, realizando o teste de diagnóstico. O processamento de dados para o presente estudo será feito de forma pseudonimizada por meio da atribuição de números de série.

Em consonância com os principais objetivos do estudo, o teste exato de Fisher será empregado para comparar a incidência de detectabilidade de SARS-CoV-2 em amostras de faringe e fezes e para avaliar a ocorrência de vírus infeccioso em amostras de fezes.

Resultado esperado e planos futuros:

Devido à relativa escassez de dados sobre COVID-19 em contextos pediátricos específicos, o estudo proposto fornecerá informações importantes sobre os tópicos clinicamente e epidemiologicamente relevantes descritos acima. Os dados obtidos servirão de base para estudos posteriores em larga escala abordando o potencial infeccioso da excreção intestinal do vírus e as medidas necessárias para diversas instituições infantis.

O teste de propriedades infecciosas de patógenos SARS-CoV-2 detectados em amostras clínicas, incluindo particularmente fezes (e potencialmente zaragatoas nasofaríngeas), será realizado usando linhas celulares permissivas (VeroE6, CaCo2 ou HCT116) sob condições de cultura apropriadas. A leitura será baseada na documentação dos efeitos citopáticos celulares e na expressão do mRNA subgenômico usando testes RTQ-PCR estabelecidos

Em geral, a coleta de amostras será realizada em um único momento em cada paciente, no momento da admissão no hospital. Na parte prospectiva do estudo, amostras de acompanhamento serão coletadas de pacientes com COVID-19 que apresentem disseminação do vírus nas fezes. Para a avaliação dos efeitos citopáticos e expressão do mRNA subgenômico, amostras frescas serão utilizadas, sempre que possível. Em todos os outros casos, as amostras serão congeladas a -80°C e analisadas posteriormente usando um protocolo estabelecido.

Significado clínico:

Devido à ocorrência aparentemente comum de excreção intestinal prolongada de SARS-CoV-2 em crianças, que podem não apresentar sintomas da doença, é de suma importância entender se essa suposta forma de transmissão do vírus tem relevância clínica e epidemiológica, como base para o desenvolvimento de medidas de proteção adequadas. A elucidação dos modos de transmissão é crítica para as abordagens atuais e futuras para a contenção da propagação do SARS-CoV-2.