COVID-19: A SARS-CoV-2 intestinalis leválásának fertőző lehetősége gyermekbetegeknél (INPOSIS) (INPOSIS)

Háttér:

A jelentések szerint a COVID-19 sokkal ritkábban fordul elő gyermekeknél. Egy kínai tanulmányban a 10 év alatti gyermekek csak 0,9%-át, a 10-19 év közötti gyermekek pedig csak 1,2%-át tették ki a diagnosztikailag megerősített eseteknek1. Nagyon hasonló adatokat közölt az olasz nyilvántartás is, 0,5%-ot, illetve 0,7%-ot2. Az eddig megjelent legnagyobb, több mint 2000 gyermeket magában foglaló gyermekgyógyászati ​​vizsgálatban 4%-uk tünetmentes, 90%-uk enyhe vagy közepesen súlyos klinikai lefolyású volt, és az esetek 6%-ában súlyos megnyilvánulásokat dokumentáltak, többnyire 1 évesnél fiatalabb csecsemőket3. Egyes jelentések tünetmentes lefolyást jeleztek az egyes korcsoportokon belül az érintett gyermekek 16-30%-ánál3,4. Az olyan gyakori tünetek mellett, mint a láz és a száraz köhögés (az esetek 40-100%-a), a hasmenés gyakori megfigyelés volt a COVID-19-ben szenvedő gyermekeknél (az esetek 10-30%-a), ellentétben a nyilvánvaló betegségben szenvedő felnőttekkel (4%). esetek) 5-11. A vírus székletbe ürülését gyakran figyelték meg gyermekeknél több mint egy hónapig az akut fertőzés megszűnése után7,10. A SARS-CoV és a MERS-CoV (Közel-Kelet légzőszervi szindróma koronavírusa) rokon vírusok esetében kimutatott bélvírus-szórás fertőző potenciálja azonban jelenleg nem világos a SARS-CoV-212,13 esetében. A COVID-19 enyhe vagy akár tünetmentes lefolyása miatt a gyermekek a betegségek terjedésének fontos forrását jelenthetik. A beoltott felnőttek növekvő számával és a vírus eltérő tulajdonságokkal rendelkező új változatainak megjelenésével a gyermekek helyzete minden bizonnyal megváltozhat, és át kell értékelni. Az osztrák kórházak különböző gyermekgyógyászati ​​intézményeivel együttműködve javasolt tanulmány ezért kiváló lehetőséget kínál a COVID-19 gyermekpopulációra vonatkozó különböző aspektusainak kezelésére.

Hipotézisek:

• A SARS-CoV-2 székletbe ürítése a tünetmentes gyermekek egy részében kimutatható
• A COVID-19-ben szenvedő betegeknél a bélrendszeri vírus kiválasztásának gyakorisága magasabb, és a fertőzés után hosszabb ideig fennáll.
• A széklettel kiválasztott vírusok fertőzőképesek lehetnek

Dizájnt tanulni:

A 12 hónapos vizsgálati időszak alatt a tervek szerint kb. 500, a COVID-19-hez nem kapcsolódó okok miatt kórházba került gyermekbeteget vizsgálnak meg azzal a céllal, hogy kiszűrjék a SARS-CoV-2 előfordulását a székletbe olyan gyermekeknél, akik nem gyaníthatóan vírushordozók. A toborozandó gyermekbetegek jelzett száma a vázolt vizsgálati időszakon belül elérhető maximális számon alapul. Jelenleg nem lehet megjósolni azon betegek arányát, akiknél a SARS-CoV-2 bélrendszeren keresztül ürül ki. Ezenkívül a kutatók körülbelül 100 COVID-19-ben szenvedő gyermekbeteget szűrnek, hogy meghatározzák a bélvírus terjedésének gyakoriságát és időtartamát. A betegek többségét csak a kórházba kerüléskor vizsgálják meg, és nyomon követési mintákat vesznek azokból a betegekből, akiknél az első elemzésnél pozitív lett, hogy dokumentálják a vírus kimutathatóságának időtartamát. Ezen túlmenően a bioraktárban tárolt bioanyagokat, beleértve a különféle indikációk miatt kórházba került gyermekgyógyászati ​​betegek székletmintáit, elemezni fogják, hogy meghatározzák a SARS-CoV-2 molekuláris szűréssel történő kimutathatóságát, és a pozitív eseteket további elemzésnek vetik alá, az alábbiakban meghatározottak szerint.

A SARS-CoV-2 molekuláris tesztelését a német referenciaközpont, a berlini Robert Koch Institute irányelvei szerint kialakított, validált és tanúsított RTQ-PCR vizsgálattal végzik. A klinikai minták feldolgozása a vonatkozó biológiai biztonsági előírásokkal összhangban történik. A SARS-CoV-2 kórokozók fertőző tulajdonságainak vizsgálatát klinikai mintákban, különösen a székletben (és potenciálisan a nasopharyngealis tamponban) egy BSL3-as létesítményben (Prof. Dr. Willingerrel együttműködve, Bécsi Orvostudományi Egyetem) végzik. permisszív sejtvonalakat (VeroE6, CaCo2 vagy HCT116) megfelelő tenyésztési körülmények között. A leolvasás a sejt citopátiás hatásainak és a szubgenomikus mRNS expressziójának dokumentálásán alapul, bevált RTQ-PCR tesztekkel.

Mintagyűjtés és -kezelés logisztika:

Prospektív elemzések – a székletmintákat (és különböző kontrollmintákat más helyekről, beleértve a garatból, a szájüregből, az orrból és a tenyérből vett tamponokat) gyűjtik, és 4°C-on tárolják a központi laboratóriumba, a Labdia Labordiagnostikba történő átvitelig. A mintákat a biológiai biztonsági előírásoknak (UN3373) megfelelően gyorspostaszolgálat (EMS vagy hasonló) szállítja át, hogy a minták három napon belül (általában ugyanazon a napon) megérkezzenek. Az átvételt követően a mintákat azonnal feldolgozzák (víruselúció foszfáttal pufferolt sóoldatban), és molekuláris elemzésnek vetik alá. Pozitív esetekben a székletkivonatokat a lehető leggyorsabban fel kell használni a permisszív sejtek beoltására (pl. VeroE6) BSL3 biztonsági feltételek mellett, és meghatározzák a vírusok fertőzőképességét. A leolvasás a sejt citopátiás hatásainak értékelésén és a szubgenomikus mRNS expresszióján alapul. Az elsődleges mintákat és az izolált RNS-t a Labdiában egy erre a célra kialakított fagyasztóban -80 °C-on tárolják a vizsgálat végéig, és eldobják ezután.

Retrospektív elemzések – bioanyag, amelyet a Labdia Labordiagnostik biotárolójában gyűjtöttek és tároltak

Etikai megfontolások és statisztikák:

A vizsgálat etikai jóváhagyása és a vizsgálatban való részvételhez a betegek és/vagy törvényes képviselőik, valamint a személyzet tagjai beleegyezését kérték.

A személyes adatok kizárólag a diagnosztikai vizsgálatot végző Labdia Labordiagnostik minősített klinikai laboratóriumban lesznek elérhetőek. Jelen tanulmány adatfeldolgozása pszeudonimizált módon, sorszámozással történik.

A tanulmány fő céljaival összhangban Fisher-féle egzakt tesztet alkalmaznak a SARS-CoV-2 kimutathatóság gyakoriságának összehasonlítására garat- és székletmintákban, valamint a fertőző vírus előfordulásának értékelésére a székletmintákban.

Várható eredmény és jövőbeli tervek:

Tekintettel arra, hogy a COVID-19 betegséggel kapcsolatos adatok relatíve csekélyek bizonyos gyermekgyógyászati ​​körülmények között, a javasolt tanulmány fontos betekintést nyújt a fent vázolt klinikailag és epidemiológiailag releváns témákba. A kapott adatok alapul szolgálnak majd a nagyszabású tanulmányokhoz, amelyek a vírus bélrendszeri elterjedésének fertőző lehetőségét, valamint a különböző gyermekintézményekhez szükséges intézkedéseket vizsgálják.

A SARS-CoV-2 kórokozók fertőző tulajdonságainak vizsgálatát klinikai mintákban, különösen a székletben (és potenciálisan az orrgarat-tamponban) permisszív sejtvonalak (VeroE6, CaCo2 vagy HCT116) alkalmazásával, megfelelő tenyésztési körülmények között kell elvégezni. A leolvasás a sejt citopátiás hatásainak és a szubgenomikus mRNS expressziójának dokumentálásán alapul, bevált RTQ-PCR tesztekkel

Általánosságban elmondható, hogy a minták gyűjtése minden betegnél egyetlen időpontban történik, a kórházba való felvételkor. A vizsgálat leendő részében nyomon követési mintákat gyűjtenek azoktól a COVID-19-ben szenvedő betegektől, akiknél a vírus a székletbe ürül. A citopátiás hatások és a szubgenomikus mRNS expressziójának értékeléséhez lehetőség szerint friss mintákat használnak. Minden más esetben a mintákat -80 °C-on lefagyasztják, és egy későbbi időpontban elemzik egy megállapított protokoll szerint.

Klinikai jelentősége:

Mivel a SARS-CoV-2 elhúzódó bélrendszeri váladékozása láthatóan gyakori előfordulása olyan gyermekeknél, akiknél előfordulhat, hogy nem mutatnak betegségtüneteket, kiemelten fontos annak megértése, hogy a vírus terjedésének ez a feltételezett módja klinikai és epidemiológiai jelentőséggel bír-e. megfelelő védelmi intézkedések kidolgozása érdekében. Az átviteli módok tisztázása kritikus fontosságú a SARS-CoV-2 terjedésének megfékezésére irányuló jelenlegi és jövőbeli megközelítések szempontjából.