COVID-19: SARS-CoV-2:n intestinaalisen irtoamisen mahdollisuus lapsipotilailla (INPOSIS) (INPOSIS)

Tausta:

Ilmeisen COVID-19:n kerrotaan olevan paljon harvemmin lapsia. Kiinassa tehdyssä tutkimuksessa alle 10-vuotiaita lapsia oli vain 0,9 % ja 10–19-vuotiaita vain 1,2 % diagnostisesti vahvistetuista tapauksista1. Italian rekisteri julkaisi hyvin samankaltaisia ​​tietoja, jotka osoittavat vastaavasti 0,5 % ja 0,7 %2. Suurimmassa tähän mennessä julkaistussa pediatrisessa tutkimuksessa, johon kuului yli 2000 lasta, 4 %:lla oli oireettomia, 90 %:lla lieviä tai kohtalaisia ​​kliinisiä kulkuja, ja vakavia oireita dokumentoitiin 6 %:ssa tapauksista, useimmiten alle 1-vuotiailla pikkulapsilla3. Joidenkin raporttien mukaan oireeton kulku jopa 16–30 %:lla lapsista yksittäisissä ikäryhmissä3,4. Yleisten oireiden, kuten kuumeen ja kuivan yskän (40–100 % tapauksista) lisäksi ripuli oli usein havaittu COVID-19:ää sairastavilla lapsilla (10–30 % tapauksista), toisin kuin aikuisilla, joilla oli selvä sairaus (4 % tapauksista). tapauksista) 5-11. Lapsilla havaittiin yleisesti viruksen leviämistä ulosteeseen yli kuukauden ajan akuutin infektion häviämisen jälkeen7,10. Kuitenkin suoliston viruksen leviämisen tarttuva potentiaali, joka on osoitettu sukulaisviruksille SARS-CoV ja MERS-CoV (Lähi-idän hengitystieoireyhtymän koronavirus), on tällä hetkellä epäselvä SARS-CoV-212,13:lle. COVID-19:n lievän tai jopa oireettoman kulun vuoksi lapset voivat olla tärkeä taudin leviämisen lähde. Kun rokotettujen aikuisten määrä kasvaa ja viruksen uusia muunnelmia, joilla on erilaisia ​​ominaisuuksia, ilmaantuu, lasten tilanne saattaa varmasti muuttua ja se on ehkä arvioitava uudelleen. Ehdotettu tutkimus yhteistyössä itävaltalaisten sairaaloiden eri pediatristen laitosten kanssa tarjoaa siksi erinomaisen mahdollisuuden käsitellä COVID-19:n eri näkökohtia, jotka koskevat lapsiväestöä.

Hypoteesit:

• SARS-CoV-2:n leviäminen ulosteeseen on havaittavissa osalla oireettomista lapsista
• COVID-19-potilailla suolistoviruksen erittymistiheys on suurempi ja jatkuu pitkiä aikoja infektion jälkeen
• Virukset, jotka erittyvät ulosteen mukana, voivat olla tarttuvia

Opintojen suunnittelu:

12 kuukauden tutkimusjakson aikana on tarkoitus tutkia ~500 lapsipotilasta, jotka on otettu sairaalaan COVID-19:stä riippumattomista syistä, tavoitteena seuloa SARS-CoV-2:n leviämistä ulosteeseen lapsilla, jotka joiden ei epäillä kantavan virusta. Ilmoitettu rekrytoitavien lapsipotilaiden lukumäärä perustuu enimmäismäärään, joka voidaan saavuttaa hahmotellun tutkimusjakson aikana. Tällä hetkellä ei ole mahdollista ennustaa niiden potilaiden osuutta, joilla SARS-CoV-2 erittyy suolistossa. Lisäksi tutkijat seulovat noin 100 lapsipotilasta, joilla on COVID-19, määrittääkseen suoliston viruksen leviämisen tiheyden ja keston. Suurin osa potilaista tutkitaan vasta sairaalaan saapumisen yhteydessä, ja seurantanäytteet otetaan potilaista, joiden testi oli positiivinen ensimmäisessä analyysissä, jotta voidaan dokumentoida viruksen havaittavuuden kesto. Lisäksi biovarastossa säilytetty biomateriaali, mukaan lukien ulostenäytteet lapsipotilailta, jotka joutuivat sairaalaan eri indikaatioiden vuoksi, analysoidaan SARS-CoV-2:n havaittavuuden määrittämiseksi molekyyliseulonnalla, ja positiivisista tapauksista tehdään lisäanalyysejä. kuten alla on määritelty.

SARS-CoV-2:n molekyylitestaus suoritetaan validoidulla ja sertifioidulla RTQ-PCR-määrityksellä, joka on laadittu saksalaisen referenssikeskuksen, Berliinin Robert Koch -instituutin ohjeiden mukaisesti. Kliinisten näytteiden käsittely suoritetaan asiaankuuluvien bioturvallisuusmääräysten mukaisesti. Kliinisistä näytteistä, mukaan lukien erityisesti ulosteesta (ja mahdollisesti nenänielun vanupuikoista) havaittujen SARS-CoV-2-patogeenien tarttuvien ominaisuuksien testaus suoritetaan BSL3-laitoksessa (yhteistyössä professori Dr. Willingerin kanssa Wienin lääketieteellisestä yliopistosta) käyttämällä sallivia solulinjoja (VeroE6, CaCo2 tai HCT116) sopivissa viljelyolosuhteissa. Lukema perustuu solusytopaattisten vaikutusten ja subgenomisen mRNA:n ilmentymisen dokumentointiin vakiintuneiden RTQ-PCR-testien avulla.

Näytteenotto ja käsittelylogistiikka:

Prospektiiviset analyysit - Ulostenäytteet (ja erilaiset kontrollinäytteet muista paikoista, mukaan lukien vanupuikkoja nielusta, suuontelosta, nenästä ja kämmenistä) kerätään ja säilytetään 4 °C:ssa, kunnes ne siirretään keskuslaboratorioon, Labdia Labordiagnostik. Näytteet siirretään bioturvallisuusmääräysten (UN3373) mukaisesti pikatoimituksella (EMS tai vastaava), jotta näytteet saapuvat kolmen päivän kuluessa (yleensä samana päivänä). Vastaanoton jälkeen näytteet käsitellään välittömästi (viruksen eluointi fosfaattipuskuroidussa suolaliuoksessa) ja niille suoritetaan molekyylianalyysi. Positiivisissa tapauksissa ulosteuutteita käytetään mahdollisimman nopeasti sallivien solujen (esim. VeroE6) BSL3-turvallisuusolosuhteissa, ja virusten tartuntapotentiaali määritetään. Lukema perustuu solujen sytopaattisten vaikutusten arviointiin ja subgenomisen mRNA:n ilmentymiseen. Primaarinäytteet ja eristetty RNA säilytetään Labdiassa erillisessä pakastimessa -80 °C:ssa tutkimuksen loppuun asti, ja ne heitetään pois. sen jälkeen.

Retrospektiiviset analyysit - biomateriaali, joka kerättiin ja säilytettiin Labdia Labordiagnostikin biovarastossa

Eettiset näkökohdat ja tilastot:

Tutkimukseen on saatu eettinen hyväksyntä ja tietoinen suostumus tutkimukseen osallistumiselle potilailta ja/tai heidän laillisilta edustajilta sekä henkilökunnalta.

Henkilötiedot ovat saatavilla yksinomaan sertifioidussa kliinisessä Labdia Labordiagnostikin laboratoriossa, joka suorittaa diagnostisia testejä. Tämän tutkimuksen tietojenkäsittely suoritetaan pseudonyymisillä tavalla sarjanumeroiden avulla.

Tutkimuksen päätavoitteiden mukaisesti Fisherin tarkkaa testiä käytetään vertaamaan SARS-CoV-2:n havaittavuuden ilmaantuvuutta nielu- ja ulostenäytteissä sekä arvioimaan tarttuvan viruksen esiintymistä ulostenäytteissä.

Odotettu tulos ja tulevaisuuden suunnitelmat:

Koska COVID-19:ää koskevia tietoja on suhteellisen vähän tietyissä pediatrisissa tilanteissa, ehdotettu tutkimus tarjoaa tärkeitä näkemyksiä yllä kuvatuista kliinisesti ja epidemiologisesti merkityksellisistä aiheista. Saatujen tietojen pohjalta tehdään laajamittaisia ​​tutkimuksia, joissa selvitetään viruksen leviämisen tartuntapotentiaalia suolistosta ja erilaisten lastenhoitolaitosten tarvittavia toimenpiteitä.

Kliinisistä näytteistä, mukaan lukien erityisesti ulosteesta (ja mahdollisesti nenänielun vanupuikoista) havaittujen SARS-CoV-2-patogeenien tarttuvien ominaisuuksien testaus suoritetaan käyttämällä permissiivisiä solulinjoja (VeroE6, CaCo2 tai HCT116) asianmukaisissa viljelyolosuhteissa. Lukema perustuu solusytopaattisten vaikutusten ja subgenomisen mRNA:n ilmentymisen dokumentointiin vakiintuneiden RTQ-PCR-testien avulla

Yleisesti ottaen näytteenotto suoritetaan jokaiselle potilaalle yhdessä ajankohtana sairaalaan saapumisen yhteydessä. Tutkimuksen tulevassa osassa kerätään seurantanäytteitä potilailta, joilla on COVID-19-virus, jonka viruksen leviäminen ulosteeseen. Sytopaattisten vaikutusten ja subgenomisen mRNA:n ilmentymisen arvioimiseksi käytetään tuoreita näytteitä aina kun mahdollista. Kaikissa muissa tapauksissa näytteet jäädytetään -80 °C:ssa ja analysoidaan myöhemmässä vaiheessa vakiintuneen protokollan mukaisesti.

Lääketieteellinen merkitys:

Koska SARS-CoV-2:n pitkittynyt leviäminen suolistoon on ilmeisesti yleinen lapsilla, joilla ei välttämättä ole mitään sairauden oireita, on äärimmäisen tärkeää ymmärtää, onko tällä oletetulla viruksen leviämistapalla kliinistä ja epidemiologista merkitystä. asianmukaisten suojatoimenpiteiden kehittämiseksi. Tartuntatapojen selvittäminen on ratkaisevan tärkeää nykyisissä ja tulevissa lähestymistavoissa SARS-CoV-2:n leviämisen hillitsemiseksi.