COVID-19: инфекционный потенциал кишечного выделения SARS-CoV-2 у детей (INPOSIS) (INPOSIS)

Фон:

Сообщается, что дети с явным COVID-19 гораздо реже болеют. В исследовании, проведенном в Китае, дети в возрасте до 10 лет составляли всего 0,9%, а дети в возрасте от 10 до 19 лет — только 1,2% диагностически подтвержденных случаев1. Очень похожие данные были опубликованы итальянским регистром, указывающим 0,5% и 0,7% соответственно2. В крупнейшем педиатрическом исследовании, опубликованном на сегодняшний день, включающем более 2000 детей, у 4% было бессимптомное течение, у 90% — легкое или умеренное клиническое течение, а тяжелые проявления были зарегистрированы в 6% случаев, в основном у детей в возрасте до 1 года3. В некоторых сообщениях указывалось на бессимптомное течение болезни у 16-30% больных детей в отдельных возрастных группах3,4. Помимо общих симптомов, таких как лихорадка и сухой кашель (40-100% случаев), у детей с COVID-19 часто наблюдали диарею (10-30% случаев), в отличие от взрослых с манифестной формой заболевания (4% случаев). случаев) 5-11. Выделение вируса со стулом обычно наблюдалось у детей в течение более одного месяца после разрешения острой инфекции7,10. Однако инфекционный потенциал выделения кишечного вируса, который был продемонстрирован для родственных вирусов SARS-CoV и MERS-CoV (коронавирус ближневосточного респираторного синдрома), в настоящее время неясен для SARS-CoV-212,13. Из-за легкого или даже бессимптомного течения COVID-19 дети могут представлять собой важный источник передачи заболевания. С увеличением числа вакцинированных взрослых и появлением новых вариантов вируса, проявляющих другие свойства, ситуация у детей, безусловно, может измениться и, возможно, потребуется ее переоценка. Таким образом, предлагаемое исследование в сотрудничестве с различными детскими учреждениями в австрийских больницах дает прекрасную возможность рассмотреть различные аспекты COVID-19, относящиеся к педиатрической популяции.

Гипотезы:

• Выделение SARS-CoV-2 со стулом обнаруживается у части бессимптомных детей.
• У пациентов с COVID-19 частота экскреции кишечного вируса выше и сохраняется в течение длительного времени после заражения.
• Вирусы, выделяемые с калом, могут проявлять инфекционный потенциал.

Дизайн исследования:

В течение 12-месячного периода исследования предполагается обследовать около 500 педиатрических пациентов, госпитализированных по причинам, не связанным с COVID-19, с целью выявления случаев выделения SARS-CoV-2 со стулом у детей, которые не подозреваются в переносе вируса. Указанное количество педиатрических пациентов, которые должны быть набраны, основано на максимально достижимом количестве в течение установленного периода исследования. В настоящее время невозможно предсказать долю пациентов с кишечной экскрецией SARS-CoV-2. Кроме того, исследователи проведут скрининг около 100 детей с COVID-19, чтобы определить частоту и продолжительность выделения кишечного вируса. Большинство пациентов будут обследованы только при поступлении в больницу, а последующие образцы будут получены у пациентов с положительным результатом при первом анализе, чтобы задокументировать продолжительность обнаруживаемости вируса. Кроме того, биоматериал, хранящийся в биорепозитории, включая образцы стула детей, госпитализированных по различным показаниям, будет проанализирован для определения возможности обнаружения SARS-CoV-2 с помощью молекулярного скрининга, а положительные случаи будут подвергнуты дальнейшему анализу. как указано ниже.

Молекулярное тестирование SARS-CoV-2 будет проводиться с помощью проверенного и сертифицированного анализа RTQ-PCR, установленного в соответствии с рекомендациями немецкого справочного центра Института Роберта Коха в Берлине. Обработка клинических образцов будет осуществляться в соответствии с применимыми правилами биобезопасности. Тестирование инфекционных свойств патогенов SARS-CoV-2, обнаруженных в клинических образцах, включая, в частности, кал (и, возможно, мазки из носоглотки), будет проводиться в учреждении BSL3 (в сотрудничестве с профессором доктором Виллингером, Медицинский университет Вены) с использованием пермиссивные клеточные линии (VeroE6, CaCo2 или HCT116) в соответствующих условиях культивирования. Показания будут основаны на документации цитопатических эффектов клеток и экспрессии субгеномной мРНК с использованием установленных тестов RTQ-PCR.

Логистика сбора и обработки образцов:

Проспективные анализы — образцы стула (и различные контрольные образцы из других мест, включая мазки из глотки, полости рта, носа и ладоней) будут собираться и храниться при температуре 4°C до передачи в центральную лабораторию Labdia Labordiagnostik. Образцы будут доставлены в соответствии с правилами биобезопасности (UN3373) службой быстрой доставки (EMS или аналогичной), чтобы обеспечить доставку образцов в течение трех дней (обычно в тот же день). После получения образцы будут немедленно обработаны (элюирование вируса в фосфатно-солевом буфере) и подвергнуты молекулярному анализу. В положительных случаях экстракты стула будут использоваться как можно быстрее для инокуляции пермиссивных клеток (например, VeroE6) в условиях безопасности BSL3, и будет определен инфекционный потенциал вирусов. Показания будут основаны на оценке клеточных цитопатических эффектов и экспрессии субгеномной мРНК. Первичные образцы и выделенная РНК будут храниться в Labdia в специальном морозильнике при температуре -80°C до окончания исследования и будут утилизированы. после этого.

Ретроспективные анализы - биоматериал, собранный и хранящийся в биорепозитории Labdia Labordiagnostik

Этические соображения и статистика:

Получено этическое одобрение исследования и информированное согласие на участие в нем пациентов и/или их законных представителей, а также сотрудников.

Персональные данные будут доступны исключительно в сертифицированной клинической лаборатории Labdia Labordiagnostik, проводящей диагностическое тестирование. Обработка данных для настоящего исследования будет осуществляться в псевдонимной форме путем присвоения серийных номеров.

В соответствии с основными целями исследования точный тест Фишера будет использоваться для сравнения частоты выявления SARS-CoV-2 в образцах глотки и кала, а также для оценки наличия инфекционного вируса в образцах кала.

Ожидаемый результат и планы на будущее:

Из-за относительной нехватки данных о COVID-19 в конкретных педиатрических условиях предлагаемое исследование даст важную информацию по клинически и эпидемиологически значимым темам, изложенным выше. Полученные данные послужат основой для последующих крупномасштабных исследований инфекционного потенциала кишечного выделения вируса и мер, необходимых для различных детских учреждений.

Тестирование инфекционных свойств патогенов SARS-CoV-2, обнаруженных в клинических образцах, включая, в частности, кал (и, возможно, мазки из носоглотки), будет проводиться с использованием пермиссивных клеточных линий (VeroE6, CaCo2 или HCT116) в соответствующих условиях культивирования. Показания будут основаны на документации цитопатических эффектов клеток и экспрессии субгеномной мРНК с использованием установленных тестов RTQ-PCR.

Как правило, сбор образцов будет проводиться в один момент времени у каждого пациента при поступлении в больницу. В рамках проспективной части исследования будут взяты последующие образцы у пациентов с COVID-19, у которых вирус выделяется со стулом. Для оценки цитопатических эффектов и экспрессии субгеномной мРНК по возможности будут использоваться свежие образцы. Во всех остальных случаях образцы будут заморожены при температуре -80°C, а затем проанализированы в соответствии с установленным протоколом.

Клиническое значение:

В связи с очевидно распространенным явлением длительного кишечного выделения SARS-CoV-2 у детей, у которых могут не проявляться какие-либо симптомы заболевания, крайне важно понять, имеет ли этот предполагаемый путь передачи вируса клиническое и эпидемиологическое значение, в качестве основы. для разработки соответствующих мер защиты. Выяснение путей передачи имеет решающее значение для текущих и будущих подходов к сдерживанию распространения SARS-CoV-2.