歌/疼痛管理のためのプレシジョン・メディシン (SNG)

痛みは、国際疼痛学会 (IASP) によって「実際のまたは潜在的な組織の損傷に関連する、またはそのような損傷の観点から説明される不快な感覚的および感情的な経験」と定義されています。 筋骨格障害は、慢性的な痛み/痛みの最も一般的な原因であるだけでなく、米国の患者の約 50% に重大な障害をもたらします. さらに、これらの障害は、65 歳以上の高齢者における重度の長期にわたる痛みと身体障害の最も一般的な原因であるためです。 疼痛治療の実践において、医師は患者の不快感を和らげるために、投薬、物理的薬剤、および注射を含むマルチモーダル治療を主に使用します。

過去数年間、私たちのチームは、新しい痛み/痛み治療アルゴリズムの開発のための遺伝子変異体の検索を正当化するいくつかの成果を上げました.

(1) LLLT の鎮痛は TRPV1 による。 (2) 治療用超音波による鎮痛は、ASIC3 を介して行われます。 (3) ブドウ糖注射は、ASIC1a を介して慢性的な筋肉痛を軽減しました。 (4) 線維筋痛症における痛みのバイオマーカー。

臨床結果によると、一部の患者は物理的薬剤によく反応し、一部の患者は注射を好みました。 上記の遺伝子の遺伝的変異は、異なる治療効果の決定要因である可能性があります。 しかし、患者がある治療オプションから別の治療オプションに切り替えるには、約 4 ～ 8 週間かかりました。 研究者が遺伝子バイオマーカーによって最適な治療法を決定できれば、治療コースと総治療費は大幅に減少します。

研究者は、提案された遺伝子 (TRPV1、ASIC1a、ASIC3、Tac1、COMT、TCL1A、POMC、RGS4、ASIC2、ASIC4、TRPA1、NK1R、G2A、GPR4、OGR1、TDAG8、TASK1、TASK2、TASK3、TREK1 、P2X2、P2X3、P2X5、TRPV4、KCNK1、NTSR1、NTSR2) は、痛み/疼痛治療の予後バイオマーカーになる可能性があります。 私たちの具体的な目的は次のとおりです。

1. 次世代シーケンシング (NGS) ベースのアプローチを設定して、痛み/疼痛治療モダリティの反応を決定できる遺伝子バリアントを見つけます。
2. 可能性のあるメタボロミクスおよび痛み/痛みのプロテオミクス マーカーを見つけること。
3. 遺伝子マーカーを介して痛み/痛みを制御するための精密医療のアルゴリズムを決定する。

六。研究デザイン I 患者の適格性 研究者は、国立台湾大学病院北湖支部から患者を募集します。

参加基準: (1) 20 歳から 100 歳までの年齢。 (2) 筋筋膜性疼痛症候群患者と診断され、治療を受ける意思がある (LLLT、超音波治療、局所デキストロース注射療法を含む)。 MPS の診断は、ピンと張ったバンド、トリガー ポイント、および放散痛の基準を使用して主任研究者によって確認されました。

除外基準：活動性の感染症、悪性腫瘍、血液疾患を有するものは除外した。 僧帽筋上部に局所注射を 3 か月以内に受けた患者も除外されます。

II 研究デザインと流れ

1. インフォームド コンセントを取得した後、適格な患者の年齢、性別、職業、教育レベル、過去の病歴などの基本的な人口統計データが収集されます。
2. 適格な患者は、上部僧帽筋のトリガーポイントで、685 nm の波長と 8 J​​/cm2 のエネルギー密度で 30 mW の出力を持つ LLLT を最初に受けました。 治療前および治療後の VAS-pain および VAS-sng は、LLLT 表現型の決定のためにそれぞれ収集されます。
3. 次に、2 つのグループ (各グループ 40 人の被験者) にランダムに割り当てられます。A. 超音波治療グループ。 B.増殖療法グループ。 グループ A は、痛みを伴う上部僧帽筋に、週に 2 ～ 3 回の頻度で 5 分間、1 MHz の治療用超音波を受けます。 グループ B は僧帽筋上部の筋周囲で緊張亢進療法を受けます。 注射剤は5mlの5%デキストロース溶液です。 針が血管内にないことを確認するために、注射前に針を吸引しました。 医師間のばらつきを避けるために、同じ医師（主治医）がすべての患者に注射します。 両方のグループでの有効性の干渉を避けるために、他の投薬や物理的なモダリティは与えられませんでした。
4. 募集された患者は、注射の前後、および注射の2週間後に評価を受けます。 主な結果は、0 ～ 100 のスコアを持つ VAS の痛みと VAS の痛み (ビジュアル アナログ スケール) であり、100 は最高度の痛みを表す値です。 二次的アウトカムは、痛みの閾値、筋緊張、および SF-36-a アンケートで、患者の QoL に対する認識に対処する 36 項目と 8 つのドメインで構成されます。 静脈血と尿のサンプルは、それぞれ初回と 2 週間の来院時に採取されました。 血液サンプルは、匿名化された ID 番号でラベル付けされ、遠心分離され、将​​来の処理時までロックされた冷凍庫で-80 ºC で保存されました。 バフィーコートは遠心分離後に分離され、同様に保存されます。 尿サンプルを等分し、将来の分析のためにロックされた冷凍庫で-80 ºC で保存しました。
5. レスキュー療法 (クロスオーバー治療): 参加者が初回治療に満足せず、VAS の改善が 1.0 未満の場合、他のグループでの治療であるレスキュー療法を受ける資格があります。 そして、彼らはさらに2週間クリニックに戻ります。 結果変数は、3 回目の訪問でも収集されます。

(1) DNA 抽出および NGS ベースのシーケンシングとジェノタイピング 参加者の末梢血単核細胞から、製造元のプロトコルに従って Gentra Puregene キットを使用してゲノム DNA を抽出し、アガロースゲルおよび O.D.その純度と濃度を確認するための比率テスト。 DNA は、800 bp のピーク長を目指して Covaris を使用して断片化されます。 Illumina ライブラリは、TruSeq Library Preparation Kit を使用して gDNA から生成されます。

DNA キャプチャ プローブは、TRPV1、ASIC1a、ASIC3、Tac1、COMT、TCL1A、POMC、RGS4、ASIC2、ASIC4、TRPA1、NK1R、G2A、GPR4、OGR1、TDAG8、TASK1、TASK2、TASK3、TREK1、 P2X2、P2X3、P2X5、TRPV4、KCNK1、NTSR1、NTSR2 であり、Roche KAPA HyperChoice プロトコルを使用して合成されます。 これら 8 つの遺伝子のすべてのコード領域と非コード領域 (プロモーター、イントロン、5' および 3' 非翻訳領域) が含まれます。

NGS ターゲット領域濃縮は、ターゲット領域 (~148 Kb) を濃縮/キャプチャするために適用されます。 濃縮されたライブラリは、イルミナ MiSeq を使用してシーケンスされ、300 bp のペアエンド リードが生成されます。 ターゲット領域の予想される深さは、平均で 200 倍になります。

(2) メタボロミクスおよびプロテオミクス解析

1. 簡単に言うと、尿と血清の LC-MS 分析には、6540-Quadrupole-Time- of-Flight (QTOF) 質量システム (Agilent Technologies、米国カリフォルニア州サンタクララ)。 MS の raw ファイルは、Trapper (ISB) を使用して mzXML 形式に変換され、社内パッケージである TIPick によって処理されました。 TIPick 処理の後、各 UHPLC-MS データセットからの総イオン存在量に従って、スケーリングベースの正規化が実行されました。
2. LC-MS リピドミック プロファイリングを実行し、詳細に説明しました。 簡潔に言えば、QTOF 用の ZORBAX Eclipse Plus C18 (2.1 x 100 mm、1.8 µm、Agilent Technologies、Waldbronn、Germany) でリピドミクス プロファイリングを実行し、移動相 A は 0.1% ギ酸水溶液と 10 mM 酢酸アンモニウムで構成され、移動相 B は、ACN/イソプロピル アルコール (50/50) 中の 0.1% ギ酸と 10 mM 酢酸アンモニウムで構成されていました。 オートサンプラーとカラムオーブンは、それぞれ 4°C と 55°C に維持しました。 注入量は5μlであった。 MS 取得は、プリカーサー イオン スキャン (PIS) モードおよび多重反応モニタリング (MRM) モードで実行されました。
3. すべての UPLC-MS の生データは、Trapper (ISB) を使用して mzXML 形式に変換され、社内パッケージである TIPick によって正規化され、ピーク増強とターゲット代謝物用に選択されたピークが使用されました。 スフィンゴミエリン (SM)、リゾホスファチジルコリン (LysoPC)、セラミド (Cer)、ホスファチジルコリン (PC)、ホスファチジルイノシトール (PI)、ホスファチジルエタノールアミン (PE)、およびセレブロシド (CB) の社内データベース (Center of Genomic メタボロミクスコアラボラトリー)医学、国立台湾大学は、スクリーニングに使用されました。