Medycyna precyzyjna do kontroli Sng / bólu (SNG)

Ból jest zdefiniowany przez International Association for the Study of Pain (IASP) jako „nieprzyjemne doznanie czuciowe i emocjonalne związane z faktycznym lub potencjalnym uszkodzeniem tkanki lub opisane w kategoriach takiego uszkodzenia”. Schorzenia układu mięśniowo-szkieletowego są nie tylko najczęstszą przyczyną przewlekłego bólu/bólu, ale także powodują znaczną niepełnosprawność u około 50% chorych w Stanach Zjednoczonych. Ponadto, ponieważ zaburzenia te są najczęstszą przyczyną ciężkiego, długotrwałego bólu i niepełnosprawności u osób starszych powyżej 65 roku życia. W praktyce medycyny bólu lekarze stosują głównie leczenie multimodalne, obejmujące leki, środki fizyczne i zastrzyki, aby złagodzić dyskomfort pacjentów.

W ostatnich latach nasz zespół miał pewne osiągnięcia uzasadniające poszukiwanie wariantów genetycznych do opracowania nowego algorytmu leczenia bólu.

(1) Analgezja LLLT odbywa się przez TRPV1. (2) Znieczulenie za pomocą ultradźwięków terapeutycznych odbywa się za pośrednictwem ASIC3. (3) Wstrzyknięcie dekstrozy zmniejszyło przewlekły ból mięśni poprzez ASIC1a. (4) Biomarker bólu/bólu w fibromialgii.

Zgodnie z wynikami klinicznymi niektórzy pacjenci dobrze reagowali na środki fizyczne, a niektórzy preferowali zastrzyki. Warianty genetyczne wyżej wymienionych genów mogą być czynnikami determinującymi zróżnicowane efekty terapeutyczne. Jednak przejście z jednej opcji leczenia na inną zajęło pacjentowi około 4-8 tygodni. Jeśli badacze będą w stanie określić optymalną metodę leczenia za pomocą biomarkerów genetycznych, przebieg leczenia i całkowita przestrzeń znacznie się zmniejszą.

Badacze wysuwają hipotezę, że warianty genetyczne proponowanych genów (TRPV1, ASIC1a, ASIC3, Tac1, COMT, TCL1A, POMC, RGS4, ASIC2, ASIC4, TRPA1, NK1R, G2A, GPR4, OGR1, TDAG8, TASK1, TASK2, TASK3, TREK1 , P2X2, P2X3, P2X5, TRPV4, KCNK1, NTSR1, NTSR2) mogą być prognostycznymi biomarkerami leczenia bólu. Nasze cele szczegółowe to:

1. Stworzenie podejścia opartego na sekwencjonowaniu nowej generacji (NGS) w celu znalezienia wariantów genetycznych, które mogą określić odpowiedź na sposoby leczenia bólu.
2. Znalezienie możliwych metabolomicznych i proteomicznych markerów bólu.
3. Określenie algorytmu medycyny precyzyjnej do kontroli bólu za pomocą markerów genetycznych.

Sześć. projekt badania I Kwalifikowalność pacjentów Badacze będą rekrutować pacjentów z Oddziału Bei-Hu Narodowego Szpitala Uniwersyteckiego na Tajwanie.

Kryteria włączenia: (1) Wiek od 20 do 100 lat. (2) Zdiagnozowani jako pacjenci z zespołem bólu mięśniowo-powięziowego i chętni do leczenia (w tym LLLT, terapeutycznych ultradźwięków i miejscowej terapii iniekcyjnej dekstrozy). Rozpoznanie MPS zostało potwierdzone przez głównego badacza na podstawie kryteriów napiętego pasma, punktu spustowego i bólu promieniującego.

Kryteria wykluczenia: Wykluczono osoby z aktywną infekcją, nowotworem złośliwym i chorobami hematologicznymi. Wykluczeni są również pacjenci, którzy otrzymali miejscowe wstrzyknięcie w górny mięsień czworoboczny w ciągu 3 miesięcy.

II Projekt i przebieg badania

1. Po uzyskaniu świadomej zgody zbierane są podstawowe dane demograficzne, w tym wiek, płeć, wykonywany zawód, poziom wykształcenia oraz historia medyczna kwalifikujących się pacjentów.
2. Kwalifikujący się pacjenci otrzymali najpierw LLLT o długości fali 685 nm i mocy wyjściowej 30 mW przy gęstości energii 8 J/cm2 w punkcie spustowym mięśnia czworobocznego górnego. VAS-ból i VAS-sng przed i po leczeniu zbiera się odpowiednio w celu określenia fenotypu LLLT.
3. Następnie są losowo przydzielani do dwóch grup (po 40 osób w każdej): A. grupa ultradźwięków terapeutycznych; B. grupa proloterapeutyczna. Grupa A otrzymuje terapeutyczne ultradźwięki o częstotliwości 1 MHz przez 5 min z częstotliwością 2-3 razy w tygodniu na bolący mięsień czworoboczny górny. Grupa B otrzymuje proloterapię hipertoniczną w okolicy omięsnej mięśnia czworobocznego górnego. Środek do iniekcji to 5 ml 5% roztworu dekstrozy. Aby upewnić się, że igła nie znajduje się w naczyniu krwionośnym, igłę odessano przed wstrzyknięciem. Ten sam lekarz (główny badacz) wstrzykuje wszystkim pacjentom, aby uniknąć różnic między lekarzami. Nie podano żadnego innego leku ani metody fizycznej, aby uniknąć zakłóceń skuteczności w obu grupach.
4. Zrekrutowani pacjenci są oceniani przed i po wstrzyknięciu oraz 2 tygodnie po wstrzyknięciu. Pierwszorzędowym wynikiem jest ból VAS i ból VAS (wizualna skala analogowa) z wynikiem 0-100, gdzie 100 jest wartością reprezentującą najwyższy stopień bólu. Drugorzędnymi wynikami są próg bólu, napięcie mięśniowe i SF-36 – kwestionariusz składa się z 36 pozycji i 8 domen odnoszących się do postrzegania przez pacjenta jakości życia. Próbki krwi żylnej i moczu pobierano odpowiednio podczas pierwszej wizyty i 2-tygodniowej wizyty. Próbki krwi oznaczono zanonimizowanym numerem identyfikacyjnym, odwirowano i przechowywano w temperaturze -80 ºC w zamkniętej zamrażarce do czasu dalszego przetwarzania. Kożuszek leukocytarny oddziela się po odwirowaniu i również przechowuje. Próbki moczu podzielono na porcje i przechowywano w temperaturze -80°C w zamkniętej zamrażarce do przyszłej analizy.
5. Terapia ratunkowa (leczenie cross-over): Jeśli uczestnik nie jest zadowolony z pierwszej rundy leczenia, a poprawa w skali VAS jest mniejsza niż 1,0, wówczas kwalifikuje się do terapii ratunkowej – leczenia w drugiej grupie. I wrócą do kliniki na kolejne 2 tygodnie. Zmienne wynikowe zostaną również zebrane podczas trzeciej wizyty.

(1) Ekstrakcja DNA oraz sekwencjonowanie i genotypowanie oparte na NGS Genomowy DNA zostanie wyekstrahowany z jednojądrzastych komórek krwi obwodowej uczestników przy użyciu zestawu Gentra Puregene zgodnie z protokołem producenta, a następnie poddany żelowi agarozowemu i OD. testy proporcjonalne w celu potwierdzenia jego czystości i stężenia. DNA zostanie pofragmentowane przy użyciu Covaris, dążąc do uzyskania piku o długości 800 bp. Biblioteki Illumina zostaną wygenerowane z gDNA przy użyciu zestawu TruSeq Library Preparation Kit.

Sondy wychwytujące DNA będą specjalnie zaprojektowane do celowania w TRPV1, ASIC1a, ASIC3, Tac1, COMT, TCL1A, POMC, RGS4, ASIC2, ASIC4, TRPA1, NK1R, G2A, GPR4, OGR1, TDAG8, TASK1, TASK2, TASK3, TREK1, P2X2, P2X3, P2X5, TRPV4, KCNK1, NTSR1, NTSR2 i zostaną zsyntetyzowane przy użyciu protokołu Roche KAPA HyperChoice. Wszystkie regiony kodujące i regiony niekodujące (promotory, introny, nieulegające translacji regiony 5' i 3') tych 8 genów zostaną włączone.

Wzbogacenie regionu docelowego NGS zostanie zastosowane w celu wzbogacenia/przechwycenia regionu docelowego (~148 Kb). Wzbogacone biblioteki zostaną następnie zsekwencjonowane przy użyciu Illumina MiSeq w celu wygenerowania odczytów sparowanych końców o wielkości 300 pz. Oczekiwana głębokość docelowych regionów wyniesie średnio 200x.

(2) Analiza metaboliczna i proteomiczna

1. W skrócie, analizy LC-MS moczu i surowicy obejmowały system Agilent 1290 UPLC (kolumna ACQUITY UPLC HSS T3, 2,1 x 100 mm; 1,8 µm; Waters, Milford, MA, USA) w połączeniu z 6540-Quadrupole-Time- system masowy of-Flight (QTOF) (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA). Surowe pliki MS zostały przekonwertowane do formatu mzXML przy użyciu Trappera (ISB) i przetworzone przez wewnętrzny pakiet TIPick. Po przetworzeniu TIPick przeprowadzono normalizację opartą na skalowaniu zgodnie z całkowitą obfitością jonów z każdego zestawu danych UHPLC-MS.
2. Przeprowadzono i szczegółowo opisano profilowanie lipidomiczne LC-MS. W skrócie, profilowanie lipidomiczne przeprowadzono na ZORBAX Eclipse Plus C18 (2,1 x 100 mm, 1,8 µm, Agilent Technologies, Waldbronn, Niemcy) dla QTOF, jak również faza ruchoma A składała się z 0,1% wodnego kwasu mrówkowego i 10 mM octanu amonu i faza ruchoma B składała się z 0,1% kwasu mrówkowego i 10 mM octanu amonu w ACN/alkoholu izopropylowym (50/50). Autosampler i piec kolumnowy utrzymywano odpowiednio w 4°C i 55°C. Objętość wstrzyknięcia wynosiła 5 μl. Akwizycję MS przeprowadzono w trybie skanowania jonów prekursorowych (PIS) i w trybie monitorowania wielu reakcji (MRM).
3. Wszystkie surowe dane UPLC-MS zostały przekonwertowane do formatu mzXML przy użyciu Trappera (ISB) i znormalizowane przez TIPick, wewnętrzny pakiet, jak również wzmocnienie pików i piki wybrane dla docelowych metabolitów. Wewnętrzna baza danych sfingomielin (SM), lizofosfatydylocholiny (LysoPC), ceramidów (Cer), fosfatydylocholin (PCs), fosfatydyloinozytolu (PI), fosfatydyloetanoloaminy (PE) i cerebrozydu (CB) w Metabolomics Core Laboratory, Center of Genomic Do badań przesiewowych wykorzystano Medicine, National Taiwan University.