Tarkkuuslääkettä Sng-/kivunhallintaan (SNG)

Kipu määritellään "epämiellyttäväksi aisti- ja emotionaaliseksi kokemukseksi, joka liittyy todelliseen tai mahdolliseen kudosvaurioon tai kuvataan sellaiseksi vaurioksi" International Association for the Study of Pain (IASP) mukaan. Tuki- ja liikuntaelinten sairaudet eivät ole vain yleisin kroonisen kivun/kivun syy, vaan ne johtavat myös merkittävään vammaisuuteen noin 50 %:lla potilaista Yhdysvalloissa. Lisäksi, koska nämä häiriöt ovat yleisin syy vaikeaan, pitkäaikaiseen kipuun ja vammaisuuteen yli 65-vuotiailla. Kipulääkekäytännössä lääkärit käyttävät pääasiassa multimodaalista hoitoa, mukaan lukien lääkkeet, fysikaaliset aineet ja injektio, lievittääkseen potilaiden epämukavuutta.

Viime vuosina tiimillämme oli saavutuksia, jotka oikeuttavat geneettisten varianttien etsimisen uuden kivun/kivun hoitoalgoritmin kehittämiseksi.

(1) LLLT:n analgesia tapahtuu TRPV1:n kautta. (2) Analgesia terapeuttisella ultraäänellä tapahtuu ASIC3:n kautta. (3) Dekstroosiinjektio vähensi kroonista lihaskipua ASIC1a:n kautta. (4) Biomarkkeri fibromyalgian kivulle/kivulle.

Kliinisen tuloksen mukaan jotkut potilaat reagoivat hyvin fysikaalisiin tekijöihin ja jotkut suosivat injektiota. Yllä mainittujen geenien geneettiset variantit voivat olla erilaisten terapeuttisten vaikutusten määrääviä tekijöitä. Kesti kuitenkin noin 4-8 viikkoa ennen kuin potilas siirtyi hoitovaihtoehdosta toiseen. Jos tutkijat pystyvät määrittelemään optimaalisen hoitomuodon geneettisten biomarkkerien avulla, hoidon kulku ja kokonaislaajennus pienenevät paljon.

Tutkijat olettavat, että ehdotettujen geenien geneettiset variantit (TRPV1, ASIC1a, ASIC3, Tac1, COMT, TCL1A, POMC, RGS4, ASIC2, ASIC4, TRPA1, NK1R, G2A, GPR4, OGR1, TDAG8, TASK1, TASK3, TREKTASK3, TREKTASK2, , P2X2, P2X3, P2X5, TRPV4, KCNK1, NTSR1, NTSR2) voisivat olla kipeän/kivun hoitojen prognostisia biomarkkereita. Erityistavoitteemme ovat:

1. Luodaan seuraavan sukupolven sekvensointiin (NGS) perustuva lähestymistapa löytääkseen geneettisiä muunnelmia, jotka voivat määrittää vasteen kivun/kivun hoitomenetelmiin.
2. Löytää kivun/kivun mahdollisia metabolomiikkaa ja proteomisia markkereita.
3. Tarkkuuslääketieteen algoritmin määrittäminen kivun/kivun hallintaan geneettisten markkerien avulla.

Kuusi. tutkimuksen suunnittelu I Potilaiden kelpoisuus Tutkijat rekrytoivat potilaita National Taiwan University Hospital Bei-Hu Branchista.

Osallistumiskriteerit: (1) Ikä 20-100 vuotta. (2) Diagnosoitu myofaskiaalisen kipuoireyhtymän potilaiksi ja halukas saamaan hoitoa (mukaan lukien LLLT, terapeuttinen ultraääni ja paikallinen dekstroosiinjektiohoito). Päätutkija vahvisti MPS-diagnoosin kireällä nauhalla, triggerpisteellä ja säteilevän kivun kriteereillä.

Poissulkemiskriteerit: Ne, joilla oli aktiivinen infektio, maligniteetti ja hematologiset sairaudet, suljettiin pois. Potilaat, jotka olivat saaneet paikallisen injektion ylempään puolisuunnikkaan 3 kuukauden sisällä, ovat myös poissuljettuja.

II Tutkimuksen suunnittelu ja kulku

1. Tietoisen suostumuksen saamisen jälkeen kerätään perusdemografiset tiedot, mukaan lukien ikä, sukupuoli, työ, koulutustaso ja aiempi sairaushistoria kelvollisista potilaista.
2. Sopivat potilaat saivat ensin LLLT:n aallonpituudella 685 nm ja teholla 30 mW energiatiheydellä 8 J/cm2 ylemmän puolisuunnikkaan lihaksen laukaisupisteessä. VAS-kipu ja VAS-sng kerätään ennen hoitoa ja sen jälkeen LLLT-fenotyypin määritystä varten.
3. Sitten ne jaetaan satunnaisesti kahteen ryhmään (40 henkilöä kussakin ryhmässä): A. terapeuttinen ultraääniryhmä; B. proloterapiaryhmä. Ryhmä A saa 1 MHz:n terapeuttista ultraääntä 5 minuutin ajan 2-3 kertaa viikossa kipeälle ylemmälle trapetsilihakselle. Ryhmä B saa hypertonista proloterapiaa ylemmän trapetsilihaksen perimysiuumissa. Injektioaine on 5 ml 5 % dekstroosiliuosta. Sen varmistamiseksi, että neula ei ollut verisuonessa, neula imettiin ennen injektiota. Sama lääkäri (päätutkija) ruiskuttaa kaikki potilaat lääkäreiden välisen vaihtelun välttämiseksi. Mitään muuta lääkitystä tai fyysistä modaalia ei annettu tehon häiriöiden välttämiseksi molemmissa ryhmissä.
4. Rekrytoidut potilaat arvioidaan ennen injektiota ja sen jälkeen sekä 2 viikkoa injektion jälkeen. Ensisijainen tulos on VAS-kipu ja VAS-kipu (visuaalinen analoginen asteikko) arvoilla 0-100, jossa 100 on arvo, joka edustaa suurinta kivun astetta. Toissijaisia ​​tuloksia ovat kipukynnys, lihasten sävy ja SF-36-a-kyselylomake koostuu 36 kohdasta ja 8 alueesta, jotka koskevat potilaan käsitystä elämänlaadustaan. Laskimoveri- ja virtsanäytteet kerättiin ensimmäisellä käynnillä ja 2 viikon käynnillä. Verinäytteet leimattiin anonymisoidulla ID-numerolla, sentrifugoitiin ja säilytettiin -80 ºC:ssa lukitussa pakastimessa tulevaan käsittelyyn asti. Buffy coat erotetaan sentrifugoinnin jälkeen ja säilytetään myös. Virtsanäytteet jaettiin eriin ja säilytettiin -80 ºC:ssa lukitussa pakastimessa tulevaa analysointia varten.
5. Pelastushoito (cross-over hoito): Jos osallistuja ei ole tyytyväinen ensimmäiseen hoitoon ja VAS:n paraneminen on alle 1,0, hän on oikeutettu saamaan pelastushoitoa - toisen ryhmän hoitoa. Ja he palaavat klinikalle vielä 2 viikoksi. Tulosmuuttujat kerätään myös kolmannella käynnillä.

(1) DNA:n uuttaminen ja NGS-pohjainen sekvensointi ja genotyypitys Genominen DNA uutetaan osallistujien perifeerisen veren mononukleaarisoluista Gentra Puregene -sarjan avulla valmistajan ohjetta noudattaen ja altistetaan agaroosigeelille ja O.D. suhdetestit sen puhtauden ja pitoisuuden varmistamiseksi. DNA fragmentoidaan käyttämällä Covarista, tavoitteena huipun pituus 800 bp. Illumina-kirjastot luodaan gDNA:sta TruSeq Library Preparation Kitin avulla.

DNA-sieppauskoettimet suunnitellaan räätälöityjä kohderyhmiin TRPV1, ASIC1a, ASIC3, Tac1, COMT, TCL1A, POMC, RGS4, ASIC2, ASIC4, TRPA1, NK1R, G2A, GPR4, OGR1, TDAG8, TASK1, TASK2, TASK13,,, P2X2, P2X3, P2X5, TRPV4, KCNK1, NTSR1, NTSR2 ja syntetisoidaan käyttämällä Roche KAPA HyperChoice -protokollaa. Kaikki näiden 8 geenin koodaavat alueet ja ei-koodaavat alueet (promoottorit, intronit, transloimattomat 5'- ja 3'-alueet) otetaan mukaan.

NGS-kohdealueen rikastamista käytetään kohdealueen rikastamiseen/kaappaamiseen (~148 Kb). Rikastetut kirjastot sekvensoidaan sitten käyttämällä Illumina MiSeqiä 300 bp:n parillisen pään lukujen luomiseksi. Kohdealueiden odotettu syvyys on keskimäärin 200x.

(2) Metabolinen ja proteominen analyysi

1. Lyhyesti sanottuna virtsan ja seerumin LC-MS-analyysit sisälsivät Agilent 1290 UPLC -järjestelmän (ACQUITY UPLC HSS T3 -kolonni, 2,1 × 100 mm; 1,8 µm; Waters, Milford, MA, USA) yhdistettynä 6540-Quadrupole-Time-järjestelmään. lennon (QTOF) massajärjestelmä (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA). MS-raakatiedostot muunnettiin mzXML-muotoon Trapperilla (ISB) ja käsiteltiin TIPickillä, talon sisäisellä paketilla. TIPick-käsittelyn jälkeen skaalauspohjainen normalisointi suoritettiin kunkin UHPLC-MS-datajoukon ionien kokonaismäärän mukaan.
2. LC-MS-lipidominen profilointi suoritettiin ja kuvattiin yksityiskohtaisesti. Lyhyesti sanottuna lipidominen profilointi ajettiin ZORBAX Eclipse Plus C18:lla (2,1 x 100 mm, 1,8 µm, Agilent Technologies, Waldbronn, Saksa) QTOF:ää varten, sekä liikkuva faasi A koostui 0,1 % vesipitoisesta muurahaishaposta ja 10 mM asetaatista ja ammoniumista. liikkuva faasi B koostui 0,1 % muurahaishaposta ja 10 mM ammoniumasetaatista ACN/isopropyylialkoholissa (50/50). Automaattinen näytteenottolaite ja kolonniuuni pidettiin 4 °C:ssa ja 55 °C:ssa, vastaavasti. Injektiotilavuus oli 5 μl. MS-hankinta suoritettiin esiasteionien skannaustilassa (PIS) ja usean reaktion monitorointitilassa (MRM).
3. Kaikki UPLC-MS-raakadata muunnettiin mzXML-muotoon käyttämällä Trapperia (ISB) ja normalisoitiin TIPickillä, talon sisäisellä paketilla, sekä kohdennetuille metaboliiteille valittu huipun tehostus ja huippu. Yrityksen sisäinen tietokanta sfingomyeliineistä (SM), lysofosfatidyylikoliinista (LysoPC), keramideista (Cer), fosfatidyylikoliinista (PC), fosfatidyyli-inositolista (PI), fosfatidyylietanoliamiinista (PE) ja serebrosidista (CB) laboratorion aineenvaihduntakeskuksessa Seulonnassa käytettiin Taiwanin kansallisen yliopiston lääketiedettä.