Sng/Pain 조절을 위한 정밀의학 (SNG)

통증은 국제 통증 연구 협회(IASP)에 의해 "실제 또는 잠재적인 조직 손상과 관련되거나 그러한 손상의 용어로 설명된 불쾌한 감각 및 감정적 경험"으로 정의됩니다. 근골격계 질환은 만성 통증/통증의 가장 흔한 원인일 뿐만 아니라 미국에서 환자의 약 50%가 심각한 장애를 초래하기도 합니다. 또한, 이러한 장애는 65세 이상의 노인에서 중증의 장기적인 통증 및 장애의 가장 흔한 원인이기 때문입니다. 통증의학 진료에서 의사들은 환자의 불편함을 완화하기 위해 주로 약물, 물리치료, 주사 등 복합적 치료를 사용합니다.

지난 몇 년 동안 우리 팀은 새로운 통증/통증 치료 알고리즘 개발을 위한 유전적 변이 검색을 정당화하는 몇 가지 성과를 거두었습니다.

(1) LLLT의 진통은 TRPV1을 통해 이루어집니다. (2) 치료용 초음파에 의한 진통은 ASIC3를 통해 이루어진다. (3) 포도당 주사는 ASIC1a를 통해 만성 근육통을 감소시켰다. (4) 섬유근육통의 쑤심/통증에 대한 바이오마커.

임상 결과에 따르면 물리치료제에 잘 반응하는 환자도 있었고 주사제를 선호하는 환자도 있었다. 위에서 언급한 유전자의 유전적 변이는 차별적인 치료 효과의 결정 요인이 될 수 있습니다. 그러나 환자가 한 치료 옵션에서 다른 치료 옵션으로 전환하는 데 약 4-8주가 걸렸습니다. 연구자들이 유전자 바이오마커를 통해 최적의 치료 방법을 결정할 수 있다면 치료 과정과 전체 범위가 많이 줄어들 것이다.

연구자들은 제안된 유전자(TRPV1, ASIC1a, ASIC3, Tac1, COMT, TCL1A, POMC, RGS4, ASIC2, ASIC4, TRPA1, NK1R, G2A, GPR4, OGR1, TDAG8, TASK1, TASK2, TASK3, TREK1 , P2X2, P2X3, P2X5, TRPV4, KCNK1, NTSR1, NTSR2)는 궤양/통증 치료의 예후 바이오마커일 수 있습니다. 우리의 구체적인 목표는 다음과 같습니다.

1. 통증/통증 치료 양식의 반응을 결정할 수 있는 유전적 변이를 찾기 위한 차세대 시퀀싱(NGS) 기반 접근법을 설정합니다.
2. 통증/통증의 가능한 대사체학 및 단백질체 마커를 찾기 위해.
3. 유전자 마커를 통한 통증/통증 조절을 위한 정밀의학 알고리즘 결정.

육. 연구 설계 I 환자 자격 조사자는 국립 대만 대학 병원 Bei-Hu 분원에서 환자를 모집할 것입니다.

포함 기준: (1) 20-100세 사이의 연령. (2) 근막 통증 증후군 환자로 진단되고 치료(LLLT, 치료적 초음파 및 국소 포도당 주사 요법 포함)를 받을 의향이 있는 자. MPS의 진단은 팽팽한 띠, 발통점 및 방사통의 기준을 사용하여 주임 조사관에 의해 확인되었습니다.

제외기준 : 활동성 감염, 악성종양, 혈액질환이 있는 경우는 제외하였다. 3개월 이내에 상부 승모근에 국소 주사를 받은 환자도 제외하였다.

II 연구 설계 및 흐름

1. 정보에 입각한 동의를 얻은 후 적격 환자의 연령, 성별, 직업, 교육 수준 및 과거 병력을 포함한 기본 인구 통계 데이터를 수집합니다.
2. 적격한 환자는 먼저 상부 승모근의 트리거 포인트에서 8J/cm2의 에너지 밀도에서 685nm 파장과 30mW 출력의 LLLT를 받았습니다. 치료 전 및 치료 후 VAS-통증 및 VAS-sng는 각각 LLLT 표현형 결정을 위해 수집됩니다.
3. 그런 다음 무작위로 두 그룹(각 그룹당 40명)으로 배정됩니다. A. 초음파 치료 그룹; B. prolotherapy 그룹. A군은 통증이 있는 상부 승모근에 주당 2-3회 빈도로 5분 동안 1MHz 치료용 초음파를 받습니다. 그룹 B는 상부승모근의 근주막에 고장성 프롤로테라피를 받습니다. 주사제는 5ml 5% 포도당 용액입니다. 바늘이 혈관에 들어가지 않도록 주사 전에 바늘을 흡인했습니다. 동일한 의사(주요 조사자)가 의사 간 가변성을 피하기 위해 모든 환자에게 주사합니다. 두 그룹 모두에서 효능 간섭을 피하기 위해 다른 약물이나 신체적 양식은 제공되지 않았습니다.
4. 모집된 환자는 주사 전과 주사 후, 주사 후 2주 후에 평가를 받습니다. 1차 결과는 0-100의 점수를 갖는 VAS-통증 및 VAS-통증(visual analogue scale)이며, 여기서 100은 가장 높은 통증 정도를 나타내는 값입니다. 2차 결과는 통증 역치, 근긴장도, SF-36-a 설문지는 환자의 삶의 질에 대한 인식을 다루는 36개 항목과 8개 영역으로 구성됩니다. 정맥혈 및 소변 샘플은 각각 첫 번째 방문 및 2주 방문 시 수집되었습니다. 혈액 샘플은 익명화된 ID 번호로 라벨을 지정하고 원심분리한 다음 향후 처리할 때까지 잠긴 냉동고에서 -80ºC로 보관했습니다. Buffy coat는 원심분리 후 분리하여 보관합니다. 소변 샘플을 분주하고 향후 분석을 위해 잠긴 냉동고에 -80ºC에 보관했습니다.
5. 구조치료(교차치료): 참여자가 1차 치료에 만족하지 못하고 VAS의 개선도가 1.0 미만이면 다른 그룹의 치료인 구조치료를 받을 수 있다. 그리고 그들은 다시 2주 동안 클리닉에 복귀할 것입니다. 결과 변수는 3차 방문에서도 수집됩니다.

(1) DNA 추출 및 NGS 기반 시퀀싱 및 지노타이핑 제조사의 프로토콜에 따라 Gentra Puregene 키트를 사용하여 참가자의 말초 혈액 단핵 세포에서 Genomic DNA를 추출하고 agarose gel 및 O.D. 비율 테스트를 통해 순도와 농도를 확인합니다. DNA는 800 bp의 피크 길이를 목표로 Covaris를 사용하여 단편화됩니다. Illumina 라이브러리는 TruSeq 라이브러리 준비 키트를 사용하여 gDNA에서 생성됩니다.

DNA 캡처 프로브는 TRPV1, ASIC1a, ASIC3, Tac1, COMT, TCL1A, POMC, RGS4, ASIC2, ASIC4, TRPA1, NK1R, G2A, GPR4, OGR1, TDAG8, TASK1, TASK2, TASK3, TREK1, P2X2, P2X3, P2X5, TRPV4, KCNK1, NTSR1, NTSR2 및 Roche KAPA HyperChoice 프로토콜을 사용하여 합성됩니다. 이들 8개 유전자의 모든 코딩 영역 및 비코딩 영역(프로모터, 인트론, 5' 및 3' 비번역 영역)이 포함될 것이다.

NGS 대상 영역 농축은 대상 영역(~148Kb)을 농축/캡처하기 위해 적용됩니다. 강화된 라이브러리는 Illumina MiSeq를 사용하여 시퀀싱되어 300bp의 페어드 엔드 읽기를 생성합니다. 대상 영역의 예상 깊이는 평균 200배입니다.

(2) 대사체 및 단백질체 분석

1. 간략하게, 6540-Quadrupole-Time-Column과 결합된 Agilent 1290 UPLC 시스템(ACQUITY UPLC HSS T3 컬럼, 2.1×100mm, 1.8µm, Waters, Milford, MA, USA)을 사용한 소변 및 혈청의 LC-MS 분석은 of-Flight(QTOF) 질량 시스템(Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA). MS 원시 파일은 Trapper(ISB)를 사용하여 mzXML 형식으로 변환하고 사내 패키지인 TIPick에서 처리했습니다. TIPick 처리 후 각 UHPLC-MS 데이터 세트의 총 이온 존재비에 따라 스케일링 기반 정규화를 수행했습니다.
2. LC-MS 리피도믹 프로파일링을 수행하고 자세히 설명했습니다. 요약하면, QTOF용 ZORBAX Eclipse Plus C18(2.1 x 100 mm, 1.8 μm, Agilent Technologies, Waldbronn, Germany)에서 lipidomic 프로파일링을 실행했으며, 이동상 A는 0.1% 수성 포름산과 10mM 아세트산 암모늄 및 이동상 B는 ACN/이소프로필 알코올(50/50) 중 0.1% 포름산 및 10mM 암모늄 아세테이트로 구성되었습니다. 오토샘플러와 컬럼 오븐은 각각 4°C와 55°C로 유지되었습니다. 주사 부피는 5μl였다. MS 획득은 전구체 이온 스캔(PIS) 모드 및 다중 반응 모니터링(MRM) 모드에서 실행되었습니다.
3. 모든 UPLC-MS 원시 데이터는 Trapper(ISB)를 사용하여 mzXML 형식으로 변환되었고 사내 패키지인 TIPick에 의해 정규화되었으며, 대상 대사산물에 대해 선택된 피크 향상 및 피크도 포함되었습니다. Metabolomics Core Laboratory, Center of Genomic의 스핑고미엘린(SM), 리소포스파티딜콜린(LysoPC), 세라마이드(Cer), 포스파티딜콜린(PC), 포스파티딜이노시톨(PI), 포스파티딜에탄올아민(PE) 및 세레브로사이드(CB)의 사내 데이터베이스 National Taiwan University의 Medicine이 스크리닝에 사용되었습니다.