Precisiegeneeskunde voor Sng / pijnbestrijding (SNG)

Pijn wordt door de International Association for the Study of Pain (IASP) gedefinieerd als "een onaangename zintuiglijke en emotionele ervaring die gepaard gaat met daadwerkelijke of potentiële weefselbeschadiging of beschreven wordt in termen van dergelijke schade". De musculoskeletale aandoeningen zijn niet alleen de meest voorkomende oorzaak van chronische pijn/pijn, maar ze leiden ook tot aanzienlijke invaliditeit bij ongeveer 50% van de patiënten in de VS. Bovendien zijn deze aandoeningen de meest voorkomende oorzaak van ernstige, langdurige pijn en invaliditeit bij ouderen ouder dan 65 jaar. In de praktijk van pijngeneeskunde gebruiken de artsen voornamelijk multimodale behandelingen, waaronder medicijnen, fysieke middelen en injectie, om het ongemak van patiënten te verlichten.

In de afgelopen jaren heeft ons team enkele successen geboekt die de zoektocht naar genetische varianten voor de ontwikkeling van een nieuw pijn-/pijnbehandelingsalgoritme rechtvaardigden.

(1) Analgesie van LLLT is via TRPV1. (2) Analgesie door therapeutische echografie is via ASIC3. (3) Dextrose-injectie verminderde chronische spierpijn door ASIC1a. (4) Biomarker voor pijn/pijn bij fibromyalgie.

Volgens de klinische uitkomst reageerden sommige patiënten goed op fysische middelen, en sommigen gaven de voorkeur aan injecties. De genetische varianten van de bovengenoemde genen kunnen de bepalende factoren zijn voor differentiële therapeutische effecten. Het duurde echter ongeveer 4-8 weken voordat een patiënt van de ene behandelingsoptie naar de andere overschakelde. Als onderzoekers de optimale behandelingsmodaliteit kunnen bepalen door genetische biomarkers, zal het behandelingsverloop en de totale uitgestrektheid veel afnemen.

Onderzoekers veronderstellen dat de genetische varianten van de voorgestelde genen (TRPV1, ASIC1a, ASIC3, Tac1, COMT, TCL1A, POMC, RGS4, ASIC2, ASIC4, TRPA1, NK1R, G2A, GPR4, OGR1, TDAG8, TASK1, TASK2, TASK3, TREK1 , P2X2, P2X3, P2X5, TRPV4, KCNK1, NTSR1, NTSR2) zouden de prognostische biomarkers kunnen zijn van pijnlijke/pijnbehandelingen. Onze specifieke doelstellingen zijn:

1. Een op next generation sequencing (NGS) gebaseerde benadering opzetten om genetische varianten te vinden die de respons van pijn-/pijnbehandelingsmodaliteiten kunnen bepalen.
2. Om mogelijke metabolomics en proteomics markers van pijn/pijn te vinden.
3. Het algoritme van precisiegeneeskunde bepalen voor pijnbestrijding via de genetische markers.

Zes. onderzoeksopzet I Geschiktheid van patiënten Onderzoekers zullen patiënten rekruteren van de afdeling Bei-Hu van het National Taiwan University Hospital.

Inclusiecriteria: (1) Leeftijd tussen 20-100 jaar oud. (2) Gediagnosticeerd als patiënten met myofasciaal pijnsyndroom en bereid om behandeling te ondergaan (inclusief LLLT, therapeutische echografie en lokale dextrose-injectietherapie). De diagnose MPS werd door de hoofdonderzoeker bevestigd aan de hand van de criteria strakke band, triggerpoint en uitstralende pijn.

Uitsluitingscriteria: Degenen met een actieve infectie, maligniteit en hematologische aandoeningen werden uitgesloten. De patiënten die binnen 3 maanden een lokale injectie ter hoogte van de trapezius hadden gekregen, zijn eveneens uitgesloten.

II Onderzoeksopzet en flow

1. Na het verkrijgen van de geïnformeerde toestemming worden de demografische basisgegevens verzameld, waaronder leeftijd, geslacht, baan, opleidingsniveau en medische geschiedenis van in aanmerking komende patiënten.
2. De in aanmerking komende patiënten kregen eerst LLLT met een golflengte van 685 nm en een output van 30 mW bij energiedichtheden van 8 J/cm2 op het triggerpunt van de bovenste trapeziusspier. De VAS-pijn en VAS-sng vóór en na de behandeling worden verzameld voor respectievelijk LLLT-fenotypebepaling.
3. Vervolgens worden ze willekeurig ingedeeld in twee groepen (40 proefpersonen in elke groep): A. therapeutische echografiegroep; B. prolotherapiegroep. Groep A ontvangt 1 MHz therapeutisch ultrageluid gedurende 5 minuten met een frequentie van 2-3 keer per week op de pijnlijke bovenste trapeziusspier. Groep B krijgt hypertone prolotherapie aan het perimysium van de bovenste trapeziusspier. Het injectiemiddel is 5 ml 5% dextrose-oplossing. Om er zeker van te zijn dat de naald zich niet in een bloedvat bevond, werd de naald vóór injectie afgezogen. Dezelfde arts (de hoofdonderzoeker) injecteert alle patiënten om variabiliteit tussen artsen te voorkomen. Er werd geen andere medicatie of fysieke modaliteit gegeven om interferentie met de werkzaamheid in beide groepen te voorkomen.
4. De aangeworven patiënten worden voor en na de injectie beoordeeld, en 2 weken na de injectie. Het primaire resultaat is VAS-pijn en VAS-pijn (visuele analoge schaal) met een score van 0-100, waarbij 100 de waarde is die de hoogste mate van pijn vertegenwoordigt. De secundaire uitkomsten zijn pijngrens, spiertonus en de SF-36-a-vragenlijst bestaat uit 36 ​​items en 8 domeinen die betrekking hebben op de perceptie van de patiënt over zijn of haar kwaliteit van leven. Veneuze bloed- en urinemonsters werden verzameld bij respectievelijk het eerste bezoek en het bezoek na 2 weken. De bloedmonsters werden gelabeld met een geanonimiseerd ID-nummer, gecentrifugeerd en bewaard bij -80 ºC in een afgesloten vriezer tot het moment van toekomstige verwerking. De buffy coat wordt na centrifugeren gescheiden en ook opgeslagen. De urinemonsters werden in porties verdeeld en bij -80 ºC in een afgesloten vriezer bewaard voor toekomstige analyse.
5. Rescue-therapie (cross-over-behandeling): als de deelnemer niet tevreden is met hun eerste ronde behandeling en de verbetering van VAS is minder dan 1,0, dan komen ze in aanmerking voor de rescue-therapie - de behandeling in de andere groep. En ze gaan nog 2 weken terug naar de kliniek. Ook bij het 3e bezoek worden de uitkomstvariabelen verzameld.

(1) DNA-extractie en NGS-gebaseerde sequencing en genotypering Genomisch DNA zal worden geëxtraheerd uit perifere mononucleaire bloedcellen van de deelnemers met behulp van de Gentra Puregene-kit volgens het protocol van de fabrikant, en onderworpen aan agarosegel en O.D. verhoudingstests om de zuiverheid en concentratie ervan te bevestigen. DNA zal worden gefragmenteerd met behulp van Covaris, waarbij wordt gestreefd naar een pieklengte van 800 bp. Illumina-bibliotheken worden gegenereerd op basis van gDNA met behulp van de TruSeq Library Preparation Kit.

DNA-captureprobes zullen op maat worden ontworpen om zich te richten op TRPV1, ASIC1a, ASIC3, Tac1, COMT, TCL1A, POMC, RGS4, ASIC2, ASIC4, TRPA1, NK1R, G2A, GPR4, OGR1, TDAG8, TASK1, TASK2, TASK3, TREK1, P2X2, P2X3, P2X5, TRPV4, KCNK1, NTSR1, NTSR2 en zullen worden gesynthetiseerd met behulp van het Roche KAPA HyperChoice-protocol. Alle coderende regio's en niet-coderende regio's (promotors, introns, 5' en 3' onvertaalde regio's) van deze 8 genen zullen worden opgenomen.

NGS-doelgebiedverrijking wordt toegepast om het doelgebied te verrijken/vast te leggen (~148 Kb). De verrijkte bibliotheken worden vervolgens gesequenced met behulp van Illumina MiSeq om paired-end reads van 300 bp te genereren. De verwachte diepte van de beoogde regio's zal gemiddeld 200x zijn.

(2) Metabolomische en proteomische analyse

1. In het kort, de LC-MS-analyses van urine en serum met behulp van een Agilent 1290 UPLC-systeem (ACQUITY UPLC HSS T3-kolom, 2,1 × 100 mm; 1,8 µm; Waters, Milford, MA, VS) gekoppeld aan de 6540-Quadrupole-Time- of-Flight (QTOF) massasysteem (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, VS). MS raw-bestanden werden geconverteerd naar het mzXML-formaat met behulp van Trapper (ISB) en verwerkt door TIPick, een intern pakket. Na TIPick-verwerking werd de op schaal gebaseerde normalisatie uitgevoerd volgens de totale ion-abundanties van elke UHPLC-MS-gegevensset.
2. De LC-MS lipidomische profilering werd uitgevoerd en in detail beschreven. Kortom, lipidomische profilering werd uitgevoerd op een ZORBAX Eclipse Plus C18 (2,1 x 100 mm, 1,8 µm, Agilent Technologies, Waldbronn, Duitsland) voor QTOF, evenals mobiele fase A bestond uit 0,1% waterig mierenzuur en 10 mM ammoniumacetaat en mobiele fase B bestond uit 0,1% mierenzuur en 10 mM ammoniumacetaat in ACN/isopropylalcohol (50/50). De autosampler en kolomoven werden respectievelijk op 4°C en 55°C gehouden. Het injectievolume was 5 μl. MS-acquisitie werd uitgevoerd in de modus Precursor Ion Scan (PIS) en Multiple Reaction Monitoring (MRM).
3. Alle onbewerkte UPLC-MS-gegevens werden geconverteerd naar mzXML-indeling met behulp van Trapper (ISB) en genormaliseerd door TIPick, een intern pakket, evenals piekverbetering en piek gekozen voor de beoogde metabolieten. Een interne database van sfingomyelinen (SM), lysofosfatidylcholine (LysoPC), ceramiden (Cer), fosfatidylcholines (PC's), fosfatidylinositol (PI), fosfatidylethanolamine (PE) en cerebroside (CB) in het Metabolomics Core Laboratory, Centre of Genomic Medicine, National Taiwan University, werd gebruikt voor screening.