Presisjonsmedisin for Sng/smertekontroll (SNG)

Smerte er definert som "en ubehagelig sensorisk og emosjonell opplevelse assosiert med faktisk eller potensiell vevsskade eller beskrevet i form av slik skade" av International Association for the Study of Pain (IASP). Muskel- og skjelettplagene er ikke bare den vanligste årsaken til kroniske sår/smerter, men de resulterer også i betydelig funksjonshemming hos omtrent 50 % av pasientene i USA. Videre, siden disse lidelsene er den vanligste årsaken til alvorlige, langvarige smerter og funksjonshemming hos eldre over 65 år. I praksisen med smertemedisin bruker legene overveiende multimodal behandling, inkludert medisiner, fysiske midler og injeksjoner, for å lindre pasientenes ubehag.

I de siste årene har teamet vårt oppnådd noen prestasjoner for å rettferdiggjøre søket etter genetiske varianter for utvikling av en ny sår/smertebehandlingsalgoritme.

(1) Analgesi av LLLT er gjennom TRPV1. (2) Analgesi ved terapeutisk ultralyd er gjennom ASIC3. (3) Dekstroseinjeksjon reduserte kroniske muskelsmerter gjennom ASIC1a. (4) Biomarkør for sår/smerte ved fibromyalgi.

I henhold til det kliniske resultatet reagerte noen pasienter godt på fysiske midler, og noen foretrakk injeksjoner. De genetiske variantene av de ovenfor nevnte gener kan være de avgjørende faktorene for differensielle terapeutiske effekter. Det tok imidlertid omtrent 4-8 uker for en pasient å bytte fra ett behandlingsalternativ til et annet. Hvis etterforskere kan bestemme den optimale behandlingsmodaliteten ved hjelp av genetiske biomarkører, vil behandlingsforløpet og den totale utstrekningen reduseres mye.

Etterforskere antar at de genetiske variantene av de foreslåtte genene (TRPV1, ASIC1a, ASIC3, Tac1, COMT, TCL1A, POMC, RGS4, ASIC2, ASIC4, TRPA1, NK1R, G2A, GPR4, OGR1, TDAG8, TASK1, TASK2, TREKTA , P2X2, P2X3, P2X5, TRPV4, KCNK1, NTSR1, NTSR2) kan være prognostiske biomarkører for sår/smertebehandlinger. Våre spesifikke mål er:

1. Å sette opp neste generasjons sekvensering (NGS)-basert tilnærming for å finne genetiske varianter som kan bestemme responsen til sår/smertebehandlingsmodaliteter.
2. For å finne mulig metabolomikk og proteomiske markører for sår/smerte.
3. For å bestemme algoritmen for presisjonsmedisin for sår/smertekontroll via de genetiske markørene.

Seks. studiedesign I Pasientkvalifisering Undersøkere vil rekruttere pasienter fra National Taiwan University Hospital Bei-Hu Branch.

Inkluderingskriterier: (1) Alder mellom 20-100 år. (2) Diagnostisert som pasienter med myofascial smertesyndrom og villig til å motta behandling (inkludert LLLT, terapeutisk ultralyd og lokal dekstrose-injeksjonsbehandling). Diagnosen MPS ble bekreftet av hovedetterforskeren ved å bruke kriteriene stramt bånd, triggerpunkt og utstrålende smerte.

Eksklusjonskriterier: De med aktiv infeksjon, malignitet og hematologiske sykdommer ble ekskludert. Pasientene som hadde fått lokal injeksjon ved øvre trapezius innen 3 måneder er også ekskludert.

II Studiedesign og flyt

1. Etter å ha innhentet det informerte samtykket, samles de grunnleggende demografiske dataene, inkludert alder, kjønn, jobb, utdanningsnivå og tidligere medisinsk historie til kvalifiserte pasienter.
2. De kvalifiserte pasientene fikk først LLLT med en bølgelengde på 685 nm og en effekt på 30 mW ved energitettheter på 8 J/cm2 ved triggerpunktet til øvre trapezius-muskel. VAS-smerten før og etter behandling og VAS-sng samles inn for henholdsvis LLLT-fenotypebestemmelse.
3. Deretter blir de tilfeldig fordelt i to grupper (40 personer i hver gruppe): A. terapeutisk ultralydgruppe; B. proloterapigruppe. Gruppe A mottar 1 MHz terapeutisk ultralyd i 5 minutter med en frekvens på 2-3 ganger per uke ved den smertefulle øvre trapezius-muskelen. Gruppe B mottar hyperton proloterapi ved perimysium av øvre trapeziusmuskel. Injeksjonsvæsken er 5 ml 5 % dekstroseløsning. For å sikre at nålen ikke var i en blodåre, ble kanylen aspirert før injeksjon. Den samme legen (hovedetterforskeren) injiserer alle pasientene for å unngå variasjon mellom legene. Ingen annen medisin eller fysisk modalitet ble gitt for å unngå effektforstyrrelser i begge gruppene.
4. De rekrutterte pasientene får evaluering før og etter injeksjon, og 2 uker etter injeksjon. Det primære utfallet er VAS-smerte og VAS-sår (visuell analog skala) med en skår på 0-100, hvor 100 er verdien som representerer den høyeste graden av smerte. De sekundære resultatene er smerteterskel, muskeltonus og SF-36-et spørreskjema består av 36 elementer og 8 domener som tar for seg pasientens oppfatning av deres livskvalitet. Venøse blod- og urinprøver ble tatt ved henholdsvis første besøk og 2 ukers besøk. Blodprøvene ble merket med et anonymisert ID-nummer, sentrifugert og oppbevart ved -80 ºC i en låst fryser frem til fremtidig behandling. Buffy coaten separeres etter sentrifugering og lagres også. Urinprøvene ble alikvotert og lagret ved -80 ºC i en låst fryser for fremtidig analyse.
5. Redningsterapi (kryssbehandling): Hvis deltakeren ikke er fornøyd med sin første behandlingsrunde og forbedringen av VAS er mindre enn 1,0, er de kvalifisert til å motta redningsterapien - behandlingen i den andre gruppen. Og de skal tilbake til klinikken i ytterligere 2 uker. Utfallsvariablene vil også bli samlet inn ved 3. besøk.

(1) DNA-ekstraksjon og NGS-basert sekvensering og genotyping Genomisk DNA vil bli ekstrahert fra perifert blod mononukleære celler fra deltakerne ved bruk av Gentra Puregene-settet i henhold til protokollen fra produsenten, og utsatt for agarosegel og O.D. forholdstester for å bekrefte renheten og konsentrasjonen. DNA vil bli fragmentert ved bruk av Covaris, med sikte på en topplengde på 800 bp. Illumina-biblioteker vil bli generert fra gDNA ved hjelp av TruSeq Library Preparation Kit.

DNA-fangstprober vil bli spesialdesignet for å målrette mot TRPV1, ASIC1a, ASIC3, Tac1, COMT, TCL1A, POMC, RGS4, ASIC2, ASIC4, TRPA1, NK1R, G2A, GPR4, OGR1, TDAG8, TASK1, TASK2, TASK3, TREK1, P2X2, P2X3, P2X5, TRPV4, KCNK1, NTSR1, NTSR2 og vil bli syntetisert ved hjelp av Roche KAPA HyperChoice-protokollen. Alle de kodende regionene og ikke-kodende regionene (promotere, introner, 5' og 3' utranslaterte regioner) av disse 8 genene vil bli inkludert.

NGS-målregionanriking vil bli brukt for å berike/fange målregionen (~148 Kb). De berikede bibliotekene vil deretter bli sekvensert ved hjelp av Illumina MiSeq for å generere parede avlesninger på 300 bp. Den forventede dybden til de målrettede regionene vil i gjennomsnitt være 200x.

(2) Metabolomisk og proteomisk analyse

1. Kort fortalt involverte LC-MS-analysene av urin og serum bruk av et Agilent 1290 UPLC-system (ACQUITY UPLC HSS T3-kolonne, 2,1×100 mm; 1,8 µm; Waters, Milford, MA, USA) kombinert med 6540-Quadrupole-Time- of-Flight (QTOF) massesystem (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA). MS råfiler ble konvertert til mzXML-formatet ved hjelp av Trapper (ISB) og behandlet av TIPick, en intern pakke. Etter TIPick-behandling ble den skaleringsbaserte normaliseringen utført i henhold til de totale ionemengdene fra hvert UHPLC-MS-datasett.
2. LC-MS lipidomisk profilering ble utført og beskrevet i detalj. Kortfattet ble lipidomisk profilering kjørt på en ZORBAX Eclipse Plus C18 (2,1 x 100 mm, 1,8 µm, Agilent Technologies, Waldbronn, Tyskland) for QTOF, samt mobil fase A besto av 0,1 % vandig maursyre og 10 mM ammoniumacetat og mobil fase B besto av 0,1 % maursyre og 10 mM ammoniumacetat i ACN/isopropylalkohol (50/50). Autosampleren og kolonneovnen ble holdt ved henholdsvis 4°C og 55°C. Injeksjonsvolumet var 5 μl. MS-anskaffelse ble utført i forløperionskanningsmodus (PIS) og multippelreaksjonsovervåkingsmodus (MRM).
3. Alle UPLC-MS-rådata ble konvertert til mzXML-format ved å bruke Trapper (ISB) og normalisert av TIPick, en intern pakke, samt toppforsterkning og topp valgt for de målrettede metabolittene. En intern database med sfingomyeliner (SM), lysofosfatidylkolin (LysoPC), ceramider (Cer), fosfatidylkoliner (PC), fosfatidylinositol (PI), fosfatidyletanolamin (PE) og cerebrosid (CB) i Metabolomics Core Laboratory, Center of Genomic Medisin, National Taiwan University, ble brukt til screening.