Médecine de précision pour Sng/contrôle de la douleur (SNG)

La douleur est définie comme "une expérience sensorielle et émotionnelle désagréable associée à des lésions tissulaires réelles ou potentielles ou décrite en termes de telles lésions" par l'Association internationale pour l'étude de la douleur (IASP). Les troubles musculo-squelettiques ne sont pas seulement la cause la plus fréquente de douleurs chroniques, mais ils entraînent également une invalidité importante chez environ 50 % des personnes atteintes aux États-Unis. De plus, étant donné que ces troubles sont la cause la plus fréquente de douleur et d'invalidité graves et à long terme chez les personnes âgées de plus de 65 ans. Dans la pratique de la médecine de la douleur, les médecins utilisent principalement un traitement multimodal, comprenant des médicaments, des agents physiques et des injections, pour soulager l'inconfort des patients.

Au cours des dernières années, notre équipe a eu quelques réalisations pour justifier la recherche de variants génétiques pour le développement d'un nouvel algorithme de traitement des plaies/douleurs.

(1) L'analgésie de LLLT passe par TRPV1. (2) L'analgésie par ultrasons thérapeutiques se fait par ASIC3. (3) L'injection de dextrose a diminué la douleur musculaire chronique grâce à l'ASIC1a. (4) Biomarqueur des plaies/douleurs dans la fibromyalgie.

Selon les résultats cliniques, certains patients ont bien répondu aux agents physiques et certains ont préféré les injections. Les variants génétiques des gènes susmentionnés pourraient être les facteurs déterminants d'effets thérapeutiques différentiels. Cependant, il a fallu environ 4 à 8 semaines à un patient pour passer d'une option de traitement à une autre. Si les chercheurs peuvent déterminer la modalité de traitement optimale par des biomarqueurs génétiques, le cours du traitement et l'étendue totale diminueront beaucoup.

Les enquêteurs émettent l'hypothèse que les variantes génétiques des gènes proposés (TRPV1, ASIC1a, ASIC3, Tac1, COMT, TCL1A, POMC, RGS4, ASIC2, ASIC4, TRPA1, NK1R, G2A, GPR4, OGR1, TDAG8, TASK1, TASK2, TASK3, TREK1 , P2X2, P2X3, P2X5, TRPV4, KCNK1, NTSR1, NTSR2) pourraient être les biomarqueurs pronostiques des traitements des plaies/douleurs. Nos objectifs spécifiques sont :

1. Mettre en place une approche basée sur le séquençage de nouvelle génération (NGS) pour trouver des variantes génétiques qui peuvent déterminer la réponse des modalités de traitement des plaies/douleurs.
2. Trouver d'éventuels marqueurs métabolomiques et protéomiques de la douleur.
3. Déterminer l'algorithme de la médecine de précision pour le contrôle des plaies/douleurs via les marqueurs génétiques.

Six. conception de l'étude I Éligibilité des patients Les enquêteurs recruteront des patients de la branche Bei-Hu de l'hôpital universitaire national de Taiwan.

Critères d'inclusion : (1) Âge entre 20 et 100 ans. (2) Diagnostiqués comme patients atteints du syndrome de la douleur myofasciale et disposés à recevoir un traitement (y compris LLLT, ultrasons thérapeutiques et thérapie par injection locale de dextrose). Le diagnostic de MPS a été confirmé par l'investigateur principal en utilisant les critères de bande tendue, de point gâchette et de douleur irradiante.

Critères d'exclusion : les personnes ayant une infection active, une malignité et des maladies hématologiques ont été exclues. Les patients ayant reçu une injection locale au trapèze supérieur dans les 3 mois sont également exclus.

II Conception et déroulement de l'étude

1. Après avoir obtenu le consentement éclairé, les données démographiques de base, y compris l'âge, le sexe, l'emploi, le niveau d'éducation et les antécédents médicaux des patients éligibles sont collectées.
2. Les patients éligibles ont d'abord reçu LLLT avec une longueur d'onde de 685 nm et une puissance de 30 mW à des densités d'énergie de 8 J/cm2 au point de déclenchement du muscle trapèze supérieur. L'EVA-douleur et l'EVA-sng pré- et post-traitement sont collectés pour la détermination du phénotype LLLT, respectivement.
3. Ensuite, ils sont répartis au hasard en deux groupes (40 sujets dans chaque groupe) : A. groupe d'échographie thérapeutique ; B. groupe de prolothérapie. Le groupe A reçoit des ultrasons thérapeutiques de 1 MHz pendant 5 min à une fréquence de 2 à 3 fois par semaine au niveau du muscle trapèze supérieur douloureux. Le groupe B reçoit une prolothérapie hypertonique au périmysium du muscle trapèze supérieur. L'injectable est 5 ml de solution de dextrose à 5 %. Pour s'assurer que l'aiguille n'était pas dans un vaisseau sanguin, l'aiguille a été aspirée avant l'injection. Le même médecin (l'investigateur principal) injecte tous les patients pour éviter la variabilité inter-médecin. Aucun autre médicament ou modalité physique n'a été administré pour éviter une interférence d'efficacité dans les deux groupes.
4. Les patients recrutés reçoivent une évaluation avant et après l'injection, et 2 semaines après l'injection. Le critère de jugement principal est l'EVA-douleur et l'EVA-douleur (échelle visuelle analogique) avec un score de 0 à 100, où 100 est la valeur représentant le degré de douleur le plus élevé. Les critères de jugement secondaires sont le seuil de douleur, le tonus musculaire et le questionnaire SF-36-a se compose de 36 items et de 8 domaines traitant de la perception du patient de sa qualité de vie. Des échantillons de sang veineux et d'urine ont été prélevés lors de la première visite et de la visite de 2 semaines, respectivement. Les échantillons de sang ont été étiquetés avec un numéro d'identification anonymisé, centrifugés et stockés à -80 ºC dans un congélateur verrouillé jusqu'au moment du traitement futur. La couche leucocytaire est séparée après centrifugation et également stockée. Les échantillons d'urine ont été aliquotés et conservés à -80 ºC dans un congélateur verrouillé pour une analyse future.
5. Thérapie de secours (traitement croisé) : si le participant n'est pas satisfait de son traitement de premier cycle et que l'amélioration de l'EVA est inférieure à 1,0, il est alors éligible pour recevoir la thérapie de secours - le traitement de l'autre groupe. Et ils retourneront à la clinique pour encore 2 semaines. Les variables de résultat seront également collectées lors de la 3ème visite.

(1) Extraction d'ADN et séquençage et génotypage basés sur NGS L'ADN génomique sera extrait des cellules mononucléaires du sang périphérique des participants à l'aide du kit Gentra Puregene en suivant le protocole du fabricant, et soumis à un gel d'agarose et à une O.D. tests de ratio pour confirmer sa pureté et sa concentration. L'ADN sera fragmenté à l'aide de Covaris, visant une longueur de pic de 800 pb. Les bibliothèques Illumina seront générées à partir d'ADNg à l'aide du kit de préparation de bibliothèque TruSeq.

Les sondes de capture d'ADN seront conçues sur mesure pour cibler TRPV1, ASIC1a, ASIC3, Tac1, COMT, TCL1A, POMC, RGS4, ASIC2, ASIC4, TRPA1, NK1R, G2A, GPR4, OGR1, TDAG8, TASK1, TASK2, TASK3, TREK1, P2X2, P2X3, P2X5, TRPV4, KCNK1, NTSR1, NTSR2 et seront synthétisés à l'aide du protocole Roche KAPA HyperChoice. Toutes les régions codantes et régions non codantes (promoteurs, introns, régions 5' et 3' non traduites) de ces 8 gènes seront incluses.

L'enrichissement de la région cible NGS sera appliqué pour enrichir/capturer la région cible (~ 148 Kb). Les bibliothèques enrichies seront ensuite séquencées à l'aide d'Illumina MiSeq pour générer des lectures appariées de 300 pb. La profondeur attendue des régions ciblées sera de 200x en moyenne.

(2) Analyse métabolomique et protéomique

1. En bref, les analyses LC-MS d'urine et de sérum réalisées à l'aide d'un système Agilent 1290 UPLC (colonne ACQUITY UPLC HSS T3, 2,1×100 mm ; 1,8 µm ; Waters, Milford, MA, USA) couplé au 6540-Quadrupole-Time- système de masse de vol (QTOF) (Agilent Technologies, Santa Clara, Californie, États-Unis). Les fichiers bruts MS ont été convertis au format mzXML à l'aide de Trapper (ISB) et traités par TIPick, un package interne. Après le traitement TIPick, la normalisation basée sur la mise à l'échelle a été effectuée en fonction des abondances totales d'ions de chaque ensemble de données UHPLC-MS.
2. Le profilage lipidomique LC-MS a été réalisé et décrit en détail. De manière concise, le profilage lipidomique a été effectué sur un ZORBAX Eclipse Plus C18 (2,1 x 100 mm, 1,8 µm, Agilent Technologies, Waldbronn, Allemagne) pour QTOF, ainsi que la phase mobile A composée d'acide formique aqueux à 0,1 % et d'acétate d'ammonium 10 mM et la phase mobile B consistait en 0,1 % d'acide formique et 10 mM d'acétate d'ammonium dans ACN/alcool isopropylique (50/50). L'échantillonneur automatique et le four à colonne ont été maintenus à 4°C et 55°C, respectivement. Le volume d'injection était de 5 µl. L'acquisition MS a été exécutée en mode de balayage d'ions précurseurs (PIS) et en mode de surveillance de réactions multiples (MRM).
3. Toutes les données brutes UPLC-MS ont été converties au format mzXML à l'aide de Trapper (ISB) et normalisées par TIPick, un package interne, ainsi que l'amélioration du pic et le pic choisi pour les métabolites ciblés. Une base de données interne sur les sphingomyélines (SM), la lysophosphatidylcholine (LysoPC), les céramides (Cer), les phosphatidylcholines (PC), le phosphatidylinositol (PI), la phosphatidyléthanolamine (PE) et le cérébroside (CB) dans le Laboratoire central de métabolomique, Centre de génomique La médecine, Université nationale de Taiwan, a été utilisée pour le dépistage.