Medicina de precisión para el control del dolor/cansancio (SNG)

El dolor se define como "una experiencia sensorial y emocional desagradable asociada con un daño tisular real o potencial o descrita en términos de dicho daño" por la Asociación Internacional para el Estudio del Dolor (IASP). Los trastornos musculoesqueléticos no solo son la causa más común de molestias/dolor crónico, sino que también provocan una discapacidad significativa en aproximadamente el 50 % de los pacientes en los EE. UU. Además, dado que estos trastornos son la causa más común de dolor severo y de larga duración y de discapacidad en los ancianos mayores de 65 años. En la práctica de la medicina del dolor, los médicos utilizan predominantemente un tratamiento multimodal, que incluye medicamentos, agentes físicos e inyecciones, para aliviar el malestar de los pacientes.

En los últimos años, nuestro equipo tuvo algunos logros para justificar la búsqueda de variantes genéticas para el desarrollo de un nuevo algoritmo de tratamiento de dolor/llagas.

(1) La analgesia de LLLT es a través de TRPV1. (2) La analgesia por ultrasonido terapéutico es a través de ASIC3. (3) La inyección de dextrosa disminuyó el dolor muscular crónico a través de ASIC1a. (4) Biomarcador para llagas/dolor en fibromialgia.

Según el resultado clínico, algunos pacientes respondieron bien a los agentes físicos y algunos prefirieron las inyecciones. Las variantes genéticas de los genes mencionados anteriormente podrían ser los factores determinantes de los efectos terapéuticos diferenciales. Sin embargo, el paciente tardaba entre 4 y 8 semanas en cambiar de una opción de tratamiento a otra. Si los investigadores pueden determinar la modalidad de tratamiento óptima mediante biomarcadores genéticos, el curso del tratamiento y la extensión total disminuirán mucho.

Los investigadores plantean la hipótesis de que las variantes genéticas de los genes propuestos (TRPV1, ASIC1a, ASIC3, Tac1, COMT, TCL1A, POMC, RGS4, ASIC2, ASIC4, TRPA1, NK1R, G2A, GPR4, OGR1, TDAG8, TASK1, TASK2, TASK3, TREK1 , P2X2, P2X3, P2X5, TRPV4, KCNK1, NTSR1, NTSR2) podrían ser los biomarcadores pronósticos de los tratamientos para el dolor/llagas. Nuestros objetivos específicos son:

1. Establecer un enfoque basado en la secuenciación de próxima generación (NGS) para encontrar variantes genéticas que puedan determinar la respuesta de las modalidades de tratamiento del dolor/llagas.
2. Para encontrar posibles marcadores metabolómicos y proteómicos de llagas/dolor.
3. Determinar el algoritmo de medicina de precisión para el control de llagas/dolor a través de los marcadores genéticos.

Seis. diseño del estudio I Elegibilidad del paciente Los investigadores reclutarán pacientes de la rama Bei-Hu del Hospital de la Universidad Nacional de Taiwán.

Criterios de inclusión: (1) Edad entre 20-100 años. (2) Pacientes diagnosticados con síndrome de dolor miofascial y deseosos de recibir tratamiento (que incluye LLLT, ultrasonido terapéutico y terapia de inyección de dextrosa local). El diagnóstico de MPS fue confirmado por el investigador principal utilizando los criterios de banda tensa, punto gatillo y dolor irradiado.

Criterios de exclusión: Se excluyeron aquellos con infección activa, malignidad y enfermedades hematológicas. También se excluyen los pacientes que recibieron una inyección local en el trapecio superior dentro de los 3 meses.

II Diseño y flujo del estudio

1. Después de obtener el consentimiento informado, se recopilan los datos demográficos básicos, incluidos la edad, el género, el trabajo, el nivel de educación y el historial médico anterior de los pacientes elegibles.
2. Los pacientes elegibles recibieron primero LLLT con una longitud de onda de 685 nm y una salida de 30 mW a densidades de energía de 8 J/cm2 en el punto gatillo del músculo trapecio superior. El VAS-dolor y el VAS-sng antes y después del tratamiento se recopilan para la determinación del fenotipo LLLT, respectivamente.
3. Luego, se asignan aleatoriamente en dos grupos (40 sujetos en cada grupo): A. grupo de ultrasonido terapéutico; B. grupo de proloterapia. El grupo A recibe ultrasonido terapéutico de 1 MHz durante 5 min a una frecuencia de 2-3 veces por semana en el músculo trapecio superior doloroso. El grupo B recibe proloterapia hipertónica en el perimisio del músculo trapecio superior. El inyectable es 5 ml de solución de dextrosa al 5%. Para asegurarse de que la aguja no estaba en un vaso sanguíneo, se aspiró la aguja antes de la inyección. El mismo médico (el investigador principal) inyecta a todos los pacientes para evitar la variabilidad entre médicos. No se administró ningún otro medicamento o modalidad física para evitar la interferencia de la eficacia en ambos grupos.
4. Los pacientes reclutados reciben una evaluación antes y después de la inyección y 2 semanas después de la inyección. El resultado primario es EVA-dolor y EVA-dolor (escala analógica visual) con una puntuación de 0 a 100, donde 100 es el valor que representa el mayor grado de dolor. Los resultados secundarios son el umbral del dolor, el tono muscular y el cuestionario SF-36-a consta de 36 ítems y 8 dominios que abordan la percepción del paciente sobre su calidad de vida. Se recogieron muestras de sangre venosa y orina en la primera visita y en la visita a las 2 semanas, respectivamente. Las muestras de sangre se etiquetaron con un número de identificación anónimo, se centrifugaron y se almacenaron a -80 ºC en un congelador cerrado hasta el momento del procesamiento futuro. La capa leucocitaria se separa después de la centrifugación y también se almacena. Las muestras de orina se dividieron en alícuotas y se almacenaron a -80 ºC en un congelador cerrado para futuros análisis.
5. Terapia de rescate (tratamiento cruzado): si el participante no está satisfecho con su tratamiento de primera ronda y la mejora de VAS es inferior a 1,0, entonces es elegible para recibir la terapia de rescate, el tratamiento en el otro grupo. Y volverán a la clínica por otras 2 semanas. Las variables de resultado también se recogerán en la tercera visita.

(1) Extracción de ADN y secuenciación basada en NGS y genotipado El ADN genómico se extraerá de células mononucleares de sangre periférica de los participantes utilizando el kit Gentra Puregene siguiendo el protocolo del fabricante, y se someterá a gel de agarosa y D.O. pruebas de relación para confirmar su pureza y concentración. El ADN se fragmentará utilizando Covaris, con el objetivo de alcanzar una longitud máxima de 800 pb. Las bibliotecas de Illumina se generarán a partir de ADNg mediante el kit de preparación de bibliotecas TruSeq.

Las sondas de captura de ADN se diseñarán a medida para apuntar a TRPV1, ASIC1a, ASIC3, Tac1, COMT, TCL1A, POMC, RGS4, ASIC2, ASIC4, TRPA1, NK1R, G2A, GPR4, OGR1, TDAG8, TASK1, TASK2, TASK3, TREK1, P2X2, P2X3, P2X5, TRPV4, KCNK1, NTSR1, NTSR2 y se sintetizarán utilizando el protocolo Roche KAPA HyperChoice. Se incluirán todas las regiones codificantes y no codificantes (promotores, intrones, regiones no traducidas 5' y 3') de estos 8 genes.

El enriquecimiento de la región de destino de NGS se aplicará para enriquecer/capturar la región de destino (~148 Kb). A continuación, las bibliotecas enriquecidas se secuenciarán con Illumina MiSeq para generar lecturas de extremos emparejados de 300 pb. La profundidad esperada de las regiones seleccionadas será de 200x en promedio.

(2) Análisis metabolómico y proteómico

1. Brevemente, los análisis LC-MS de orina y suero involucraron el uso de un sistema Agilent 1290 UPLC (columna ACQUITY UPLC HSS T3, 2,1 × 100 mm; 1,8 µm; Waters, Milford, MA, EE. UU.) junto con el 6540-Quadrupole-Time- sistema de masa de vuelo (QTOF) (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, EE. UU.). Los archivos sin procesar de MS se convirtieron al formato mzXML utilizando Trapper (ISB) y se procesaron con TIPick, un paquete interno. Después del procesamiento de TIPick, la normalización basada en escala se realizó de acuerdo con la abundancia total de iones de cada conjunto de datos de UHPLC-MS.
2. El perfil lipidómico LC-MS se realizó y describió en detalle. De forma concisa, el perfil lipidómico se ejecutó en un ZORBAX Eclipse Plus C18 (2,1 x 100 mm, 1,8 µm, Agilent Technologies, Waldbronn, Alemania) para QTOF, así como la fase móvil A consistía en ácido fórmico acuoso al 0,1 % y acetato de amonio 10 mM y la fase móvil B consistía en ácido fórmico al 0,1% y acetato de amonio 10 mM en ACN/alcohol isopropílico (50/50). El automuestreador y el horno de columna se mantuvieron a 4 °C y 55 °C, respectivamente. El volumen de inyección fue de 5 μl. La adquisición de MS se ejecutó en el modo de barrido de iones precursores (PIS) y en el modo de monitorización de reacciones múltiples (MRM).
3. Todos los datos sin procesar de UPLC-MS se convirtieron al formato mzXML mediante el uso de Trapper (ISB) y se normalizaron mediante TIPick, un paquete interno, así como la mejora del pico y el pico elegido para los metabolitos objetivo. Una base de datos interna de esfingomielinas (SM), lisofosfatidilcolina (LysoPC), ceramidas (Cer), fosfatidilcolinas (PC), fosfatidilinositol (PI), fosfatidiletanolamina (PE) y cerebrosido (CB) en el Laboratorio Central de Metabolómica, Centro de Genómica Medicina, Universidad Nacional de Taiwán, se utilizó para la detección.