機能性オリーブオイルとして配合されたオレアノール酸のバイオアベイラビリティ (BIO-OLTRAD)

バイオアベイラビリティ アッセイの設計と実装 機能性オリーブ オイルとして処方された場合のオレアノール酸 (OA) の経口バイオアベイラビリティとその全身輸送メカニズムの研究は、20 人の健康なボランティアによる食後の介入によってアプローチされます。

参加者は、完全な生化学的および血液学的分析が正常範囲内の結果をもたらした後、および消化器、代謝または腫瘍学的障害、または臨床研究者の意見で、彼らが試験に参加するのを妨げる可能性があります。 試験に含めるには、口頭および文書の両方で便利な情報を得た後、人間研究のための機関委員会によって承認されたプロトコルに書面による同意を与えることも必要です。

フィールドワークは、セビリア (スペイン) の大学病院 'Virgen del Rocio' の内分泌学および栄養サービスの Day Hospital で実施されます。

サンプルサイズ。 この試験で調べる主な量的変数は、OA 血清濃度です。 これまでに公開された一貫したベースライン データがないため、PREDIABOLE 研究 (ISRCTN03372660) の血清中の OA の分析からのデータが使用されています。 市販のオリーブ オイルを摂取している対照群から 25 人の参加者のコホートが選択され、平均ベースライン濃度 155 ± 72 ng OA/mL が決定されました。 これを考慮すると、機能性オリーブオイル（等価用量 30 mg OA）の摂取の結果として、血漿 OA 含有量が少なくとも 50% 増加すると仮定されています。 この一方的な仮説検定を証明するには、信頼水準 90% (リスク α=0.01、zα=1.645) および検出力 95% (zβ=1.645) で、少なくとも 17 人のボランティアのサンプルサイズが必要です。 15% 未満の損失が許容できると仮定すると、調整されたサンプル サイズは 20 人の被験者になります。

参加者の既往歴と身体検査。 既往歴には、個人が示す可能性のあるすべての症状を収集するバイタルデータと一般的な履歴、病歴と手術歴、およびその後の薬理学的治療が含まれます。 ライフスタイル、自分の身体イメージの認識、食事、身体活動の種類と強度に関する情報も得られます。 さらに、筋肉量、脂肪区画（脂肪層）、浮腫の有無などを調べます。 同様に、収縮期および拡張期の血圧と心拍数が決定されます。

人体計測研究と体組成。 人体計測研究には、総体重、身長、体格指数（BMI）、ウエストとヒップの周囲の測定が含まれます。 これらの変数の調査と評価は、国際キナントロポメトリー推進協会 (ISAK) のガイドラインに従って実施されます。 体組成の研究は、TANITA® 体組成計モデル BC-418MA を使用して、電気生体インピーダンスによって実行されます。 脂肪量、除脂肪量、筋肉量、総水分量、骨量、基礎代謝量、および内臓脂肪は、年齢と性別によって検証および調整された予測式を利用して、この手法で定量化されます。

生化学的研究。 空腹時肘部血液のサンプルを採取して、一般的な肝臓および腎臓の生化学のパラメーターを決定します。 さらに、習慣的な物理的、化学的、顕微鏡的測定を含む完全な尿分析が行われます。 これらの決定は、セビリアの「Virgen del Rocío」大学病院の分析および臨床生化学研究所で実施されます。

介入 参加者は、アッセイの実行前日はアルコール飲料やタバコの摂取を避けるように勧められます。 試験日、および 12 時間の一晩絶食後、肘静脈から血液サンプルを採取します。 その後、無作為に選択された 10 人が、コーヒー、スキムミルク、全粒粉トーストを含む実験的朝食の一部として、機能性 OA 強化オリーブ オイル 55 mL (等価用量 30 mg OA) を受け取ります。 他の 10 人の参加者は、実験用食事の中で同量の対照オリーブ オイルを受け取ります。 それぞれの朝食を食べた後、食後 7 時間にわたって 1 時間ごとに一定量の肘の血液を採取します。 この間、給水は自由にできます。

4週間のウォッシュアウト期間が設定された後、消費されたオリーブオイルの種類を横断する新しい一連のテストが実行されます.

OA の薬物動態研究 肘部血液のアリコートから遠心分離によって血清を取得し、NaN3、PMSF、およびアプロチニンを防腐剤として添加して、タンパク質分解を回避します。 血清サンプルは、分析までIG-CSICの実験室で-80℃で保存される。 血清 OA の抽出と分別は、液相/液相および固相抽出によって実現されますが、トリテルペンの同定と定量化は GC-FID と GC-MS によって完了します。 データの薬物動態分析では、単一コンパートメント モデルが想定されます。 食後期間全体にわたる遊離 OA の血清含有量のデータから、次のパラメーターが決定されます。 2) 分布定数や分布量などの分布パラメータ。 3) アルブミンに関連する OA 画分などの代謝パラメーター。 4) 排出定数、半減期、クリアランスなどの排出パラメータ。 計算には、SigmaPLot 薬物動態分析モジュール (Systat Software Inc.、米国カリフォルニア州サンノゼ) を使用します。

トリグリセリド リッチ リポタンパク質 (TRL) における OA の存在の研究。 キロミクロンは、最初に、100,000 x gで20分間遠心分離することにより、通常の生理食塩水中の血漿から分離されます。 その後、超低密度リポタンパク質 (VLDL) を 230,000 × g で 18 時間分離します。 キロミクロンおよびVLDL画分は、膵酵素で加水分解されます。 放出された脂質は、クロロホルム:メタノール (2:1) で抽出され、メタノール: クロロホルム (1:1) およびイソプロパノール: アセトニトリル: 水 (2:1:1) による固液抽出によって分画されます。 遊離脂肪酸 (FFA) 組成は、対応するメチルエステルとして GC-FID によって分析されます。 TRL 由来脂質に OA が存在する可能性は、分画および GC-MS 分析後に評価されます。 それぞれカイロミクロンおよびＶＬＤＬの存在のマーカーとしてのアポＢ４８およびＢ１００の含有量は、ＥＬＩＳＡによって決定される。

他の生化学的パラメーター血清インスリン、C-ペプチド、および GLP-1 は、ELISA によって分析されます。