Biotilgængelighed af oleanolsyre formuleret som funktionel olivenolie (BIO-OLTRAD)

Design og implementering af biotilgængelighedsassays Studiet af oral biotilgængelighed af oleanolsyre (OA), når det formuleres som funktionel olivenolie, og dets mekanismer for systemisk transport, vil blive grebet an ved hjælp af en postprandial intervention med 20 raske frivillige.

Deltagerne vil blive rekrutteret, efter at den komplette biokemiske og hæmatologiske analyse giver resultater inden for normale grænser, og efter at have tjekket i deres elektroniske sygehistorie, at de ikke lider af fordøjelses-, metaboliske eller onkologiske lidelser eller nogen anden patologi, som efter de kliniske efterforskers mening , kunne forhindre dem i at deltage i retssagen. For at de kan indgå i forsøget kræves det også, at de giver det skriftlige samtykke til de protokoller, der er godkendt af de institutionelle udvalg for menneskelig forskning, efter at de er blevet bekvemt informeret både mundtligt og skriftligt.

Feltarbejdet vil blive udført på daghospitalet for endokrinologi- og ernæringstjenesten på universitetshospitalerne 'Virgen del Rocio' fra Sevilla (SPANIEN).

Prøvestørrelse. Den vigtigste kvantitative variabel, der skal undersøges i dette forsøg, er OA-serumkoncentration. I mangel af konsistente baseline-data offentliggjort indtil videre, er data fra analysen af ​​OA i sera fra PREDIABOLE-studiet (ISRCTN03372660) blevet brugt. En kohorte på 25 deltagere fra kontrolgruppen, der indtog kommerciel olivenolie, blev udvalgt, og en gennemsnitlig baselinekoncentration på 155 ± 72 ng OA/ml blev bestemt. I betragtning af dette, er det nu postuleret, at plasma-OA-indholdet vil stige med mindst 50% som følge af indtagelsen af ​​den funktionelle olivenolie (ækvivalent dosis 30 mg OA). For at bevise denne ensidige hypotesetest, med et konfidensniveau på 90 % (risiko α=0,01, zα=1,645) og en styrke på 95 % (zβ=1,645), kræves en stikprøvestørrelse på mindst 17 frivillige. Hvis det antages, at tab lavere end 15 % er tolerable, ville den justerede stikprøvestørrelse være 20 forsøgspersoner.

Anamnese og fysisk undersøgelse af deltagere. Anamnesen vil omfatte vitale data og generel historie, der indsamler alle de symptomer, som individet kan præsentere, deres medicinske og kirurgiske historie, samt farmakologiske behandlinger fulgt. Der vil også blive indhentet information om livsstil, opfattelse af eget kropsbillede, kost og art og intensitet af fysisk aktivitet. Derudover vil muskelmassen, fedtrummet (adipose panniculus), eksistensen af ​​ødem osv. blive undersøgt. Ligeledes vil det systoliske og diastoliske blodtryk og hjertefrekvens blive bestemt.

Antropometrisk undersøgelse og kropssammensætning. Den antropometriske undersøgelse vil omfatte bestemmelse af total kropsvægt, højde, kropsmasseindeks (BMI) samt talje- og hofteomkredse. Undersøgelsen og evalueringen af ​​disse variabler vil blive udført i overensstemmelse med retningslinjerne fra International Society for the Advancement of Kinanthropometry (ISAK). Studiet af kropssammensætning vil blive udført ved hjælp af elektrisk bioimpedans ved hjælp af en TANITA® kropssammensætningsanalysator model BC-418MA. Fedtmasse, mager masse, muskelmasse, total vand, knoglemasse, basal metabolisme og visceralt fedt vil blive kvantificeret med denne teknik ved at bruge forudsigelsesligninger valideret og justeret efter alder og køn.

Biokemiske undersøgelser. Prøver af fastende kubitalt blod vil blive udtaget for at bestemme parametrene for generel, hepatisk og renal biokemi. Derudover vil der blive udført en komplet urinanalyse, som omfatter de sædvanlige fysiske, kemiske og mikroskopiske målinger. Disse bestemmelser vil blive udført på laboratoriet for analyse og klinisk biokemi på 'Virgen del Rocío' universitetshospitaler i Sevilla.

Intervention Deltagerne vil blive opfordret til at undgå indtagelse af alkoholholdige drikkevarer og tobak i løbet af dagen før udførelsen af ​​analyserne. På forsøgsdage og efter 12 timers faste natten over, vil der blive udtaget blodprøver fra cubitalvenen. Efterfølgende vil ti tilfældigt udvalgte personer modtage 55 ml af den funktionelle OA-berigede olivenolie (ækvivalent dosis 30 mg OA) som en del af en eksperimentel morgenmad, der inkluderer kaffe, skummetmælk og fuldkornstoast. De øvrige ti deltagere vil modtage den samme mængde kontrololivenolie i forsøgsmåltidet. Efter at have spist de respektive morgenmad, vil alikvoter af kubitalt blod blive udtaget hver time i en postprandial periode på 7 timer. I dette tidsrum vil der være fri adgang til vandindtag.

Der etableres en fire ugers udvaskningsperiode, hvorefter en ny række tests, der krydser typen af ​​indtaget olivenolie, vil blive gennemført.

Farmakokinetisk undersøgelse af OA Fra alikvoterne af cubital blod vil sera blive opnået ved centrifugering, og NaN3, PMSF og aprotinin vil blive tilsat som konserveringsmidler for at undgå deres proteolytiske nedbrydning. Serumprøver vil blive opbevaret ved -80 °C i laboratorierne på IG-CSIC indtil analyse. Ekstraktion og fraktionering af serum OA vil blive realiseret ved væske/væske og fast fase ekstraktioner, hvorimod identifikationen og kvantificeringen af ​​triterpenen vil blive afsluttet af GC-FID og GC-MS. I den farmakokinetiske analyse af data vil der blive antaget en monokompartmentmodel. Ud fra data for serumindholdet af fri OA gennem den postprandiale periode vil følgende parametre blive bestemt: 1) absorptionsparametre såsom den maksimale opnåede koncentration og timingen for den, absorptionskonstanten og arealet under kurven; 2) distributionsparametre såsom konstanten og distributionsvolumen; 3) metabolismeparametre, såsom OA-fraktionen forbundet med albumin; og 4) eliminationsparametre såsom eliminationskonstanten, halveringstiden og clearance. Til beregninger vil SigmaPLot farmakokinetisk analysemodul (Systat Software Inc., San Jose, CA, USA) blive brugt.

Undersøgelse af tilstedeværelsen af ​​OA i triglyceridrige lipoproteiner (TRL). Chylomikroner vil først blive isoleret fra plasma i normalt saltvand ved centrifugering ved 100.000 x g i 20 min. Meget lavdensitetslipoproteiner (VLDL) vil efterfølgende blive adskilt ved 230.000 × g i 18 timer. Chylomikron- og VLDL-fraktionerne vil blive hydrolyseret med pancreasenzym. De frigivne lipider vil blive ekstraheret med chloroform:methanol (2:1) og fraktioneret ved fast/væske-ekstraktion med methanol:chloroform (1:1) og isopropanol:acetonitril:vand (2:1:1). Sammensætningen af ​​frie fedtsyrer (FFA) vil blive analyseret med GC-FID som de tilsvarende methylestere. Den mulige tilstedeværelse af OA blandt de TRL-afledte lipider vil blive evalueret efter fraktionering og GC-MS-analyse. Indholdet af apo B48 og B100, som markører for tilstedeværelsen af ​​henholdsvis chylomikroner og VLDL, vil blive bestemt ved ELISA.

Andre biokemiske parametre serum insulin, C-peptid og GLP-1 vil blive analyseret ved ELISA.