Biodisponibilità dell'acido oleanolico formulato come olio d'oliva funzionale (BIO-OLTRAD)

Progettazione e implementazione dei saggi di biodisponibilità Lo studio della biodisponibilità orale dell'acido oleanolico (OA) quando formulato come olio di oliva funzionale, ei suoi meccanismi di trasporto sistemico, saranno affrontati mediante un intervento postprandiale con 20 volontari sani.

I partecipanti saranno reclutati dopo che l'analisi biochimica ed ematologica completa abbia prodotto risultati entro limiti normali e dopo aver verificato nella loro storia medica elettronica che non soffrono di disturbi digestivi, metabolici o oncologici o qualsiasi altra patologia che, a parere degli investigatori clinici , potrebbe impedire loro di partecipare al processo. Per il loro inserimento nella sperimentazione è altresì richiesto che essi concedano il consenso scritto ai protocolli approvati dai Comitati Istituzionali per la Ricerca Umana, dopo essere stati opportunamente informati sia oralmente che documentalmente.

Il lavoro sul campo sarà svolto nel Day Hospital del Servizio di Endocrinologia e Nutrizione degli Ospedali Universitari 'Virgen del Rocio' di Siviglia (SPAGNA).

Misura di prova. La principale variabile quantitativa da esaminare in questo studio è la concentrazione sierica di OA. In assenza di dati basali coerenti finora pubblicati, sono stati utilizzati i dati dell'analisi dell'OA nei sieri dello studio PREDIABOLE (ISRCTN03372660). È stata selezionata una coorte di 25 partecipanti del gruppo di controllo, che consumava olio d'oliva commerciale, ed è stata determinata una concentrazione basale media di 155 ± 72 ng OA/mL. Considerando ciò, si ipotizza ora che il contenuto plasmatico di OA aumenti di almeno il 50% in conseguenza dell'assunzione dell'olio di oliva funzionale (dose equivalente 30 mg di OA). Per dimostrare questo test di ipotesi unilaterale, con un livello di confidenza del 90% (rischio α=0,01, zα=1,645) e una potenza del 95% (zβ=1,645), è richiesta una dimensione del campione di almeno 17 volontari. Supponendo che le perdite inferiori al 15% siano tollerabili, la dimensione del campione corretta sarebbe di 20 soggetti.

Anamnesi ed esame fisico dei partecipanti. L'anamnesi includerà i dati anagrafici e la storia generale raccogliendo tutti i sintomi che l'individuo può presentare, la sua storia medica e chirurgica, nonché i trattamenti farmacologici seguiti. Verranno inoltre ottenute informazioni sullo stile di vita, sulla percezione della propria immagine corporea, sull'alimentazione e sul tipo e l'intensità dell'attività fisica. Verranno inoltre esaminati la massa muscolare, il compartimento adiposo (pannicolo adiposo), la presenza di edema, ecc. Allo stesso modo, saranno determinate la pressione arteriosa sistolica e diastolica e la frequenza cardiaca.

Studio antropometrico e composizione corporea. Lo studio antropometrico includerà la determinazione del peso corporeo totale, dell'altezza, dell'indice di massa corporea (BMI), nonché della circonferenza della vita e dei fianchi. Lo studio e la valutazione di queste variabili saranno effettuati in accordo con le linee guida della International Society for the Advancement of kinanthropometry (ISAK). Lo studio della composizione corporea sarà effettuato mediante bioimpedenza elettrica, utilizzando un analizzatore di composizione corporea TANITA® modello BC-418MA. Con questa tecnica verranno quantificati massa grassa, massa magra, massa muscolare, acqua totale, massa ossea, metabolismo basale e grasso viscerale, avvalendosi di equazioni di previsione validate e aggiustate per età e sesso.

Studi biochimici. Saranno prelevati campioni di sangue cubitale a digiuno per determinare i parametri di biochimica generale, epatica e renale. Inoltre, verrà eseguita un'analisi completa delle urine, che include le abituali misurazioni fisiche, chimiche e microscopiche. Queste determinazioni saranno effettuate presso il Laboratorio di Analisi e Biochimica Clinica degli Ospedali Universitari 'Virgen del Rocío' di Siviglia.

Intervento I partecipanti saranno incoraggiati ad evitare il consumo di bevande alcoliche e tabacco durante il giorno precedente l'esecuzione dei saggi. Nei giorni di prova, e dopo 12 ore di digiuno notturno, verranno prelevati campioni di sangue dalla vena cubitale. Successivamente, dieci individui selezionati in modo casuale riceveranno 55 ml di olio d'oliva arricchito con OA funzionale (dose equivalente 30 mg di OA) come parte di una colazione sperimentale, che include caffè, latte scremato e pane tostato integrale. Gli altri dieci partecipanti riceveranno all'interno del pasto sperimentale la stessa quantità di olio di oliva di controllo. Dopo aver consumato le rispettive colazioni, verranno prelevate aliquote di sangue cubitale ogni ora, per un periodo postprandiale di 7 ore. Durante questo periodo sarà consentito il libero accesso alla presa d'acqua.

Viene stabilito un periodo di washout di quattro settimane, dopodiché verrà effettuata una nuova serie di test che incrociano la tipologia di olio di oliva consumato.

Studio farmacocinetico dell'OA Dalle aliquote di sangue cubitale si otterranno sieri per centrifugazione, ai quali verranno aggiunti NaN3, PMSF e aprotinina come conservanti, per evitare la loro degradazione proteolitica. I campioni di siero saranno conservati a -80°C nei laboratori dell'IG-CSIC fino al momento dell'analisi. L'estrazione e il frazionamento dell'OA sierica sarà realizzata mediante estrazioni in fase liquida/liquida e solida, mentre l'identificazione e la quantificazione del triterpene sarà completata mediante GC-FID e GC-MS. Nell'analisi farmacocinetica dei dati si assumerà un modello monocompartimentale. Dai dati del contenuto sierico di OA libera durante tutto il periodo postprandiale verranno determinati i seguenti parametri: 1) parametri di assorbimento come la concentrazione massima raggiunta e la tempistica per essa, la costante di assorbimento e l'area sotto la curva; 2) parametri di distribuzione quali la costante e il volume di distribuzione; 3) parametri del metabolismo, come la frazione OA associata all'albumina; e 4) parametri di eliminazione come la costante di eliminazione, l'emivita e la clearance. Per i calcoli verrà utilizzato il modulo di analisi farmacocinetica SigmaPLot (Systat Software Inc., San Jose, CA, USA).

Studio della presenza di OA nelle lipoproteine ​​ricche di trigliceridi (TRL). I chilomicroni saranno prima isolati dal plasma in soluzione fisiologica mediante centrifugazione a 100.000 × g per 20 min. Le lipoproteine ​​a densità molto bassa (VLDL) saranno successivamente separate a 230.000 × g per 18 h. Le frazioni di chilomicroni e VLDL saranno idrolizzate con enzima pancreatico. I lipidi rilasciati saranno estratti con cloroformio:metanolo (2:1), e frazionati mediante estrazione solido/liquido con metanolo:cloroformio (1:1) e isopropanolo:acetonitrile:acqua (2:1:1). La composizione degli acidi grassi liberi (FFA) sarà analizzata mediante GC-FID come i corrispondenti esteri metilici. L'eventuale presenza di OA tra i lipidi derivati ​​da TRL sarà valutata dopo frazionamento e analisi GC-MS. Il contenuto di apo B48 e B100, rispettivamente come marcatori della presenza di chilomicroni e VLDL, sarà determinato mediante ELISA.

Altri parametri biochimici dell'insulina sierica, del peptide C e del GLP-1 saranno analizzati mediante ELISA.