Funktionaalisena oliiviöljynä formuloidun oleanolihapon biologinen hyötyosuus (BIO-OLTRAD)

Biologisen hyötyosuuden määritysten suunnittelu ja toteutus Oleanolihapon (OA) oraalisen biologisen hyötyosuuden tutkimusta, kun se on formuloitu toiminnalliseksi oliiviöljyksi, ja sen systeemisen kuljetuksen mekanismeja tarkastellaan aterian jälkeisellä interventiolla 20 terveen vapaaehtoisen kanssa.

Osallistujat rekrytoidaan sen jälkeen, kun täydellisen biokemiallisen ja hematologisen analyysin tulokset antavat normaalin rajoissa ja kun heidän sähköisestä sairaushistoriastaan ​​on tarkistettu, että heillä ei ole ruoansulatus-, aineenvaihdunta- tai onkologisia häiriöitä tai muita patologioita, jotka kliinisten tutkijoiden mielestä , voisi estää heitä osallistumasta tutkimukseen. Tutkimukseen osallistumisen edellytyksenä on myös, että he antavat kirjallisen suostumuksen ihmistutkimuksen instituutioiden hyväksymille protokollille sen jälkeen, kun heille on tiedotettu kätevästi sekä suullisesti että dokumentaalisesti.

Kenttätyöt suoritetaan Sevillan (Espanja) Virgen del Rocio -yliopistosairaaloiden endokrinologian ja ravitsemuspalvelun päiväsairaalassa.

Otoskoko. Tärkein tässä kokeessa tutkittava kvantitatiivinen muuttuja on OA-seerumin pitoisuus. Toistaiseksi julkaistujen johdonmukaisten perustietojen puuttuessa on käytetty PREDIABOLE-tutkimuksen (ISRCTN03372660) seerumien OA-analyysin tietoja. Valittiin 25 osanottajan kohortti kontrolliryhmästä, joka kulutti kaupallista oliiviöljyä, ja keskimääräiseksi perustasopitoisuudeksi määritettiin 155 ± 72 ng OA/ml. Tämän huomioon ottaen oletetaan nyt, että plasman OA-pitoisuus nousee vähintään 50 % funktionaalisen oliiviöljyn (vastaava annos 30 mg OA:ta) nauttimisen seurauksena. Tämän yksipuolisen hypoteesitestin todistamiseksi, luotettavuustasolla 90 % (riski α=0,01, zα=1,645) ja teholla 95 % (zβ=1,645), vaaditaan vähintään 17 vapaaehtoisen otos. Olettaen, että alle 15 %:n häviöt ovat siedettäviä, mukautettu otoskoko olisi 20 kohdetta.

Osallistujien anamneesi ja fyysinen tarkastus. Anamneesi sisältää elintärkeitä tietoja ja yleishistorian, josta kerätään kaikki yksilön mahdollisesti ilmenevät oireet, hänen sairaus- ja leikkaushistoriansa sekä seuratut lääkehoidot. Lisäksi saadaan tietoa elämäntavoista, oman kehonkuvan käsityksestä, ruokavaliosta sekä liikunnan laadusta ja intensiteetistä. Lisäksi tutkitaan lihasmassaa, rasvaosastoa (rasvapanniculus), turvotuksen olemassaoloa jne. Samoin systolinen ja diastolinen verenpaine ja syke määritetään.

Antropometrinen tutkimus ja kehon koostumus. Antropometrinen tutkimus sisältää kokonaispainon, pituuden, painoindeksin (BMI) sekä vyötärön ja lantion ympärysmittojen määrityksen. Näiden muuttujien tutkimus ja arviointi suoritetaan Kansainvälisen kinantropometrian edistämisyhdistyksen (ISAK) ohjeiden mukaisesti. Kehonkoostumustutkimus tehdään sähköisellä bioimpedanssilla käyttäen TANITA® kehonkoostumusanalysaattoria mallia BC-418MA. Rasvamassa, vähärasvainen massa, lihasmassa, kokonaisvesi, luumassa, perusaineenvaihdunta ja sisäelinten rasva mitataan tällä tekniikalla käyttämällä iän ja sukupuolen mukaan vahvistettuja ja mukautettuja ennusteyhtälöitä.

Biokemialliset tutkimukset. Paastokubitaaliverestä otetaan näytteitä yleisen, maksan ja munuaisten biokemian parametrien määrittämiseksi. Lisäksi suoritetaan täydellinen virtsan analyysi, joka sisältää tavanomaiset fysikaaliset, kemialliset ja mikroskooppiset mittaukset. Nämä määritykset tehdään Sevillan Virgen del Rocío -yliopistosairaaloiden analyysi- ja kliinisen biokemian laboratoriossa.

Interventio Osallistujia rohkaistaan ​​välttämään alkoholijuomien ja tupakan käyttöä määritysten suorittamista edeltävänä päivänä. Koepäivinä ja 12 tunnin yön yli paaston jälkeen verinäytteitä otetaan kyynärsuonesta. Sen jälkeen kymmenen satunnaisesti valittua henkilöä saavat 55 ml toiminnallista OA:lla rikastettua oliiviöljyä (vastaava annos 30 mg OA) osana kokeellista aamiaista, joka sisältää kahvia, rasvatonta maitoa ja täysjyväpaahtoleipää. Muut kymmenen osallistujaa saavat koe-aterian sisällä saman määrän vertailuoliiviöljyä. Vastaavien aamiaisten syömisen jälkeen kubitaaliverta otetaan joka tunti 7 tunnin aterianjälkeisen ajanjakson aikana. Tänä aikana vesi on vapaasti käytettävissä.

Perustetaan neljän viikon pesujakso, jonka jälkeen suoritetaan uusi testisarja, joka ylittää kulutetun oliiviöljytyypin.

OA:n farmakokineettinen tutkimus Kubitaaliveren alikvooteista saadaan seerumit sentrifugoimalla ja NaN3, PMSF ja aprotiniini lisätään säilöntäaineiksi niiden proteolyyttisen hajoamisen välttämiseksi. Seeruminäytteitä säilytetään -80 0C:ssa IG-CSIC:n laboratorioissa analyysiin asti. Seerumin OA:n uuttaminen ja fraktiointi toteutetaan neste/neste- ja kiinteäfaasiuutoilla, kun taas triterpeenin tunnistaminen ja kvantifiointi täydennetään GC-FID:llä ja GC-MS:llä. Tietojen farmakokineettisessä analyysissä oletetaan yksiosastoista mallia. Tiedoista seerumin vapaan OA:n pitoisuuksista koko aterian jälkeisen ajanjakson aikana määritetään seuraavat parametrit: 1) absorptioparametrit, kuten saavutettu maksimipitoisuus ja sen ajoitus, absorption vakio ja käyrän alla oleva pinta-ala; 2) jakautumisparametrit, kuten vakio ja jakautumistilavuus; 3) aineenvaihduntaparametrit, kuten albumiiniin liittyvä OA-fraktio; ja 4) eliminaatioparametrit, kuten eliminaatiovakio, puoliintumisaika ja puhdistuma. Laskelmissa käytetään SigmaPLotin farmakokineettistä analyysimoduulia (Systat Software Inc., San Jose, CA, USA).

Tutkimus OA:n esiintymisestä triglyseridirikkaissa lipoproteiineissa (TRL). Kylomikronit eristetään ensin plasmasta normaalissa suolaliuoksessa sentrifugoimalla 100 000 x g 20 minuutin ajan. Erittäin matalatiheyksiset lipoproteiinit (VLDL) erotetaan tämän jälkeen 230 000 × g:ssä 18 tunnin ajan. Kylomikroni- ja VLDL-fraktiot hydrolysoidaan haimaentsyymillä. Vapautuneet lipidit uutetaan kloroformi:metanolilla (2:1) ja fraktioidaan kiintoaine/neste-uutolla metanoli:kloroformilla (1:1) ja isopropanoli:asetonitriili:vedellä (2:1:1). Vapaiden rasvahappojen (FFA) koostumus analysoidaan GC-FID:llä vastaavina metyyliestereinä. OA:n mahdollinen esiintyminen TRL-peräisten lipidien joukossa arvioidaan fraktioinnin ja GC-MS-analyysin jälkeen. Apo B48:n ja B100:n pitoisuus kylomikronien ja vastaavasti VLDL:n läsnäolon markkereina määritetään ELISA:lla.

Muut biokemialliset parametrit seerumin insuliini, C-peptidi ja GLP-1 analysoidaan ELISA:lla.