女性の生殖能力の維持: 卵巣組織の革新的な凍結保存方法の評価 (FERTIOVO)
2025年6月25日 更新者：University Hospital, Clermont-Ferrand
がんの診断と治療における最近の技術革新により、患者の 5 年生存率が向上しました。 ただし、抗がん治療は患者の生殖能力を損なう可能性があります。したがって、治療開始前に妊孕性温存が推奨されます。 思春期前の少女の生殖能力を維持する唯一の方法は、思春期の女性にも使用でき、卵巣組織凍結保存（OTC）とその後の自家移植です。 OTC および移植後に世界中で 200 件の出産が報告されていますが、大幅な改善が必要です。 実際、凍結および解凍のプロトコルは研究室によって異なり (培地、凍結保護剤、凍結曲線など)、選択基準は正当化されません。 さらに、ほとんどの研究室では安全でないデバイス（例: スクリューキャップクライオバイアル）を OTC に使用すると、窒素タンクでのサンプル保管中に卵巣組織が生物学的危険にさらされます。 これらのリスクを排除するために、新しい「高セキュリティ」デバイスが商品化されました (溶接クライオチューブ)。 ただし、熱溶着は組織の品質を変える可能性がありますが、これらの革新的なデバイスで凍結されたヒト卵巣組織の機能はまだ評価されていません。 私たちの研究の目的は、i) 凍結媒体の熱力学的特性とデバイスの種類 (溶接またはネジ止めされたクライオチューブ) に従って、ヒト OTC の凍結および解凍プロトコルを最適化すること、および ii) クライオチューブの種類が凍結に影響を与えるかどうかを判断することです。人間の卵巣組織の品質。
このプロジェクトにより、卵巣組織の機能に対する凍結の影響をより深く理解できるようになり、患者ケアを最適化するためにクレルモンフェラン病院の ART 研究室内で OTC に最適なプロトコルを導入することが可能になります。
調査の概要
詳細な説明
このプロジェクトの目的は、極低温チューブの種類 (ネジ キャップ付きまたは熱はんだ付け) が、凍結保存後の卵巣組織の品質と機能に影響を与えるかどうかを判断することです。
まず、示差走査熱量計 (Diamond DSC、PerkinElmer) を使用して凍結媒体の熱力学特性の特性評価を実行し、凍結および解凍プロトコルを最適化します。
この分析では、結晶化温度 (Tc)、融解終了温度 (Tm)、転移温度 (Tg'1) などの重要なパラメーターを定義します。
凍結と解凍のプロトコルが最適化されたら、私たちの研究室で以前に検証されたモデルである良性嚢胞周囲のヒト卵巣皮質を使用して、クライオチューブの種類がヒト卵巣組織の品質に影響を与えるかどうかを判断します。
これらの卵巣皮質サンプルは通常診療所で破壊され、正常な卵巣皮質と同様の特徴を共有しています。
卵巣組織を 1mm3 の断片に切断し、3 つのグループに分けます:新鮮な卵巣皮質 (グループ 1、対照)、熱はんだ付けされた極低温チューブ (グループ 2) またはスクリュー キャップ内で凍結保存された卵巣皮質 (グループ 3)。
グループ 1 の場合は切除直後、グループ 2 と 3 の場合は解凍後の卵巣組織の質を、卵胞の密度と形態 (HES 染色)、および増殖/アポトーシスのバランス (KI67 および切断型カスパーゼ 3 の免疫組織化学 (IHC)) を分析することによって評価します。
解凍後の卵巣組織の機能を評価するために、卵巣皮質断片を体外培養します。
i) 卵胞の密度、種類、形態 (HES 染色)、ii) 増殖/アポトーシスのバランス (KI67 および切断型カスパーゼ 3 の IHC)、iii) 主要な卵胞形成調節因子 (GDF-9 の IHC) の発現レベル、およびiv) 培地中に分泌される卵胞形成関連ホルモン (AMH、エストロゲン) のレベル。
研究の種類
観察的
入学 (実際)
30
連絡先と場所
このセクションには、調査を実施する担当者の連絡先の詳細と、この調査が実施されている場所に関する情報が記載されています。
研究場所
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Clermont-Ferrand、フランス、63100
- University Hospital
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参加基準
研究者は、適格基準と呼ばれる特定の説明に適合する人を探します。これらの基準のいくつかの例は、人の一般的な健康状態または以前の治療です。
適格基準
就学可能な年齢
- 大人
健康ボランティアの受け入れ
いいえ
サンプリング方法
非確率サンプル
調査対象母集団
クレルモンフェラン大学病院センターで良性卵巣嚢腫切除術を受ける予定の成人女性。
説明
包含基準:
- 良性卵巣嚢腫切除術を予定している成人女性（皮様嚢胞、機能性嚢胞、粘液性嚢胞または漿液性嚢胞）
- 37歳以下、18歳以上
- 研究に参加するために書面によるインフォームドコンセントを与えることができる
- 社会福祉事業に所属している
除外基準:
- 37歳以上18歳未満の女性
- 多嚢胞性卵巣症候群
- 卵巣予備能の減少
- 重度の子宮内膜症
- 悪性および子宮内膜嚢胞
研究計画
このセクションでは、研究がどのように設計され、研究が何を測定しているかなど、研究計画の詳細を提供します。
研究はどのように設計されていますか？
デザインの詳細
コホートと介入
グループ/コホート |
介入・治療 |
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新鮮な卵巣皮質断片
嚢胞性卵巣皮質を 1mm3 の断片に切断し、収集当日 (D0) または器官型培養後 (D7 および D14) に直接分析します。
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熱はんだ付けされたクライオバイアル中で凍結された卵巣皮質の断片。
嚢胞性卵巣皮質を 1mm3 の断片に切断し、熱はんだ付けされたクライオバイアル内で低速プログラム可能冷凍装置 (Nano Digitcool、Cryo Bio System) を使用して凍結し、液体窒素 (-196°C) で保存します。
次に、解凍当日 (D'0) および器官型培養の 7 日および 14 日後 (D7 および D14) に分析する前に断片を解凍します。
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ヒト卵巣組織の凍結保存: 嚢胞切除直後、嚢胞周囲卵巣皮質を 1mm3 の断片に切断し、低速プログラム可能な冷凍装置 (Nano Digitcool、Cryo Bio System) を使用して、ねじ込みまたは熱はんだ付けされたクライオバイアルに入れて凍結保存します。
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ねじ込み式クライオバイアル内で凍結された卵巣皮質の断片。
嚢胞性卵巣皮質を 1mm3 の断片に切断し、ネジ付きクライオバイアル中でプログラム可能な低速冷凍装置 (Nano Digitcool、Cryo Bio System) を使用して凍結し、液体窒素 (-196°C) で保存します。
次に、断片は、解凍当日 (D'0) および器官型培養の 7 日および 14 日後 (D7 および D14) に分析される前に解凍されます。
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ヒト卵巣組織の凍結保存: 嚢胞切除直後、嚢胞周囲卵巣皮質を 1mm3 の断片に切断し、低速プログラム可能な冷凍装置 (Nano Digitcool、Cryo Bio System) を使用して、ねじ込みまたは熱はんだ付けされたクライオバイアルに入れて凍結保存します。
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この研究は何を測定していますか？
主要な結果の測定
結果測定 |
メジャーの説明 |
時間枠 |
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解凍後の卵胞の形態
時間枠：24ヶ月
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新鮮対凍結（熱はんだ付けまたはねじ止めクライオバイアルを使用）/解凍した卵巣皮質の卵胞形態を、ヘマトキシリン-エオシン-サフランで染色した連続切片で評価します。フラグメントは、グループ 1 については収集当日に固定され、グループ 2 および 3 については解凍直後に固定されます。毛包の形態は、Keros et al. によって記載されたパラメーターに従って評価されます。
ハム・リプロッド。
2009年。
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24ヶ月
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二次結果の測定
結果測定 |
メジャーの説明 |
時間枠 |
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解凍後の卵胞密度
時間枠：24ヶ月
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新鮮対凍結（熱はんだ付けまたはねじ止めクライオバイアルを使用）/解凍した卵巣皮質の卵胞密度（=卵胞数/mm2）を、ヘマトキシリン-エオシン-サフランで染色した連続切片で評価します。フラグメントは、グループ 1 の場合は収集日に固定され、グループ 2 および 3 の場合は解凍直後に固定されます。
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24ヶ月
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器官培養後の卵胞期
時間枠：36ヶ月
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新鮮卵胞と凍結卵巣皮質（熱はんだ付けまたはねじ止めクライオバイアルを使用）/解凍卵巣皮質の卵胞段階（原始卵胞、一次卵胞、二次卵胞、および胞状卵胞の％）を、ヘマトキシリン・エオシン・サフランで染色した連続切片で評価します。断片は器官型培養の 7 日または 14 日後に固定されます。
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36ヶ月
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器官培養後の卵胞形態
時間枠：36ヶ月
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新鮮対凍結（熱はんだ付けまたはねじ止めクライオバイアルを使用）/解凍した卵巣皮質の卵胞形態を、ヘマトキシリン-エオシン-サフランで染色した連続切片で評価します。断片は器官型培養の 7 日または 14 日後に固定されます。
毛包の形態は、Keros et al. によって記載されたパラメータに従って評価されます。
ハム・リプロッド。
2009年。
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36ヶ月
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器官型培養後の GDF-9 発現
時間枠：36ヶ月
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新鮮および凍結（熱はんだ付けまたはねじ止めクライオバイアルを使用）/解凍卵巣皮質における GDF9 陽性卵胞（つまり、GDF-9 陽性卵母細胞）の割合を免疫染色した連続切片で評価します。
断片は器官型培養の 7 日または 14 日後に固定されます。
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36ヶ月
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凍結媒体の熱力学特性
時間枠：12ヶ月
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示差走査熱量計 (DiamondDSC、PerkinElmer) を使用して、凍結媒体 (4 mg/mL の Leibovitz) の結晶化温度 (Tc)、融解終了温度 (Tm)、および転移温度 (Tg'1) を測定します。 HSA、1.5M DMSOおよび0.1Mスクロース）。
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12ヶ月
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融解後の卵胞増殖
時間枠：24か月
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新鮮および凍結（サーモソール溶融またはねじ込まれたクリオビアル） /解凍された卵巣皮質の増殖性（卵母細胞または顆粒膜細胞の陽性の割合は、免疫染色された連続切片で評価されます。
フラグメントは、グループ1の収集日に、グループ2および3を解凍した直後に固定されます。
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24か月
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融解後の卵胞アポトーシス
時間枠：24か月
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アポトーシス（卵母細胞または顆粒膜細胞陽性カスパーゼ3）の割合は、免疫染色された連続切片で、新鮮および凍結（サーモソールザー型またはねじ込みクリオビアル） /解凍された卵巣皮質で評価されます。
フラグメントは、グループ1の収集日に、グループ2および3を解凍した直後に固定されます。
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24か月
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器官型培養後の増殖
時間枠：36ヶ月
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新鮮および凍結（サーモソール溶融またはねじ込まれたクリオビアル） /解凍された卵巣皮質における増殖性（卵母細胞またはKI-67に陽性）の割合は、免疫染色された連続切片で評価されます。
断片は、オルガンタイプ培養の7日または14日後に固定されます。
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36ヶ月
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器官型培養後のアポトーシス
時間枠：36ヶ月
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アポトーシス（卵母細胞または顆粒膜細胞陽性カスパーゼ3）の割合は、免疫染色された連続切片で、新鮮および凍結（サーモソールザー型またはねじ込みクリオビアル） /解凍された卵巣皮質で評価されます。
断片は、オルガンタイプ培養の7日または14日後に固定されます。
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36ヶ月
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器官型培養後の分泌
時間枠：36ヶ月
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AMHレベルは、新鮮と凍結（サーモソールザー型またはねじ込まれたクリオビアル） /解凍された卵巣皮質の器官型培養中に培地で定量化されます。
培地は、14日間、3日間ごとに収穫されます。
AMHは、電気化学的発光によって定量化されます
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36ヶ月
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器官型培養後のエストロゲン分泌
時間枠：36ヶ月
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エストロゲンレベルは、新鮮と凍結（サーモソール溶融またはねじ込まれたクリオビアル） /解凍された卵巣皮質の器官型培養中に培地で定量化されます。
培地は、14日間、3日間ごとに収穫されます。
エストロゲンは、電気化学化により定量化されます
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36ヶ月
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協力者と研究者
ここでは、この調査に関係する人々や組織を見つけることができます。
捜査官
- 主任研究者：Florence BRUGNON, MD, PhD、University Hospital, Clermont-Ferrand
研究記録日
これらの日付は、ClinicalTrials.gov への研究記録と要約結果の提出の進捗状況を追跡します。研究記録と報告された結果は、国立医学図書館 (NLM) によって審査され、公開 Web サイトに掲載される前に、特定の品質管理基準を満たしていることが確認されます。
主要日程の研究
研究開始 (実際)
2022年5月5日
一次修了 (実際)
2025年6月1日
研究の完了 (推定)
2025年12月31日
試験登録日
最初に提出
2024年12月5日
QC基準を満たした最初の提出物
2024年12月5日
最初の投稿 (実際)
2024年12月9日
学習記録の更新
投稿された最後の更新 (実際)
2025年6月29日
QC基準を満たした最後の更新が送信されました
2025年6月25日
最終確認日
2025年6月1日
詳しくは
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