Zachowanie płodności kobiet: ocena innowacyjnych metod kriokonserwacji tkanki jajnika (FERTIOVO)
25 czerwca 2025 zaktualizowane przez: University Hospital, Clermont-Ferrand
Ostatnie innowacje w diagnostyce i terapii nowotworów poprawiły pięcioletnie przeżycie pacjentów. Jednakże leczenie przeciwnowotworowe może upośledzać płodność pacjentek; dlatego przed rozpoczęciem leczenia zaleca się zachowanie płodności. Jedyną metodą zachowania płodności młodych dziewcząt w okresie dojrzewania, którą można zastosować również u kobiet w okresie dojrzewania, jest kriokonserwacja tkanki jajnikowej (OTC) z późniejszym autoprzeszczepem. Chociaż na całym świecie zgłoszono 200 porodów po OTC i przeszczepieniu, wymagana jest znaczna poprawa. Rzeczywiście, protokoły zamrażania i rozmrażania różnią się w zależności od laboratoriów (pożywki, krioprotektanty, krzywa zamrażania itp.), a kryteria wyboru nie są uzasadnione. Ponadto większość laboratoriów korzysta z niebezpiecznych urządzeń (np. kriofiolki z zakrętką) do stosowania bez recepty, narażając tkanki jajników na zagrożenia biologiczne podczas przechowywania próbek w zbiornikach z azotem. Aby wyeliminować to ryzyko, wprowadzono na rynek nowatorskie urządzenia o „wysokim bezpieczeństwie” (spawane kriorurki). Jednakże chociaż zgrzewanie termiczne może zmienić jakość tkanki, nie oceniono jeszcze funkcjonalności ludzkiej tkanki jajnika zamrożonej za pomocą tych innowacyjnych urządzeń. Cele naszego badania to i) optymalizacja protokołów zamrażania i rozmrażania ludzkich OTC zgodnie z właściwościami termodynamicznymi ośrodka zamrażającego i rodzajem urządzenia (kriorurka spawana lub skręcana) oraz ii) określenie, czy rodzaj krioprobówki wpływa na jakość ludzkiej tkanki jajnikowej.
Projekt ten umożliwi lepsze zrozumienie wpływu zamrażania na funkcjonalność tkanki jajnika, a także wdrożenie optymalnego protokołu dla OTC w laboratorium ART szpitala Clermont-Ferrand w celu optymalizacji opieki nad pacjentką.
Przegląd badań
Status
Aktywny, nie rekrutujący
Warunki
Szczegółowy opis
Celem projektu jest określenie, czy rodzaj rurki kriogenicznej (zakręcana lub lutowana termicznie) wpływa na jakość i funkcjonalność tkanki jajnika po kriokonserwacji.
W pierwszej kolejności przeprowadzona zostanie charakterystyka właściwości termodynamicznych ośrodka zamrażającego przy użyciu różnicowego kalorymetru skaningowego (Diamond DSC, PerkinElmer) w celu optymalizacji protokołów zamrażania i rozmrażania.
Analiza ta określi ważne parametry, takie jak temperatura krystalizacji (Tc), temperatura końca topnienia (Tm) i temperatury przejścia (Tg'1).
Po zoptymalizowaniu protokołów zamrażania i rozmrażania wykorzystamy ludzką korę jajnika otaczającą łagodne cysty – model wcześniej zatwierdzony przez nasze laboratorium – aby określić, czy rodzaj krioprobówki wpływa na jakość ludzkiej tkanki jajnikowej.
Te próbki kory jajnika, zwykle niszczone w klinikach, mają podobne cechy jak normalna kora jajnika.
Tkanka jajnika zostanie pocięta na fragmenty o objętości 1 mm3 i podzielona na trzy grupy: świeża kora jajnika (grupa 1, kontrola), kora jajnika kriokonserwowana w termolutowanych probówkach kriogenicznych (grupa 2) lub w zakrętce (grupa 3).
Jakość tkanki jajnika ocenimy bezpośrednio po resekcji w przypadku grupy 1 lub po rozmrożeniu w przypadku grupy 2 i 3, analizując gęstość i morfologię pęcherzyków (barwienie HES) oraz równowagę proliferacja/apoptoza (immunohistochemia (IHC) dla KI67 i rozszczepionej kaspazy 3).
Aby ocenić funkcjonalność tkanki jajnika po rozmrożeniu, fragmenty kory jajnika będą hodowane in vitro.
Przeanalizujemy i) gęstość, typ i morfologię pęcherzyków (barwienie HES), ii) równowagę proliferacji/apoptozy (IHC dla KI67 i rozszczepionej kaspazy 3), iii) poziomy ekspresji głównych regulatorów folikulogenezy (IHC dla GDF-9) i iv) poziomy hormonów związanych z folikulogenezą (AMH, estrogen) wydzielanych w pożywce hodowlanej.
Typ studiów
Obserwacyjny
Zapisy (Rzeczywisty)
30
Kontakty i lokalizacje
Ta sekcja zawiera dane kontaktowe osób prowadzących badanie oraz informacje o tym, gdzie badanie jest przeprowadzane.
Lokalizacje studiów
-
-
-
Clermont-Ferrand, Francja, 63100
- University Hospital
-
-
Kryteria uczestnictwa
Badacze szukają osób, które pasują do określonego opisu, zwanego kryteriami kwalifikacyjnymi. Niektóre przykłady tych kryteriów to ogólny stan zdrowia danej osoby lub wcześniejsze leczenie.
Kryteria kwalifikacji
Wiek uprawniający do nauki
- Dorosły
Akceptuje zdrowych ochotników
Nie
Metoda próbkowania
Próbka bez prawdopodobieństwa
Badana populacja
Dorosła kobieta zaplanowana na operację łagodnej resekcji torbieli jajnika w Centrum Szpitala Uniwersyteckiego w Clermont-Ferrand.
Opis
Kryteria włączenia:
- Dorosła kobieta zakwalifikowana do łagodnej resekcji torbieli jajnika (cysty skórzaste, czynnościowe, śluzowe lub surowicze)
- Poniżej 37 lat i powyżej 18 lat
- Potrafi wyrazić pisemną świadomą zgodę na udział w badaniu
- Związany ze służbą pomocy społecznej
Kryteria wykluczenia:
- Kobiety powyżej 37. roku życia i poniżej 18. roku życia
- Zespół policystycznych jajników
- Zmniejszona rezerwa jajnikowa
- Ciężka endometrioza
- Torbiele złośliwe i endometrium
Plan studiów
Ta sekcja zawiera szczegółowe informacje na temat planu badania, w tym sposób zaprojektowania badania i jego pomiary.
Jak projektuje się badanie?
Szczegóły projektu
Kohorty i interwencje
Grupa / Kohorta |
Interwencja / Leczenie |
|---|---|
|
Świeże fragmenty kory jajnika
Pericystyczna kora jajnika zostanie pocięta na fragmenty o objętości 1 mm3 i poddana analizie bezpośrednio w dniu pobrania (D0) lub po hodowli organotypowej (D7 i D14).
|
|
|
Fragmenty kory jajnika zamrożone w lutowanych termofiolkach.
Perystyczna kora jajnika zostanie pocięta na fragmenty o wielkości 1 mm3, zamrożona przy użyciu powolnego programowalnego urządzenia zamrażającego (Nano Digitcool, Cryo Bio System) w lutowanych termofiolkach i przechowywana w ciekłym azocie (-196°C).
Następnie fragmenty zostaną rozmrożone przed analizą w dniu rozmrożenia (D'0) oraz po 7 i 14 dniach (D7 i D14) hodowli organotypowej.
|
Tkanka ludzkiego jajnika Kriokonserwacja: natychmiast po wycięciu torbieli perystyczna kora jajnika zostanie pocięta na fragmenty o wielkości 1 mm3 i kriokonserwowana w zakręcanych lub termolutowanych kriofiolkach przy użyciu wolno programowalnego urządzenia zamrażającego (Nano Digitcool, Cryo Bio System).
|
|
Fragmenty kory jajnika zamrożone w zakręcanych kriofiolkach.
Perystyczna kora jajnika zostanie pocięta na fragmenty o wielkości 1 mm3, zamrożona przy użyciu powolnego programowalnego urządzenia zamrażającego (Nano Digitcool, Cryo Bio System) w zakręcanych kriofiolkach i przechowywana w ciekłym azocie (-196°C).
Następnie fragmenty zostaną rozmrożone przed analizą w dniu rozmrożenia (D'0) oraz po 7 i 14 dniach (D7 i D14) hodowli organotypowej.
|
Tkanka ludzkiego jajnika Kriokonserwacja: natychmiast po wycięciu torbieli perystyczna kora jajnika zostanie pocięta na fragmenty o wielkości 1 mm3 i kriokonserwowana w zakręcanych lub termolutowanych kriofiolkach przy użyciu wolno programowalnego urządzenia zamrażającego (Nano Digitcool, Cryo Bio System).
|
Co mierzy badanie?
Podstawowe miary wyniku
Miara wyniku |
Opis środka |
Ramy czasowe |
|---|---|---|
|
Morfologia pęcherzyka jajnikowego po rozmrożeniu
Ramy czasowe: 24 miesiące
|
Morfologia pęcherzyków świeżej i zamrożonej (z lutowanymi termicznie lub przykręcanymi kriofiolkami)/rozmrożonej kory jajnika będzie oceniana na seryjnych skrawkach barwionych hematoksyliną-eozyną-szafranem. Fragmenty zostaną utrwalone w dniu pobrania dla grupy 1 i bezpośrednio po rozmrożeniu dla grup 2 i 3. Morfologia pęcherzyków zostanie oceniona według parametrów opisanych przez Keros i in.
Hum Reprod.
2009.
|
24 miesiące
|
Miary wyników drugorzędnych
Miara wyniku |
Opis środka |
Ramy czasowe |
|---|---|---|
|
Gęstość pęcherzyków jajnikowych po rozmrożeniu
Ramy czasowe: 24 miesiące
|
Gęstość pęcherzyków (= liczba pęcherzyków/mm2) świeżej i zamrożonej (z lutowanymi termicznie lub przykręcanymi kriofiolkami)/rozmrożonej kory jajnika będzie oceniana na seryjnych skrawkach barwionych hematoksyliną-eozyną-szafranem. Fragmenty zostaną utrwalone w dniu pobrania dla grupy 1 i bezpośrednio po rozmrożeniu dla grupy 2 i 3.
|
24 miesiące
|
|
Stadium pęcherzyka jajnikowego po hodowli organotypowej
Ramy czasowe: 36 miesięcy
|
Stadia pęcherzykowe (% pęcherzyków pierwotnych, pierwotnych, wtórnych i antralnych) w świeżej i zamrożonej (z lutowanymi termicznie lub przykręcanymi kriofiolkami)/rozmrożonej korze jajnika będą oceniane na seryjnych skrawkach barwionych hematoksyliną-eozyną-szafranem. Fragmenty zostaną utrwalone po 7 lub 14 dniach hodowli organotypowej.
|
36 miesięcy
|
|
Morfologia pęcherzyka jajnikowego po hodowli organotypowej
Ramy czasowe: 36 miesięcy
|
Morfologia pęcherzyków świeżej i zamrożonej (z lutowanymi termicznie lub przykręcanymi kriofiolkami)/rozmrożonej kory jajnika będzie oceniana na seryjnych skrawkach barwionych hematoksyliną-eozyną-szafranem. Fragmenty zostaną utrwalone po 7 lub 14 dniach hodowli organotypowej.
Morfologię pęcherzyków ocenia się według parametrów opisanych przez Keros i in.
Hum Reprod.
2009.
|
36 miesięcy
|
|
Ekspresja GDF-9 po hodowli organotypowej
Ramy czasowe: 36 miesięcy
|
odsetek pęcherzyków dodatnich pod względem GDF9 (tj. z oocytem dodatnim pod względem GDF-9) w świeżych i zamrożonych (z termolutowanymi lub zakręcanymi kriofiolkami)/rozmrożonej korze jajnika będzie oceniany na seryjnych skrawkach barwionych immunologicznie.
Fragmenty zostaną utrwalone po 7 lub 14 dniach hodowli organotypowej.
|
36 miesięcy
|
|
Właściwości termodynamiczne ośrodka zamrażającego
Ramy czasowe: 12 miesięcy
|
Różnicowy kalorymetr skaningowy (DiamondDSC, PerkinElmer) zostanie wykorzystany do określenia temperatury krystalizacji (Tc), temperatury końca topnienia (Tm) i temperatury przejścia (Tg'1) ośrodka zamrażającego (Leibovitz z 4 mg/ml HSA, 1,5 M DMSO i 0,1 M sacharozy).
|
12 miesięcy
|
|
Proliferacja pęcherzyków jajnika po rozmowie
Ramy czasowe: 24 miesiące
|
Odsetek proliferacyjnych (oocytów lub komórek ziarnistych dodatnie dla Ki-67 w świeżo i zamrożonych (z termosoldą lub skręconymi kriowalami) /rozmrożonej kory jajników zostanie oceniony na immunologicznych sekcjach seryjnych.
Fragmenty zostaną ustalone w dniu pobierania grupy 1 i bezpośrednio po rozmrożeniu dla grup 2 i 3.
|
24 miesiące
|
|
Apoptoza pęcherzyków jajników po rozmowie
Ramy czasowe: 24 miesiące
|
Odsetek apoptotycznych (oocytów lub komórek ziarnistych dodatnia rozszczepiona kaspaza 3) w świeżo i zamrożonej (z termosoldą lub skręconymi kriowalami) /rozmrożonej kory jajników zostanie oceniona na immunologicznych sekcjach szeregowych.
Fragmenty zostaną ustalone w dniu pobierania grupy 1 i bezpośrednio po rozmrożeniu dla grup 2 i 3.
|
24 miesiące
|
|
Proliferacja po kulturze organotypowej
Ramy czasowe: 36 miesięcy
|
Odsetek proliferacyjnych (oocytów lub komórek ziarnistych dodatnie dla Ki-67) w świeżo i zamrożonych (z termosoldą lub skręconymi kriowalami) /rozmrożonej kory jajników zostanie oceniona na skrawkach seryjnych.
Fragmenty zostaną ustalone po 7 lub 14 dniach hodowli organotypowej.
|
36 miesięcy
|
|
Apoptoza po hodowli organotypowej
Ramy czasowe: 36 miesięcy
|
Odsetek apoptotycznych (oocytów lub komórek ziarnistych dodatnia rozszczepiona kaspaza 3) w świeżo i zamrożonej (z termosoldą lub skręconymi kriowalami) /rozmrożonej kory jajników zostanie oceniona na immunologicznych sekcjach szeregowych.
Fragmenty zostaną ustalone po 7 lub 14 dniach hodowli organotypowej.
|
36 miesięcy
|
|
AMH wydzielanie po kulturze organotypowej
Ramy czasowe: 36 miesięcy
|
Poziomy AMH zostaną określone ilościowo w pożywce hodowlanej podczas hodowli organotypowej świeżych i zamrożonych (z termosoldą lub skręconymi kriowalami) /rozmrożoną kory jajnika.
Media hodowlane będą zbierane co trzy dni kultury przez 14 dni.
AMH zostanie określone ilościowo przez elektrochemiluminescencję
|
36 miesięcy
|
|
Wydzielanie estrogenu po kulturze organotypowej
Ramy czasowe: 36 miesięcy
|
Poziomy estrogenu zostaną określone ilościowo w pożywce hodowlanej podczas hodowli organotypowej świeżych i zamrożonych (z termosoldowanymi lub skręconymi kriowialami) /rozmrożoną kory jajnika.
Media hodowlane będą zbierane co trzy dni kultury przez 14 dni.
Estrogen zostanie określony ilościowo przez elektrochemiluminescencję
|
36 miesięcy
|
Współpracownicy i badacze
Tutaj znajdziesz osoby i organizacje zaangażowane w to badanie.
Śledczy
- Główny śledczy: Florence BRUGNON, MD, PhD, University Hospital, Clermont-Ferrand
Daty zapisu na studia
Daty te śledzą postęp w przesyłaniu rekordów badań i podsumowań wyników do ClinicalTrials.gov. Zapisy badań i zgłoszone wyniki są przeglądane przez National Library of Medicine (NLM), aby upewnić się, że spełniają określone standardy kontroli jakości, zanim zostaną opublikowane na publicznej stronie internetowej.
Główne daty studiów
Rozpoczęcie studiów (Rzeczywisty)
5 maja 2022
Zakończenie podstawowe (Rzeczywisty)
1 czerwca 2025
Ukończenie studiów (Szacowany)
31 grudnia 2025
Daty rejestracji na studia
Pierwszy przesłany
5 grudnia 2024
Pierwszy przesłany, który spełnia kryteria kontroli jakości
5 grudnia 2024
Pierwszy wysłany (Rzeczywisty)
9 grudnia 2024
Aktualizacje rekordów badań
Ostatnia wysłana aktualizacja (Rzeczywisty)
29 czerwca 2025
Ostatnia przesłana aktualizacja, która spełniała kryteria kontroli jakości
25 czerwca 2025
Ostatnia weryfikacja
1 czerwca 2025
Więcej informacji
Terminy związane z tym badaniem
Słowa kluczowe
Dodatkowe istotne warunki MeSH
Inne numery identyfikacyjne badania
- 2022_Brugnon_FERTIOVO
Informacje o lekach i urządzeniach, dokumenty badawcze
Bada produkt leczniczy regulowany przez amerykańską FDA
Nie
Bada produkt urządzenia regulowany przez amerykańską FDA
Nie
produkt wyprodukowany i wyeksportowany z USA
Nie
Te informacje zostały pobrane bezpośrednio ze strony internetowej clinicaltrials.gov bez żadnych zmian. Jeśli chcesz zmienić, usunąć lub zaktualizować dane swojego badania, skontaktuj się z register@clinicaltrials.gov. Gdy tylko zmiana zostanie wprowadzona na stronie clinicaltrials.gov, zostanie ona automatycznie zaktualizowana również na naszej stronie internetowej .