Preservazione della fertilità femminile: valutazione di metodi innovativi per la crioconservazione del tessuto ovarico (FERTIOVO)
25 giugno 2025 aggiornato da: University Hospital, Clermont-Ferrand
Le recenti innovazioni nella diagnosi e nella terapia del cancro hanno migliorato la sopravvivenza a cinque anni dei pazienti. Tuttavia, i trattamenti antitumorali possono compromettere la fertilità dei pazienti; pertanto si raccomanda di preservare la fertilità prima di iniziare la terapia. L'unico metodo per preservare la fertilità delle giovani ragazze in età prepuberale, che può essere utilizzato anche per le donne in età puberale, è la crioconservazione del tessuto ovarico (OTC) con successivo autotrapianto. Sebbene siano state segnalate 200 nascite in tutto il mondo dopo OTC e trapianto, sono necessari miglioramenti significativi. Infatti, i protocolli di congelamento e scongelamento variano a seconda dei laboratori (terreni, crioprotettori, curva di congelamento, ecc…) e i criteri di selezione non sono giustificati. Inoltre, la maggior parte dei laboratori utilizza dispositivi non sicuri (ad es. criovials con tappo a vite) per OTC, esponendo i tessuti ovarici a rischi biologici durante la conservazione dei campioni in serbatoi di azoto. Per eliminare questi rischi sono stati commercializzati nuovi dispositivi ad "alta sicurezza" (criotubi saldati). Tuttavia, mentre la saldatura termica potrebbe alterare la qualità dei tessuti, la funzionalità del tessuto ovarico umano congelato con questi dispositivi innovativi non è stata ancora valutata. Gli obiettivi del nostro studio sono i) ottimizzare i protocolli di congelamento e scongelamento per OTC umano in base alle proprietà termodinamiche del mezzo di congelamento e al tipo di dispositivo (criotubi saldati o avvitati) e ii) determinare se il tipo di criotubi influenza la qualità del tessuto ovarico umano.
Questo progetto consentirà di comprendere meglio l'impatto del congelamento sulla funzionalità del tessuto ovarico, nonché l'implementazione di un protocollo ottimale per OTC all'interno del laboratorio ART dell'ospedale di Clermont-Ferrand per ottimizzare la cura delle pazienti.
Panoramica dello studio
Stato
Attivo, non reclutante
Condizioni
Intervento / Trattamento
Descrizione dettagliata
Lo scopo di questo progetto è determinare se il tipo di provetta criogenica (con tappo a vite o termosaldata) influenza la qualità e la funzionalità del tessuto ovarico dopo crioconservazione.
Innanzitutto, verrà effettuata una caratterizzazione delle proprietà termodinamiche del mezzo di congelamento utilizzando un calorimetro a scansione differenziale (Diamond DSC, PerkinElmer) per ottimizzare i protocolli di congelamento e scongelamento.
Questa analisi definirà parametri importanti come la temperatura di cristallizzazione (Tc), la temperatura di fine fusione (Tm) e le temperature di transizione (Tg'1).
Una volta ottimizzati i protocolli di congelamento e scongelamento, utilizzeremo la corteccia ovarica umana che circonda le cisti benigne, un modello precedentemente validato dal nostro laboratorio, per determinare se il tipo di criotubo influenza la qualità del tessuto ovarico umano.
Questi campioni corticali ovarici solitamente distrutti nelle cliniche condividono caratteristiche simili con la normale corteccia ovarica.
Il tessuto ovarico verrà tagliato in frammenti di 1 mm3 e diviso in tre gruppi: corteccia ovarica fresca (gruppo 1, controllo), corteccia ovarica crioconservata in provette criogeniche termosaldate (gruppo 2) o con tappo a vite (gruppo 3).
Valuteremo la qualità del tessuto ovarico immediatamente dopo la resezione per il gruppo 1 o dopo lo scongelamento per i gruppi 2 e 3 analizzando la densità e la morfologia del follicolo (colorazione HES) e l'equilibrio proliferazione/apoptosi (immunoistochimica (IHC) per KI67 e caspasi 3 scissa).
Per valutare la funzionalità del tessuto ovarico dopo lo scongelamento, i frammenti di corteccia ovarica verranno coltivati in vitro.
Analizzeremo i) la densità, il tipo e la morfologia del follicolo (colorazione HES), ii) l'equilibrio proliferazione/apoptosi (IHC per KI67 e caspasi 3 scissa), iii) i livelli di espressione dei principali regolatori della follicologenesi (IHC per GDF-9) e iv) i livelli degli ormoni associati alla follicologenesi (AMH, estrogeni) secreti nel terreno di coltura.
Tipo di studio
Osservativo
Iscrizione (Effettivo)
30
Contatti e Sedi
Questa sezione fornisce i recapiti di coloro che conducono lo studio e informazioni su dove viene condotto lo studio.
Luoghi di studio
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Clermont-Ferrand, Francia, 63100
- University Hospital
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Criteri di partecipazione
I ricercatori cercano persone che corrispondano a una certa descrizione, chiamata criteri di ammissibilità. Alcuni esempi di questi criteri sono le condizioni generali di salute di una persona o trattamenti precedenti.
Criteri di ammissibilità
Età idonea allo studio
- Adulto
Accetta volontari sani
No
Metodo di campionamento
Campione non probabilistico
Popolazione di studio
Donna adulta in attesa di resezione benigna di cisti ovarica presso il Centro ospedaliero universitario di Clermont-Ferrand.
Descrizione
Criteri di inclusione:
- Donna adulta in attesa di resezione di cisti ovariche benigne (cisti dermoidi, funzionali, mucinose o sierose)
- Sotto i 37 anni e sopra i 18 anni
- In grado di fornire il consenso informato scritto per partecipare allo studio di ricerca
- Affiliato al servizio di assistenza sociale
Criteri di esclusione:
- Donne sopra i 37 anni e sotto i 18 anni
- Sindrome dell'ovaio policistico
- Riserva ovarica ridotta
- Endometriosi grave
- Cisti maligne ed endometriali
Piano di studio
Questa sezione fornisce i dettagli del piano di studio, compreso il modo in cui lo studio è progettato e ciò che lo studio sta misurando.
Come è strutturato lo studio?
Dettagli di progettazione
Coorti e interventi
Gruppo / Coorte |
Intervento / Trattamento |
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Frammenti freschi di corteccia ovarica
La corteccia dell'ovaio pericistico sarà tagliata in frammenti di 1 mm3 e sarà analizzata direttamente il giorno del prelievo (D0) o dopo la coltura organotipica (D7 e D14).
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Frammenti di corteccia ovarica congelati in crioviali termosaldati.
La corteccia ovarica pericistica verrà tagliata in frammenti di 1 mm3, congelati utilizzando un dispositivo di congelamento lento programmabile (Nano Digitcool, Cryo Bio System) in criovials termosaldati e conservati in azoto liquido (-196°C).
Successivamente, i frammenti verranno scongelati prima di essere analizzati il giorno dello scongelamento (D'0) e dopo 7 e 14 giorni (D7 e D14) di coltura organotipica.
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Crioconservazione del tessuto ovarico umano: immediatamente dopo la resezione della cisti, la corteccia ovarica pericistica verrà tagliata in frammenti di 1 mm3 e crioconservata in crioviali avvitate o termosaldate utilizzando un dispositivo di congelamento lento programmabile (Nano Digitcool, Cryo Bio System).
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Frammenti di corteccia ovarica congelati in crioviali avvitati.
La corteccia ovarica pericistica verrà tagliata in frammenti di 1 mm3, congelati utilizzando un dispositivo di congelamento lento programmabile (Nano Digitcool, Cryo Bio System) in criovials avvitati e conservati in azoto liquido (-196°C).
Successivamente i frammenti verranno scongelati prima di essere analizzati il giorno dello scongelamento (D'0) e dopo 7 e 14 giorni (D7 e D14) di coltura organotipica.
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Crioconservazione del tessuto ovarico umano: immediatamente dopo la resezione della cisti, la corteccia ovarica pericistica verrà tagliata in frammenti di 1 mm3 e crioconservata in crioviali avvitate o termosaldate utilizzando un dispositivo di congelamento lento programmabile (Nano Digitcool, Cryo Bio System).
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Cosa sta misurando lo studio?
Misure di risultato primarie
Misura del risultato |
Misura Descrizione |
Lasso di tempo |
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Morfologia del follicolo ovarico post-scongelamento
Lasso di tempo: 24 mesi
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La morfologia del follicolo della corteccia ovarica fresca rispetto a quella congelata (con criovials termosaldati o avvitati)/scongelata sarà valutata su sezioni seriali colorate con ematossilina-eosina-zafferano. I frammenti verranno fissati il giorno del prelievo per il gruppo 1 e subito dopo lo scongelamento per i gruppi 2 e 3. La morfologia dei follicoli sarà valutata secondo i parametri descritti da Keros et al.
Riproduzione del ronzio.
2009.
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24 mesi
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Misure di risultato secondarie
Misura del risultato |
Misura Descrizione |
Lasso di tempo |
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Densità del follicolo ovarico post-scongelamento
Lasso di tempo: 24 mesi
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La densità follicolare (=numero di follicoli/mm2) della corteccia ovarica fresca rispetto a quella congelata (con criovials termosaldati o avvitati)/scongelata sarà valutata su sezioni seriali colorate con ematossilina-eosina-zafferano. I frammenti verranno fissati il giorno della raccolta per il gruppo 1 e subito dopo lo scongelamento per i gruppi 2 e 3.
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24 mesi
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Stadio del follicolo ovarico dopo la coltura organotipica
Lasso di tempo: 36 mesi
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Gli stadi follicolari (% di follicoli primordiali, primari, secondari e antrali) nella corteccia ovarica fresca rispetto a quella congelata (con criovials termosaldati o avvitati)/scongelata saranno valutati su sezioni seriali colorate con ematossilina-eosina-zafferano. I frammenti verranno fissati dopo 7 o 14 giorni di coltura organotipica.
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36 mesi
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Morfologia del follicolo ovarico dopo coltura organotipica
Lasso di tempo: 36 mesi
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La morfologia del follicolo della corteccia ovarica fresca rispetto a quella congelata (con criovials termosaldati o avvitati)/scongelata sarà valutata su sezioni seriali colorate con ematossilina-eosina-zafferano. I frammenti verranno fissati dopo 7 o 14 giorni di coltura organotipica.
La morfologia dei follicoli sarà valutata secondo i parametri descritti da Keros et al.
Riproduzione del ronzio.
2009.
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36 mesi
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Espressione di GDF-9 dopo coltura organotipica
Lasso di tempo: 36 mesi
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la percentuale di follicoli GDF9 positivi (cioè con un ovocita positivo per GDF-9) nella corteccia ovarica fresca e congelata (con criovials termosaldati o avvitati) / scongelata sarà valutata su sezioni seriali immunocolorate.
I frammenti verranno fissati dopo 7 o 14 giorni di coltura organotipica.
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36 mesi
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Proprietà termodinamiche del mezzo di congelamento
Lasso di tempo: 12 mesi
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Un calorimetro a scansione differenziale (DiamondDSC, PerkinElmer) verrà utilizzato per determinare la temperatura di cristallizzazione (Tc), la temperatura di fine fusione (Tm) e la temperatura di transizione (Tg'1) del mezzo di congelamento (Leibovitz con 4 mg/mL HSA, DMSO 1,5 M e saccarosio 0,1 M).
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12 mesi
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Proliferazione del follicolo ovarico post-scongelamento
Lasso di tempo: 24 mesi
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La percentuale di cellule proliferative (oociti o granulosa positive per Ki-67 in fresche e congelate (con crioviali termosoldati o avvitati) /scongelata corteccia ovarica sarà valutata su sezioni seriali immunostaine.
I frammenti saranno fissati il giorno della raccolta per il gruppo 1 e direttamente dopo scongelamento per i gruppi 2 e 3.
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24 mesi
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Apoptosi follicolo ovarica post-scongelamento
Lasso di tempo: 24 mesi
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La percentuale di caspasi apoptotica (cellule di oociti o granulosa positive alla scissione 3) in fresca e congelata (con crioviali termosoldati o avvitati) /corteccia ovarica scongelata sarà valutata su sezioni seriali immunostaine.
I frammenti saranno fissati il giorno della raccolta per il gruppo 1 e direttamente dopo scongelamento per i gruppi 2 e 3.
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24 mesi
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Proliferazione dopo cultura organotipica
Lasso di tempo: 36 mesi
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La percentuale di cellule proliferative (oociti o granulosa positive per Ki-67) in fresche e congelate (con crioviali termosoldati o avvitati) /corteccia ovarica scongelata sarà valutata su sezioni seriali immunocolorate.
I frammenti saranno fissati dopo 7 o 14 giorni di cultura organotipica.
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36 mesi
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Apoptosi dopo cultura organotipica
Lasso di tempo: 36 mesi
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La percentuale di caspasi apoptotica (cellule di oociti o granulosa positive alla scissione 3) in fresca e congelata (con crioviali termosoldati o avvitati) /corteccia ovarica scongelata sarà valutata su sezioni seriali immunostaine.
I frammenti saranno fissati dopo 7 o 14 giorni di cultura organotipica.
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36 mesi
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Secrezione AMH dopo cultura organotipica
Lasso di tempo: 36 mesi
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I livelli di AMH saranno quantificati in terreno di coltura durante la coltura organotipica di fresca e congelata (con crioviali termosoldati o avvitati) /corteccia ovarica scongelata.
I media culturali verranno raccolti ogni tre giorni di cultura per 14 giorni.
AMH sarà quantificato mediante elettrochemiluminescenza
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36 mesi
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Secrezione di estrogeni dopo cultura organotipica
Lasso di tempo: 36 mesi
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I livelli di estrogeni saranno quantificati in terreno di coltura durante la coltura organotipica di fresca e congelata (con crioviali termosoldati o avvitati) /corteccia ovarica scongelata.
I media culturali verranno raccolti ogni tre giorni di cultura per 14 giorni.
Gli estrogeni saranno quantificati mediante elettrochemiluminescenza
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36 mesi
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Collaboratori e investigatori
Qui è dove troverai le persone e le organizzazioni coinvolte in questo studio.
Investigatori
- Investigatore principale: Florence BRUGNON, MD, PhD, University Hospital, Clermont-Ferrand
Studiare le date dei record
Queste date tengono traccia dell'avanzamento della registrazione dello studio e dell'invio dei risultati di sintesi a ClinicalTrials.gov. I record degli studi e i risultati riportati vengono esaminati dalla National Library of Medicine (NLM) per assicurarsi che soddisfino specifici standard di controllo della qualità prima di essere pubblicati sul sito Web pubblico.
Studia le date principali
Inizio studio (Effettivo)
5 maggio 2022
Completamento primario (Effettivo)
1 giugno 2025
Completamento dello studio (Stimato)
31 dicembre 2025
Date di iscrizione allo studio
Primo inviato
5 dicembre 2024
Primo inviato che soddisfa i criteri di controllo qualità
5 dicembre 2024
Primo Inserito (Effettivo)
9 dicembre 2024
Aggiornamenti dei record di studio
Ultimo aggiornamento pubblicato (Effettivo)
29 giugno 2025
Ultimo aggiornamento inviato che soddisfa i criteri QC
25 giugno 2025
Ultimo verificato
1 giugno 2025
Maggiori informazioni
Termini relativi a questo studio
Parole chiave
Termini MeSH pertinenti aggiuntivi
Altri numeri di identificazione dello studio
- 2022_Brugnon_FERTIOVO
Informazioni su farmaci e dispositivi, documenti di studio
Studia un prodotto farmaceutico regolamentato dalla FDA degli Stati Uniti
No
Studia un dispositivo regolamentato dalla FDA degli Stati Uniti
No
prodotto fabbricato ed esportato dagli Stati Uniti
No
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