Naisten hedelmällisyyden säilyttäminen: innovatiivisten menetelmien arviointi munasarjakudosten kylmäsäilytykseen (FERTIOVO)
keskiviikko 25. kesäkuuta 2025 päivittänyt: University Hospital, Clermont-Ferrand
Viimeaikaiset innovaatiot syövän diagnosoinnissa ja hoidossa ovat parantaneet potilaiden viiden vuoden eloonjäämistä. Syöpähoidot voivat kuitenkin heikentää potilaan hedelmällisyyttä; siksi hedelmällisyyden säilyttämistä suositellaan ennen hoidon aloittamista. Ainoa menetelmä nuorten esimurrosikäisten tyttöjen hedelmällisyyden säilyttämiseksi, jota voidaan käyttää myös murrosikäisille naisille, on munasarjakudoksen kryosäilytys (OTC) myöhemmällä autotransplantaatiolla. Vaikka maailmanlaajuisesti on raportoitu 200 synnytystä OTC:n ja elinsiirron jälkeen, merkittäviä parannuksia tarvitaan. Itse asiassa pakastus- ja sulatuskäytännöt vaihtelevat laboratorioittain (alustat, kylmäsuojat, jäätymiskäyrä jne.), eivätkä valintakriteerit ole perusteltuja. Lisäksi suurin osa laboratorioista käyttää vaarallisia laitteita (esim. kierrekorkiset kryoviaalit) OTC-käyttöön, mikä altistaa munasarjakudokset biologisille vaaroille näytteiden varastoinnin aikana typpisäiliöissä. Näiden riskien poistamiseksi uusia "korkean turvatason" laitteita on kaupallistettu (hitsatut kryoputket). Vaikka lämpöhitsaus saattaa muuttaa kudoksen laatua, näillä innovatiivisilla laitteilla jäädytetyn ihmisen munasarjakudoksen toimivuutta ei ole vielä arvioitu. Tutkimuksemme tavoitteet ovat i) optimoida ihmisen OTC:n pakastus- ja sulatusprotokollat pakastusväliaineen termodynaamisten ominaisuuksien ja laitteen tyypin (hitsattu tai ruuvattu kryoputki) mukaan ja ii) määrittää, vaikuttaako kryoputken tyyppi ihmisen munasarjakudoksen laatu.
Tämä projekti mahdollistaa paremman ymmärryksen jäädyttämisen vaikutuksesta munasarjakudoksen toimintaan sekä optimaalisen OTC-protokollan käyttöönoton Clermont-Ferrandin sairaalan ART-laboratoriossa potilaiden hoidon optimoimiseksi.
Tutkimuksen yleiskatsaus
Tila
Aktiivinen, ei rekrytointi
Ehdot
Yksityiskohtainen kuvaus
Tämän projektin tavoitteena on selvittää, vaikuttaako kryogeenisen putken tyyppi (kierrekorkilla tai lämpöjuotettu) munasarjakudoksen laatuun ja toimivuuteen kylmäsäilytyksen jälkeen.
Ensin suoritetaan pakastusväliaineen termodynaamisten ominaisuuksien karakterisointi differentiaalisen pyyhkäisykalorimetrin (Diamond DSC, PerkinElmer) avulla pakastus- ja sulatusprotokollien optimoimiseksi.
Tämä analyysi määrittelee tärkeät parametrit, kuten kiteytyslämpötila (Tc), sulamisen loppulämpötila (Tm) ja siirtymälämpötilat (Tg'1).
Kun pakastus- ja sulatusprotokollat on optimoitu, käytämme hyvänlaatuisia kystoja ympäröivää ihmisen munasarjakuorta, laboratoriomme aiemmin validoimaa mallia, määrittääksemme, vaikuttaako kryoputken tyyppi ihmisen munasarjakudoksen laatuun.
Näillä munasarjojen aivokuoren näytteillä, jotka tavallisesti tuhotaan klinikoissa, on samanlaiset ominaisuudet kuin normaalilla munasarjakuorella.
Munasarjakudos leikataan 1 mm3:n palasiksi ja jaetaan kolmeen ryhmään: tuore munasarjakuori (ryhmä 1, kontrolli), munasarjakuori kylmäsäilytettynä lämpöjuotetuissa kryogeenisissä putkissa (ryhmä 2) tai kierrekorkissa (ryhmä 3).
Arvioimme munasarjakudoksen laadun välittömästi resektion jälkeen ryhmässä 1 tai sulatuksen jälkeen ryhmissä 2 ja 3 analysoimalla follikkelien tiheyttä ja morfologiaa (HES-värjäys) ja proliferaatio/apoptoosi tasapainoa (immunohistokemia (IHC) KI67:lle ja pilkkoutuneelle kaspaasille 3).
Munasarjakudoksen toiminnallisuuden arvioimiseksi sulatuksen jälkeen munasarjakuoren fragmentteja viljellään in vitro.
Analysoimme i) follikkelien tiheyttä, tyyppiä ja morfologiaa (HES-värjäys), ii) proliferaatio-/apoptoositasapainoa (IHC KI67:lle ja pilkottu kaspaasi 3), iii) tärkeimpien follikulogeneesin säätelijöiden ilmentymistasot (IHC GDF-9:lle) ja iv) viljelmässä erittyneiden follikulogeneesiin liittyvien hormonien (AMH, estrogeeni) tasot keskikokoinen.
Opintotyyppi
Havainnollistava
Ilmoittautuminen (Todellinen)
30
Yhteystiedot ja paikat
Tässä osiossa on tutkimuksen suorittajien yhteystiedot ja tiedot siitä, missä tämä tutkimus suoritetaan.
Opiskelupaikat
-
-
-
Clermont-Ferrand, Ranska, 63100
- University Hospital
-
-
Osallistumiskriteerit
Tutkijat etsivät ihmisiä, jotka sopivat tiettyyn kuvaukseen, jota kutsutaan kelpoisuuskriteereiksi. Joitakin esimerkkejä näistä kriteereistä ovat henkilön yleinen terveydentila tai aiemmat hoidot.
Kelpoisuusvaatimukset
Opintokelpoiset iät
- Aikuinen
Hyväksyy terveitä vapaaehtoisia
Ei
Näytteenottomenetelmä
Ei-todennäköisyysnäyte
Tutkimusväestö
Aikuinen nainen määrättiin hyvänlaatuiseen munasarjakystaresektioon Clermont-Ferrandin yliopistollisen sairaalan keskustassa.
Kuvaus
Sisällön kriteerit:
- Aikuinen nainen, jolle on määrätty hyvänlaatuinen munasarjakystaresektio (dermoidi, toiminnallinen, limakalvo tai seroosikysta)
- Alle 37-vuotias ja yli 18-vuotias
- Pystyy antamaan kirjallisen tietoisen suostumuksen osallistua tutkimukseen
- Sosiaalipalveluun sidoksissa
Poissulkemiskriteerit:
- Yli 37-vuotiaat ja alle 18-vuotiaat naiset
- Munasarjojen monirakkulatauti
- Vähentynyt munasarjareservi
- Vaikea endometrioosi
- Pahanlaatuiset ja endometriumin kystat
Opintosuunnitelma
Tässä osiossa on tietoja tutkimussuunnitelmasta, mukaan lukien kuinka tutkimus on suunniteltu ja mitä tutkimuksella mitataan.
Miten tutkimus on suunniteltu?
Suunnittelun yksityiskohdat
Kohortit ja interventiot
Ryhmä/Kohortti |
Interventio / Hoito |
|---|---|
|
Tuoreet munasarjojen aivokuoren fragmentit
Perikystinen munasarjojen aivokuori leikataan 1 mm3:n fragmenteiksi ja analysoidaan joko suoraan keräyspäivänä (D0) tai organotyyppisen viljelyn jälkeen (D7 ja D14).
|
|
|
Munasarjan aivokuoren palaset jäädytettyinä lämpöjuotetuissa kryovialeissa.
Perikystinen munasarjojen aivokuori leikataan 1 mm3:n paloiksi, pakastetaan hitaalla ohjelmoitavalla pakastuslaitteella (Nano Digitcool, Cryo Bio System) lämpöjuotetuissa kryovialeissa ja varastoidaan nestetypessä (-196°C).
Sitten fragmentit sulatetaan ennen analysointia sulatuspäivänä (D'0) ja 7 ja 14 päivän (D7 ja D14) organotyyppisen viljelmän jälkeen.
|
Ihmisen munasarjakudoksen kylmäsäilytys: Välittömästi kystaresektion jälkeen munasarjojen perikystinen aivokuori leikataan 1 mm3:n paloiksi ja kylmäsäilytetään ruuvatussa tai lämpöjuotetussa kryovialissa käyttäen hitaasti ohjelmoitavaa pakastuslaitetta (Nano Digitcool, Cryo Bio System).
|
|
Kierretyissä kryovialeissa jäädytetyt munasarjakuoren fragmentit.
Perikystinen munasarjojen aivokuori leikataan 1 mm3:n paloiksi, pakastetaan hitaasti ohjelmoitavalla pakastuslaitteella (Nano Digitcool, Cryo Bio System) kierretyissä kryovialeissa ja varastoidaan nestemäisessä typessä (-196 °C).
Sitten fragmentit sulatetaan ennen analysointia sulatuspäivänä (D'0) ja 7 ja 14 päivän (D7 ja D14) organotyyppisen viljelmän jälkeen.
|
Ihmisen munasarjakudoksen kylmäsäilytys: Välittömästi kystaresektion jälkeen munasarjojen perikystinen aivokuori leikataan 1 mm3:n paloiksi ja kylmäsäilytetään ruuvatussa tai lämpöjuotetussa kryovialissa käyttäen hitaasti ohjelmoitavaa pakastuslaitetta (Nano Digitcool, Cryo Bio System).
|
Mitä tutkimuksessa mitataan?
Ensisijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
Sulatuksen jälkeinen munasarjojen follikkelia morfologia
Aikaikkuna: 24 kuukautta
|
Tuoreen ja jäädytetyn (lämpökuotettujen tai ruuvattujen kryovialeiden)/sulatetun munasarjakuoren follikkelien morfologia arvioidaan sarjaleikkeillä, jotka on värjätty hematoksyliini-eosiini-sahramilla. Fragmentit kiinnitetään keräyspäivänä ryhmälle 1 ja välittömästi sulatuksen jälkeen ryhmille 2 ja 3. Follikkelien morfologia arvioidaan Keros et ai. kuvaamien parametrien mukaisesti.
Hum Reprod.
2009.
|
24 kuukautta
|
Toissijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
Sulatuksen jälkeinen munasarjojen follikkelien tiheys
Aikaikkuna: 24 kuukautta
|
Follikkelien tiheys (= follikkelien lukumäärä/mm2) tuoreen vs. jäädytetyn (lämpökuotettujen tai ruuvattujen kryovialeiden kanssa)/sulatetun munasarjakuoren välillä arvioidaan sarjaleikkeillä, jotka on värjätty hematoksyliini-eosiini-sahramilla. Fragmentit korjataan ryhmälle 1 keräyspäivänä ja ryhmille 2 ja 3 välittömästi sulatuksen jälkeen.
|
24 kuukautta
|
|
Munasarjan follikkelivaihe organotyyppiviljelyn jälkeen
Aikaikkuna: 36 kuukautta
|
Follikkelien vaiheet (% primordiaalisista, primaarisista, sekundaarisista ja antrualisista follikkeleista) tuoreessa vs. jäädytetyssä (lämpökuotetulla tai ruuvatulla kryovialilla)/sulatetussa munasarjakuoressa arvioidaan sarjaleikkeillä, jotka on värjätty hematoksyliini-eosiini-sahramilla. Fragmentit kiinnitetään 7 tai 14 päivän organotyyppisen viljelyn jälkeen.
|
36 kuukautta
|
|
Munasarjan follikkelia morfologia organotyyppisen viljelyn jälkeen
Aikaikkuna: 36 kuukautta
|
Tuoreen ja jäädytetyn (lämpökuotettujen tai ruuvattujen kryovialeiden)/sulatetun munasarjakuoren follikkelien morfologia arvioidaan sarjaleikkeillä, jotka on värjätty hematoksyliini-eosiini-sahramilla. Fragmentit kiinnitetään 7 tai 14 päivän organotyyppisen viljelyn jälkeen.
Follikkelien morfologiaa arvioidaan parametrien mukaisesti, jotka ovat kuvanneet Keros et ai.
Hum Reprod.
2009.
|
36 kuukautta
|
|
GDF-9:n ilmentyminen organotyyppisen viljelmän jälkeen
Aikaikkuna: 36 kuukautta
|
GDF9-positiivisten follikkelien (eli GDF-9:lle positiivisen munasolun) prosenttiosuus tuoreessa ja jäädytetyssä (lämpökuotetulla tai ruuvatulla kryovialilla) / sulatetussa munasarjakuoressa arvioidaan immunovärjätyillä sarjaleikkeillä.
Fragmentit kiinnitetään 7 tai 14 päivän organotyyppisen viljelyn jälkeen.
|
36 kuukautta
|
|
Pakastusaineen termodynaamiset ominaisuudet
Aikaikkuna: 12 kuukautta
|
Differentiaalista pyyhkäisykalorimetriä (DiamondDSC, PerkinElmer) käytetään pakastusväliaineen (Leibovitz, 4 mg/ml) kiteytyslämpötilan (Tc), sulamisen loppulämpötilan (Tm) ja siirtymälämpötilan (Tg'1) määrittämiseen. HSA, 1,5 M DMSO ja 0,1 M sakkaroosi).
|
12 kuukautta
|
|
Sulavan munasarjojen follikkelin leviäminen
Aikaikkuna: 24 kuukautta
|
Proliferatiivisten (munasolujen tai granulosa-solujen prosentuaalinen osuus, joka on positiivinen Ki-67: lle tuoreena ja jäädytetyllä (termoroiduilla tai ruuvattuilla kryoviaaleilla) /sulatettujen munasarjojen aivokuoren kanssa arvioidaan immunoosoituneilla sarjaosilla.
Fragmentit kiinnitetään ryhmälle 1 ja ryhmille 2 ja 3 sulamisen jälkeen.
|
24 kuukautta
|
|
Sulavan munasarjojen follikkelin apoptoosi
Aikaikkuna: 24 kuukautta
|
Apoptoottisten (munasolujen tai granulosa -solujen positiivisen pilkkoutuneen kaspaasin 3) prosenttiosuus tuoreessa ja jäädytetyssä (termaloidun tai ruuvatun kryoviaalin kanssa) /sulatetuissa munasarjojen aivokuoressa arvioidaan immunoosoituneilla sarjaosilla.
Fragmentit kiinnitetään ryhmälle 1 ja ryhmille 2 ja 3 sulamisen jälkeen.
|
24 kuukautta
|
|
Leviäminen organotyyppisen viljelyn jälkeen
Aikaikkuna: 36 kuukautta
|
Proliferatiivisten (munasolujen tai granulosa-solujen positiivinen KI-67: n suhteen) prosenttiosuus tuoreessa ja jäädytetyssä (termaloidun tai ruuvatun kryoviaalin kanssa) /sulatetun munasarjan aivokuoren kanssa arvioidaan immunosioiduissa sarjaosissa.
Fragmentit kiinnitetään 7 tai 14 päivän organotyyppisen viljelyn jälkeen.
|
36 kuukautta
|
|
Apoptoosi organotyyppisen viljelyn jälkeen
Aikaikkuna: 36 kuukautta
|
Apoptoottisten (munasolujen tai granulosa -solujen positiivisen pilkkoutuneen kaspaasin 3) prosenttiosuus tuoreessa ja jäädytetyssä (termaloidun tai ruuvatun kryoviaalin kanssa) /sulatetuissa munasarjojen aivokuoressa arvioidaan immunoosoituneilla sarjaosilla.
Fragmentit kiinnitetään 7 tai 14 päivän organotyyppisen viljelyn jälkeen.
|
36 kuukautta
|
|
AMH: n eritys organotyyppisen kulttuurin jälkeen
Aikaikkuna: 36 kuukautta
|
AMH -tasot määritetään viljelyalustaan tuoreen ja jäädytetyn (termoroituneiden tai ruuvattujen kryoviaalien) organotyyppisen viljelyn aikana /sulatettujen munasarjojen aivokuoren aikana.
Kulttuurivälineet korjataan joka kolmas päivä kulttuuria 14 päivän ajan.
AMH määritetään sähkökemiluminesenssiin
|
36 kuukautta
|
|
Estrogeenin eritys organotyyppisen viljelyn jälkeen
Aikaikkuna: 36 kuukautta
|
Estrogeenitasot kvantifioituvat viljelyalustaan tuoreiden ja jäädytettyjen (termoroiduilla tai ruuvattujen kryoviaalien) organotyyppisen viljelyn aikana /sulatettujen munasarjojen aivokuoren aikana.
Kulttuurivälineet korjataan joka kolmas päivä kulttuuria 14 päivän ajan.
Estrogeeni kvantifioidaan sähkökemiluminesenssiin
|
36 kuukautta
|
Yhteistyökumppanit ja tutkijat
Täältä löydät tähän tutkimukseen osallistuvat ihmiset ja organisaatiot.
Tutkijat
- Päätutkija: Florence BRUGNON, MD, PhD, University Hospital, Clermont-Ferrand
Opintojen ennätyspäivät
Nämä päivämäärät seuraavat ClinicalTrials.gov-sivustolle lähetettyjen tutkimustietueiden ja yhteenvetojen edistymistä. National Library of Medicine (NLM) tarkistaa tutkimustiedot ja raportoidut tulokset varmistaakseen, että ne täyttävät tietyt laadunvalvontastandardit, ennen kuin ne julkaistaan julkisella verkkosivustolla.
Opi tärkeimmät päivämäärät
Opiskelun aloitus (Todellinen)
Torstai 5. toukokuuta 2022
Ensisijainen valmistuminen (Todellinen)
Sunnuntai 1. kesäkuuta 2025
Opintojen valmistuminen (Arvioitu)
Keskiviikko 31. joulukuuta 2025
Opintoihin ilmoittautumispäivät
Ensimmäinen lähetetty
Torstai 5. joulukuuta 2024
Ensimmäinen toimitettu, joka täytti QC-kriteerit
Torstai 5. joulukuuta 2024
Ensimmäinen Lähetetty (Todellinen)
Maanantai 9. joulukuuta 2024
Tutkimustietojen päivitykset
Viimeisin päivitys julkaistu (Todellinen)
Sunnuntai 29. kesäkuuta 2025
Viimeisin lähetetty päivitys, joka täytti QC-kriteerit
Keskiviikko 25. kesäkuuta 2025
Viimeksi vahvistettu
Sunnuntai 1. kesäkuuta 2025
Lisää tietoa
Tähän tutkimukseen liittyvät termit
Avainsanat
Muita asiaankuuluvia MeSH-ehtoja
Muut tutkimustunnusnumerot
- 2022_Brugnon_FERTIOVO
Lääke- ja laitetiedot, tutkimusasiakirjat
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää lääkevalmistetta
Ei
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää laitetuotetta
Ei
Yhdysvalloissa valmistettu ja sieltä viety tuote
Ei
Nämä tiedot haettiin suoraan verkkosivustolta clinicaltrials.gov ilman muutoksia. Jos sinulla on pyyntöjä muuttaa, poistaa tai päivittää tutkimustietojasi, ota yhteyttä register@clinicaltrials.gov. Heti kun muutos on otettu käyttöön osoitteessa clinicaltrials.gov, se päivitetään automaattisesti myös verkkosivustollemme .