Zachování ženské plodnosti: Vyhodnocení inovativních metod kryokonzervace ovariální tkáně (FERTIOVO)
25. června 2025 aktualizováno: University Hospital, Clermont-Ferrand
Nedávné inovace v diagnostice a terapii rakoviny zlepšily pětileté přežití pacientů. Protinádorová léčba však může zhoršit plodnost pacientů; proto se před zahájením léčby doporučuje zachovat plodnost. Jedinou metodou pro zachování plodnosti mladých dívek v předpubertálním věku, kterou lze použít i u pubescentek, je kryokonzervace ovariální tkáně (OTC) s pozdější autotransplantací. Přestože po OTC a transplantacích bylo celosvětově hlášeno 200 porodů, je zapotřebí výrazných zlepšení. Protokoly zmrazování a rozmrazování se skutečně liší podle laboratoří (média, kryoprotektiva, křivka zmrazování atd...) a výběrová kritéria nejsou opodstatněná. Většina laboratoří navíc používá nebezpečná zařízení (např. kryozkumavky se šroubovacím uzávěrem) pro OTC, které vystavují ovariální tkáně biologickým rizikům během skladování vzorků v nádržích s dusíkem. Pro eliminaci těchto rizik byla komercializována nová zařízení s "vysokým zabezpečením" (svařované kryotuby). Zatímco tepelné svařování by mohlo změnit kvalitu tkáně, funkčnost lidské ovariální tkáně zmrazené pomocí těchto inovativních zařízení dosud nebyla hodnocena. Cílem naší studie je i) optimalizovat protokoly zmrazování a rozmrazování pro lidské OTC podle termodynamických vlastností zmrazovacího média a typu zařízení (svařovaná nebo šroubovaná kryozkumavka) a ii) zjistit, zda typ kryozkumavky ovlivňuje kvalitu lidské ovariální tkáně.
Tento projekt umožní lépe porozumět vlivu zmrazení na funkčnost ovariální tkáně a také implementaci optimálního protokolu pro OTC v rámci ART laboratoře nemocnice Clermont-Ferrand pro optimalizaci péče o pacienty.
Přehled studie
Postavení
Aktivní, ne nábor
Podmínky
Detailní popis
Cílem tohoto projektu je zjistit, zda typ kryogenní zkumavky (se šroubovacím uzávěrem nebo tepelně pájené) ovlivňuje kvalitu a funkčnost ovariální tkáně po kryokonzervaci.
Nejprve bude provedena charakterizace termodynamických vlastností zmrazovacího média pomocí diferenciálního skenovacího kalorimetru (Diamond DSC, PerkinElmer) za účelem optimalizace protokolů zmrazování a rozmrazování.
Tato analýza bude definovat důležité parametry, jako je teplota krystalizace (Tc), teplota konce tání (Tm) a teploty přechodu (Tg'1).
Jakmile budou protokoly zmrazování a rozmrazování optimalizovány, použijeme lidskou ovariální kůru obklopující benigní cysty, model dříve ověřený naší laboratoří, abychom určili, zda typ kryozkumavky ovlivňuje kvalitu lidské ovariální tkáně.
Tyto vzorky ovariální kůry obvykle zničené na klinikách sdílejí podobné vlastnosti jako normální ovariální kůra.
Ovariální tkáň bude rozřezána na 1 mm3 fragmenty a rozdělena do tří skupin: čerstvá ovariální kůra (skupina 1, kontrola), ovariální kůra kryokonzervovaná v termopájených kryogenních zkumavkách (skupina 2) nebo se šroubovacím uzávěrem (skupina 3).
Kvalitu ovariální tkáně posoudíme ihned po resekci u skupiny 1 nebo po rozmrazení u skupiny 2 a 3 analýzou hustoty a morfologie folikulů (HES barvení) a rovnováhy proliferace/apoptózy (Imunohistochemie (IHC) pro KI67 a štěpenou kaspázu 3).
Pro posouzení funkčnosti ovariální tkáně po rozmrazení budou fragmenty ovariální kůry kultivovány in vitro.
Budeme analyzovat i) hustotu, typ a morfologii folikulů (barvení HES), ii) rovnováhu proliferace/apoptózy (IHC pro KI67 a štěpenou kaspázu 3), iii) hladiny exprese hlavních regulátorů folikulogeneze (IHC pro GDF-9) a iv) hladiny hormonů spojených s folikulogenezí (AMH, estrogen) vylučovaných v kultivačním médiu.
Typ studie
Pozorovací
Zápis (Aktuální)
30
Kontakty a umístění
Tato část poskytuje kontaktní údaje pro ty, kteří studii provádějí, a informace o tom, kde se tato studie provádí.
Studijní místa
-
-
-
Clermont-Ferrand, Francie, 63100
- University Hospital
-
-
Kritéria účasti
Výzkumníci hledají lidi, kteří odpovídají určitému popisu, kterému se říká kritéria způsobilosti. Některé příklady těchto kritérií jsou celkový zdravotní stav osoby nebo předchozí léčba.
Kritéria způsobilosti
Věk způsobilý ke studiu
- Dospělý
Přijímá zdravé dobrovolníky
Ne
Metoda odběru vzorků
Vzorek nepravděpodobnosti
Studijní populace
Dospělá žena plánovaná na resekci benigní ovariální cysty v centru univerzitní nemocnice v Clermont-Ferrand.
Popis
Kritéria zahrnutí:
- Dospělá žena plánovaná na resekci benigní ovariální cysty (dermoidní, funkční, mucinózní nebo serózní cysty)
- Do 37 let a nad 18 let
- Schopnost dát písemný informovaný souhlas s účastí ve výzkumné studii
- Napojený na sociální službu
Kritéria vyloučení:
- Ženy starší 37 let a mladší 18 let
- Syndrom polycystických vaječníků
- Snížená ovariální rezerva
- Těžká endometrióza
- Maligní a endometriální cysty
Studijní plán
Tato část poskytuje podrobnosti o studijním plánu, včetně toho, jak je studie navržena a co studie měří.
Jak je studie koncipována?
Detaily designu
Kohorty a intervence
Skupina / kohorta |
Intervence / Léčba |
|---|---|
|
Čerstvé fragmenty ovariální kůry
Kůra pericystických ovarií bude nařezána na 1 mm3 fragmenty a buď přímo analyzována v den odběru (D0) nebo po organotypické kultivaci (D7 a D14).
|
|
|
Fragmenty ovariální kůry zmrazené v tepelně pájených kryozkumavkách.
Kůra pericystických vaječníků bude nařezána na 1 mm3 fragmenty, zmražena pomocí pomalého programovatelného zmrazovacího zařízení (Nano Digitcool, Cryo Bio System) v tepelně pájených kryozkumavkách a uložena v kapalném dusíku (-196 °C).
Poté budou fragmenty rozmraženy před analýzou v den rozmrazení (D'0) a po 7 a 14 dnech (D7 a D14) organotypické kultury.
|
Kryokonzervace tkáně lidských vaječníků: ihned po resekci cysty bude pericystická kůra vaječníků rozřezána na fragmenty o velikosti 1 mm3 a kryokonzervována ve šroubovaných nebo tepelně pájených kryozkumavkách pomocí pomalého programovatelného mrazícího zařízení (Nano Digitcool, Cryo Bio System).
|
|
Fragmenty ovariální kůry zmrazené ve šroubovaných kryozkumavkách.
Kůra pericystických vaječníků bude nařezána na 1 mm3 fragmenty, zmražena pomocí pomalého programovatelného zmrazovacího zařízení (Nano Digitcool, Cryo Bio System) ve šroubovaných kryozkumavkách a uložena v kapalném dusíku (-196 °C).
Poté budou fragmenty rozmraženy před analýzou v den rozmrazení (D'0) a po 7 a 14 dnech (D7 a D14) organotypické kultury.
|
Kryokonzervace tkáně lidských vaječníků: ihned po resekci cysty bude pericystická kůra vaječníků rozřezána na fragmenty o velikosti 1 mm3 a kryokonzervována ve šroubovaných nebo tepelně pájených kryozkumavkách pomocí pomalého programovatelného mrazícího zařízení (Nano Digitcool, Cryo Bio System).
|
Co je měření studie?
Primární výstupní opatření
Měření výsledku |
Popis opatření |
Časové okno |
|---|---|---|
|
Morfologie ovariálních folikulů po rozmrazení
Časové okno: 24 měsíců
|
Morfologie folikulů čerstvé versus zmrazené (s tepelně pájenými nebo šroubovanými kryozkumavkami)/rozmražené ovariální kůry bude hodnocena na sériových řezech obarvených hematoxylinem-eosinem-šafránem. Fragmenty budou fixovány v den odběru pro skupinu 1 a přímo po rozmrazení pro skupiny 2 a 3. Morfologie folikulů bude hodnocena podle parametrů popsaných Keros et al.
Hum Reprod.
2009.
|
24 měsíců
|
Sekundární výstupní opatření
Měření výsledku |
Popis opatření |
Časové okno |
|---|---|---|
|
Hustota ovariálních folikulů po rozmrazení
Časové okno: 24 měsíců
|
Hustota folikulů (= počet folikulů/mm2) čerstvého versus zmrazeného (s tepelně pájenými nebo šroubovanými kryozkumavkami)/rozmraženého ovariálního kortexu bude hodnocena na sériových řezech obarvených hematoxylinem-eosinem-šafránem. Fragmenty budou fixovány v den odběru pro skupinu 1 a přímo po rozmrazení pro skupiny 2 a 3.
|
24 měsíců
|
|
Fáze ovariálních folikulů po organotypické kultuře
Časové okno: 36 měsíců
|
Folikulární stadia (% primordiálních, primárních, sekundárních a antrálních folikulů) v čerstvých versus zmrazených (s tepelně pájenými nebo šroubovanými kryozkumačkami)/rozmraženém ovariálním kortexu budou hodnocena na sériových řezech obarvených hematoxylinem-eosinem-šafránem. Fragmenty budou fixovány po 7 nebo 14 dnech organotypické kultivace.
|
36 měsíců
|
|
Morfologie ovariálních folikulů po organotypické kultuře
Časové okno: 36 měsíců
|
Morfologie folikulů čerstvé versus zmrazené (s tepelně pájenými nebo šroubovanými kryozkumavkami)/rozmražené ovariální kůry bude hodnocena na sériových řezech obarvených hematoxylinem-eosinem-šafránem. Fragmenty budou fixovány po 7 nebo 14 dnech organotypické kultivace.
Morfologie folikulů bude hodnocena podle parametrů popsaných Keros et al.
Hum Reprod.
2009.
|
36 měsíců
|
|
Exprese GDF-9 po organotypické kultivaci
Časové okno: 36 měsíců
|
procento GDF9 pozitivních folikulů (tj. s oocytem pozitivním na GDF-9) v čerstvém a zmrazeném (s tepelně pájenými nebo šroubovanými kryozkumavkami)/rozmraženém ovariálním kortexu bude hodnoceno na imunobarvených sériových řezech.
Fragmenty budou fixovány po 7 nebo 14 dnech organotypické kultivace.
|
36 měsíců
|
|
Termodynamické vlastnosti mrazícího média
Časové okno: 12 měsíců
|
Diferenciální skenovací kalorimetr (DiamondDSC, PerkinElmer) bude použit ke stanovení teploty krystalizace (Tc), teploty konce tání (Tm) a teploty přechodu (Tg'1) mrazícího média (Leibovitz s 4 mg/ml HSA, 1,5M DMSO a 0,1M sacharóza).
|
12 měsíců
|
|
Proliferace folikulu ovariálních folikulů post-darů
Časové okno: 24 měsíců
|
Procento proliferativních (oocytových nebo granulosových buněk pozitivních na KI-67 v čerstvých a zmrazených (s termosolderovanými nebo šroubovanými kryoviálními) /rozmrazenými ovariálními kůra bude hodnoceno na imunokorded sériových řezů.
Fragmenty budou stanoveny v den sběru pro skupinu 1 a hned po rozmrazení pro skupiny 2 a 3.
|
24 měsíců
|
|
Post-darwingové ovariální folikul apoptóza
Časové okno: 24 měsíců
|
Procento apoptotických (oocytových nebo granulosových buněk pozitivních štěpených kaspáz 3) v čerstvé a zmrazené (s termosolderovanými nebo šroubovanými kryoviálními) /rozmrazovanými ovariálními kůra bude hodnoceno na imunostartovaných sériových řezech.
Fragmenty budou stanoveny v den sběru pro skupinu 1 a hned po rozmrazení pro skupiny 2 a 3.
|
24 měsíců
|
|
Proliferace po organotypické kultuře
Časové okno: 36 měsíců
|
Procento proliferativních (oocytových nebo granulosových buněk pozitivních na KI-67) v čerstvých a zmrazených (s termosolderovanými nebo šroubovanými kryoviálními) /rozmrazenými ovariálními kůra bude hodnoceno na imunokompojených sériových řezech.
Fragmenty budou fixovány po 7 nebo 14 dnech organotypické kultury.
|
36 měsíců
|
|
Apoptóza po organotypické kultuře
Časové okno: 36 měsíců
|
Procento apoptotických (oocytových nebo granulosových buněk pozitivních štěpených kaspáz 3) v čerstvé a zmrazené (s termosolderovanými nebo šroubovanými kryoviálními) /rozmrazovanými ovariálními kůra bude hodnoceno na imunostartovaných sériových řezech.
Fragmenty budou fixovány po 7 nebo 14 dnech organotypické kultury.
|
36 měsíců
|
|
Sekrece AMH po organotypické kultuře
Časové okno: 36 měsíců
|
Hladiny AMH budou kvantifikovány v kultivačním médiu během organotypické kultury čerstvé a zmrazené (s termosolderovanými nebo šroubovanými kryoviálními) /rozmrazovanými ovariálními kůra.
Kulturní média budou sklizena každé tři dny kultury po dobu 14 dnů.
AMH bude kvantifikována elektrochemiluminiscence
|
36 měsíců
|
|
Sekrece estrogenu po organotypické kultuře
Časové okno: 36 měsíců
|
Hladiny estrogenu budou kvantifikovány v kultivačním médiu během organotypické kultury čerstvé a zmrazené (s termosolderovanými nebo šroubovanými kryoviálními) /rozmrazovanými ovariálními kůra.
Kulturní média budou sklizena každé tři dny kultury po dobu 14 dnů.
Estrogen bude kvantifikován elektrochemiluminiscence
|
36 měsíců
|
Spolupracovníci a vyšetřovatelé
Zde najdete lidi a organizace zapojené do této studie.
Vyšetřovatelé
- Vrchní vyšetřovatel: Florence BRUGNON, MD, PhD, University Hospital, Clermont-Ferrand
Termíny studijních záznamů
Tato data sledují průběh záznamů studie a předkládání souhrnných výsledků na ClinicalTrials.gov. Záznamy ze studií a hlášené výsledky jsou před zveřejněním na veřejné webové stránce přezkoumány Národní lékařskou knihovnou (NLM), aby se ujistily, že splňují specifické standardy kontroly kvality.
Hlavní termíny studia
Začátek studia (Aktuální)
5. května 2022
Primární dokončení (Aktuální)
1. června 2025
Dokončení studie (Odhadovaný)
31. prosince 2025
Termíny zápisu do studia
První předloženo
5. prosince 2024
První předloženo, které splnilo kritéria kontroly kvality
5. prosince 2024
První zveřejněno (Aktuální)
9. prosince 2024
Aktualizace studijních záznamů
Poslední zveřejněná aktualizace (Aktuální)
29. června 2025
Odeslaná poslední aktualizace, která splnila kritéria kontroly kvality
25. června 2025
Naposledy ověřeno
1. června 2025
Více informací
Termíny související s touto studií
Klíčová slova
Další relevantní podmínky MeSH
Další identifikační čísla studie
- 2022_Brugnon_FERTIOVO
Informace o lécích a zařízeních, studijní dokumenty
Studuje lékový produkt regulovaný americkým FDA
Ne
Studuje produkt zařízení regulovaný americkým úřadem FDA
Ne
produkt vyrobený a vyvážený z USA
Ne
Tyto informace byly beze změn načteny přímo z webu clinicaltrials.gov. Máte-li jakékoli požadavky na změnu, odstranění nebo aktualizaci podrobností studie, kontaktujte prosím register@clinicaltrials.gov. Jakmile bude změna implementována na clinicaltrials.gov, bude automaticky aktualizována i na našem webu .