Erhaltung der Fruchtbarkeit von Frauen: Bewertung innovativer Methoden zur Kryokonservierung von Eierstockgewebe (FERTIOVO)
25. Juni 2025 aktualisiert von: University Hospital, Clermont-Ferrand
Die jüngsten Innovationen in der Krebsdiagnose und -therapie haben die Fünf-Jahres-Überlebensrate der Patienten verbessert. Allerdings können Krebsbehandlungen die Fruchtbarkeit des Patienten beeinträchtigen; Daher wird vor Therapiebeginn die Erhaltung der Fruchtbarkeit empfohlen. Die einzige Methode zur Erhaltung der Fruchtbarkeit junger präpubertärer Mädchen, die auch bei pubertierenden Frauen angewendet werden kann, ist die Kryokonservierung von Eierstockgewebe (OTC) mit späterer Autotransplantation. Obwohl weltweit 200 Geburten nach OTC und Transplantation gemeldet wurden, sind erhebliche Verbesserungen erforderlich. Tatsächlich variieren die Protokolle zum Einfrieren und Auftauen je nach Labor (Medien, Kryoschutzmittel, Gefrierkurve usw.) und Auswahlkriterien sind nicht gerechtfertigt. Darüber hinaus verwenden die meisten Labore unsichere Geräte (z. B. Kryoröhrchen mit Schraubverschluss) für OTC-Anwendungen, die Eierstockgewebe während der Probenlagerung in Stickstofftanks biologischen Gefahren aussetzen. Um diese Risiken zu beseitigen, wurden neuartige „Hochsicherheits“-Geräte auf den Markt gebracht (geschweißte Kryoröhren). Obwohl thermisches Schweißen die Gewebequalität verändern könnte, wurde die Funktionalität des mit diesen innovativen Geräten eingefrorenen menschlichen Eierstockgewebes noch nicht bewertet. Die Ziele unserer Studie sind i) die Optimierung der Gefrier- und Auftauprotokolle für menschliches OTC entsprechend den thermodynamischen Eigenschaften des Gefriermediums und der Art des Geräts (geschweißtes oder geschraubtes Kryorohr) und ii) die Bestimmung, ob die Art des Kryorohrs Einfluss auf die Temperatur hat Qualität des menschlichen Eierstockgewebes.
Dieses Projekt ermöglicht ein besseres Verständnis der Auswirkungen des Einfrierens auf die Funktionalität des Eierstockgewebes sowie die Implementierung eines optimalen OTC-Protokolls im ART-Labor des Krankenhauses Clermont-Ferrand, um die Patientenversorgung zu optimieren.
Studienübersicht
Status
Aktiv, nicht rekrutierend
Bedingungen
Detaillierte Beschreibung
Ziel dieses Projekts ist es herauszufinden, ob die Art des Kryoröhrchens (mit Schraubverschluss oder thermogelötet) einen Einfluss auf die Qualität und Funktionalität des Eierstockgewebes nach der Kryokonservierung hat.
Zunächst wird eine Charakterisierung der thermodynamischen Eigenschaften des Gefriermediums mithilfe eines Differentialscanningkalorimeters (Diamond DSC, PerkinElmer) durchgeführt, um die Gefrier- und Auftauprotokolle zu optimieren.
Diese Analyse definiert wichtige Parameter wie Kristallisationstemperatur (Tc), Schmelzendetemperatur (Tm) und Übergangstemperaturen (Tg'1).
Sobald die Protokolle zum Einfrieren und Auftauen optimiert sind, werden wir die menschliche Eierstockrinde, die gutartige Zysten umgibt, verwenden, ein zuvor von unserem Labor validiertes Modell, um zu bestimmen, ob die Art des Kryorohrs die Qualität des menschlichen Eierstockgewebes beeinflusst.
Diese Proben der Eierstockrinde, die normalerweise in Kliniken vernichtet werden, weisen ähnliche Eigenschaften wie die normale Eierstockrinde auf.
Eierstockgewebe wird in 1 mm3 große Fragmente geschnitten und in drei Gruppen eingeteilt: frische Eierstockrinde (Gruppe 1, Kontrolle), kryokonservierte Eierstockrinde in thermogelöteten Kryoröhrchen (Gruppe 2) oder in Schraubdeckel (Gruppe 3).
Wir werden die Qualität des Eierstockgewebes unmittelbar nach der Resektion für Gruppe 1 oder nach dem Auftauen für Gruppe 2 und 3 beurteilen, indem wir die Follikeldichte und -morphologie (HES-Färbung) sowie das Proliferations-/Apoptose-Gleichgewicht (Immunhistochemie (IHC) für KI67 und gespaltene Caspase 3) analysieren.
Um die Funktionalität des Eierstockgewebes nach dem Auftauen zu beurteilen, werden Fragmente der Eierstockrinde in vitro kultiviert.
Wir werden i) Follikeldichte, -typ und -morphologie (HES-Färbung), ii) das Proliferations-/Apoptose-Gleichgewicht (IHC für KI67 und gespaltene Caspase 3), iii) die Expressionsniveaus der wichtigsten Follikulogeneseregulatoren (IHC für GDF-9) analysieren iv) die Spiegel der Follikulogenese-assoziierten Hormone (AMH, Östrogen), die im Kulturmedium ausgeschieden werden.
Studientyp
Beobachtungs
Einschreibung (Tatsächlich)
30
Kontakte und Standorte
Dieser Abschnitt enthält die Kontaktdaten derjenigen, die die Studie durchführen, und Informationen darüber, wo diese Studie durchgeführt wird.
Studienorte
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Clermont-Ferrand, Frankreich, 63100
- University Hospital
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Teilnahmekriterien
Forscher suchen nach Personen, die einer bestimmten Beschreibung entsprechen, die als Auswahlkriterien bezeichnet werden. Einige Beispiele für diese Kriterien sind der allgemeine Gesundheitszustand einer Person oder frühere Behandlungen.
Zulassungskriterien
Studienberechtigtes Alter
- Erwachsene
Akzeptiert gesunde Freiwillige
Nein
Probenahmeverfahren
Nicht-Wahrscheinlichkeitsprobe
Studienpopulation
Bei einer erwachsenen Frau ist im Universitätsklinikum von Clermont-Ferrand eine Resektion einer gutartigen Ovarialzyste geplant.
Beschreibung
Einschlusskriterien:
- Bei einer erwachsenen Frau ist eine Resektion einer gutartigen Ovarialzyste geplant (Dermoid-, funktionelle, schleimige oder seröse Zysten)
- Unter 37 Jahre alt und über 18 Jahre alt
- Kann eine schriftliche Einverständniserklärung zur Teilnahme an der Forschungsstudie abgeben
- Dem Sozialdienst angeschlossen
Ausschlusskriterien:
- Frauen über 37 Jahre und unter 18 Jahre
- Syndrom der polyzystischen Eierstöcke
- Verminderte Eierstockreserve
- Schwere Endometriose
- Bösartige und endometriale Zysten
Studienplan
Dieser Abschnitt enthält Einzelheiten zum Studienplan, einschließlich des Studiendesigns und der Messung der Studieninhalte.
Wie ist die Studie aufgebaut?
Designdetails
Kohorten und Interventionen
Gruppe / Kohorte |
Intervention / Behandlung |
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Frische Fragmente der Eierstockrinde
Perizystischer Ovarialkortex wird in 1 mm3 große Fragmente geschnitten und entweder direkt am Tag der Entnahme (D0) oder nach organotypischer Kultur (D7 und D14) analysiert.
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Fragmente der Eierstockrinde, eingefroren in thermogelöteten Kryoröhrchen.
Perizystischer Ovarialkortex wird in 1 mm3 große Fragmente geschnitten, mit einem langsamen programmierbaren Gefriergerät (Nano Digitcool, Cryo Bio System) in thermogelöteten Kryoröhrchen eingefroren und in flüssigem Stickstoff (-196 °C) gelagert.
Anschließend werden die Fragmente aufgetaut, bevor sie am Tag des Auftauens (D'0) und nach 7 und 14 Tagen (D7 und D14) der organotypischen Kultur analysiert werden.
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Kryokonservierung von menschlichem Eierstockgewebe: Unmittelbar nach der Zystenresektion wird die perizystische Eierstockrinde in 1 mm3 große Fragmente geschnitten und in verschraubten oder thermogelöteten Kryoröhrchen unter Verwendung eines langsam programmierbaren Gefriergeräts (Nano Digitcool, Cryo Bio System) kryokonserviert.
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Fragmente der Eierstockrinde, eingefroren in verschraubten Kryoröhrchen.
Perizystischer Ovarialkortex wird in 1 mm3 große Fragmente geschnitten, mit einem langsam programmierbaren Gefriergerät (Nano Digitcool, Cryo Bio System) in verschraubten Kryoröhrchen eingefroren und in flüssigem Stickstoff (-196 °C) gelagert.
Dann werden die Fragmente aufgetaut, bevor sie am Tag des Auftauens (D'0) und nach 7 und 14 Tagen (D7 und D14) der organotypischen Kultur analysiert werden.
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Kryokonservierung von menschlichem Eierstockgewebe: Unmittelbar nach der Zystenresektion wird die perizystische Eierstockrinde in 1 mm3 große Fragmente geschnitten und in verschraubten oder thermogelöteten Kryoröhrchen unter Verwendung eines langsam programmierbaren Gefriergeräts (Nano Digitcool, Cryo Bio System) kryokonserviert.
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Was misst die Studie?
Primäre Ergebnismessungen
Ergebnis Maßnahme |
Maßnahmenbeschreibung |
Zeitfenster |
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Morphologie des Ovarialfollikels nach dem Auftauen
Zeitfenster: 24 Monate
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Die Follikelmorphologie von frischem versus gefrorenem (mit thermogelöteten oder verschraubten Kryoröhrchen)/aufgetautem Ovarialkortex wird anhand von mit Hämatoxylin-Eosin-Safran gefärbten Serienschnitten beurteilt. Die Fragmente werden am Tag der Entnahme für Gruppe 1 und direkt nach dem Auftauen für die Gruppen 2 und 3 fixiert. Die Morphologie der Follikel wird anhand der von Keros et al. beschriebenen Parameter bewertet.
Hum Reprod.
2009.
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24 Monate
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Sekundäre Ergebnismessungen
Ergebnis Maßnahme |
Maßnahmenbeschreibung |
Zeitfenster |
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Dichte der Eierstockfollikel nach dem Auftauen
Zeitfenster: 24 Monate
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Die Follikeldichte (=Anzahl der Follikel/mm2) von frischem im Vergleich zu gefrorenem (mit thermogelöteten oder verschraubten Kryoröhrchen)/aufgetautem Ovarialkortex wird anhand von mit Hämatoxylin-Eosin-Safran gefärbten Serienschnitten beurteilt. Die Fragmente werden bei Gruppe 1 am Sammeltag und bei den Gruppen 2 und 3 direkt nach dem Auftauen fixiert.
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24 Monate
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Eierstockfollikelstadium nach organotypischer Kultur
Zeitfenster: 36 Monate
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Follikelstadien (% der primordialen, primären, sekundären und antralen Follikel) im frischen versus gefrorenen (mit thermogelöteten oder verschraubten Kryoröhrchen)/aufgetauten Ovarialkortex werden anhand von mit Hämatoxylin-Eosin-Safran gefärbten Serienschnitten beurteilt. Fragmente werden nach 7 oder 14 Tagen organotypischer Kultur fixiert.
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36 Monate
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Morphologie des Eierstockfollikels nach organotypischer Kultur
Zeitfenster: 36 Monate
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Die Follikelmorphologie von frischem versus gefrorenem (mit thermogelöteten oder verschraubten Kryoröhrchen)/aufgetautem Ovarialkortex wird anhand von mit Hämatoxylin-Eosin-Safran gefärbten Serienschnitten beurteilt. Fragmente werden nach 7 oder 14 Tagen organotypischer Kultur fixiert.
Die Morphologie der Follikel wird anhand der von Keros et al. beschriebenen Parameter bewertet.
Hum Reprod.
2009.
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36 Monate
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GDF-9-Expression nach organotypischer Kultur
Zeitfenster: 36 Monate
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Der Prozentsatz der GDF9-positiven Follikel (d. h. mit einer Eizelle, die positiv für GDF-9 ist) in frischer und gefrorener (mit thermogelöteten oder verschraubten Kryoröhrchen)/aufgetautem Ovarialkortex wird anhand immungefärbter Serienschnitte beurteilt.
Fragmente werden nach 7 oder 14 Tagen organotypischer Kultur fixiert.
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36 Monate
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Thermodynamische Eigenschaften des Gefriermediums
Zeitfenster: 12 Monate
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Ein Differentialscanningkalorimeter (DiamondDSC, PerkinElmer) wird verwendet, um die Kristallisationstemperatur (Tc), die Schmelzendetemperatur (Tm) und die Übergangstemperatur (Tg'1) des Gefriermediums (Leibovitz mit 4 mg/ml) zu bestimmen HSA, 1,5 M DMSO und 0,1 M Saccharose).
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12 Monate
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Ovarialfollikel-Proliferation nach dem Auftauen
Zeitfenster: 24 Monate
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Der Prozentsatz des Proliferativen (Oozyten- oder Granulosazellen positiv für Ki-67 in frisch und gefrorenen (mit thermoseraten oder verschraubten Kryovials) /aufgetauten Ovarialkortex wird auf immunfärbtem Serienschnitten bewertet.
Fragmente werden am Tag der Sammlung für Gruppe 1 und direkt nach dem Auftauen für die Gruppen 2 und 3 fixiert.
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24 Monate
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Ovarialfollikel-Apoptose nach dem Auftauen
Zeitfenster: 24 Monate
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Der Prozentsatz der apoptotischen (Oozyten- oder Granulosazellen positive gespaltene Caspase 3) in frisch und gefrorener (mit thermoserhaltigen oder verschraubten Kryovials) /aufgetauten Ovarialkortex wird an immunfärbtem Serienschnitten bewertet.
Fragmente werden am Tag der Sammlung für Gruppe 1 und direkt nach dem Auftauen für die Gruppen 2 und 3 fixiert.
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24 Monate
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Proliferation nach organotypischer Kultur
Zeitfenster: 36 Monate
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Der Prozentsatz der Proliferativen (Oozyten- oder Granulosazellen, die für Ki-67 positiv) in frisch und gefrorenen (mit thermoserhaltigen oder verschraubten Kryovials) /aufgetauten Ovarialkortex auf immunfärbtem Serienschnitten bewertet werden.
Fragmente werden nach 7 oder 14 Tagen organotypischer Kultur fixiert.
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36 Monate
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Apoptose nach organotypischer Kultur
Zeitfenster: 36 Monate
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Der Prozentsatz der apoptotischen (Oozyten- oder Granulosazellen positive gespaltene Caspase 3) in frisch und gefrorener (mit thermoserhaltigen oder verschraubten Kryovials) /aufgetauten Ovarialkortex wird an immunfärbtem Serienschnitten bewertet.
Fragmente werden nach 7 oder 14 Tagen organotypischer Kultur fixiert.
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36 Monate
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AMH -Sekretion nach organotypischer Kultur
Zeitfenster: 36 Monate
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Die AMH -Werte werden in Kulturmedium während der organotypischen Kultur von frisch und gefrorenem (mit thermoseraten oder verschraubten Kryovien) /aufgetauten Ovarialkortex quantifiziert.
Kulturmedien werden alle drei Tage der Kultur 14 Tage lang geerntet.
AMH wird durch Elektrochemilumineszenz quantifiziert
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36 Monate
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Östrogensekretion nach organotypischer Kultur
Zeitfenster: 36 Monate
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Die Östrogenspiegel werden in Kulturmedium während der organotypischen Kultur von frisch und gefrorenem (mit thermoseraten oder verschraubten Kryovien) /aufgetauten Ovarialkortex quantifiziert.
Kulturmedien werden alle drei Tage der Kultur 14 Tage lang geerntet.
Östrogen wird durch Elektrochemilumineszenz quantifiziert
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36 Monate
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Mitarbeiter und Ermittler
Hier finden Sie Personen und Organisationen, die an dieser Studie beteiligt sind.
Ermittler
- Hauptermittler: Florence BRUGNON, MD, PhD, University Hospital, Clermont-Ferrand
Studienaufzeichnungsdaten
Diese Daten verfolgen den Fortschritt der Übermittlung von Studienaufzeichnungen und zusammenfassenden Ergebnissen an ClinicalTrials.gov. Studienaufzeichnungen und gemeldete Ergebnisse werden von der National Library of Medicine (NLM) überprüft, um sicherzustellen, dass sie bestimmten Qualitätskontrollstandards entsprechen, bevor sie auf der öffentlichen Website veröffentlicht werden.
Haupttermine studieren
Studienbeginn (Tatsächlich)
5. Mai 2022
Primärer Abschluss (Tatsächlich)
1. Juni 2025
Studienabschluss (Geschätzt)
31. Dezember 2025
Studienanmeldedaten
Zuerst eingereicht
5. Dezember 2024
Zuerst eingereicht, das die QC-Kriterien erfüllt hat
5. Dezember 2024
Zuerst gepostet (Tatsächlich)
9. Dezember 2024
Studienaufzeichnungsaktualisierungen
Letztes Update gepostet (Tatsächlich)
29. Juni 2025
Letztes eingereichtes Update, das die QC-Kriterien erfüllt
25. Juni 2025
Zuletzt verifiziert
1. Juni 2025
Mehr Informationen
Begriffe im Zusammenhang mit dieser Studie
Schlüsselwörter
Zusätzliche relevante MeSH-Bedingungen
Andere Studien-ID-Nummern
- 2022_Brugnon_FERTIOVO
Arzneimittel- und Geräteinformationen, Studienunterlagen
Studiert ein von der US-amerikanischen FDA reguliertes Arzneimittelprodukt
Nein
Studiert ein von der US-amerikanischen FDA reguliertes Geräteprodukt
Nein
Produkt, das in den USA hergestellt und aus den USA exportiert wird
Nein
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