Preservação da fertilidade feminina: avaliação de métodos inovadores para criopreservação de tecido ovariano (FERTIOVO)
25 de junho de 2025 atualizado por: University Hospital, Clermont-Ferrand
As recentes inovações no diagnóstico e terapia do câncer melhoraram a sobrevida dos pacientes em cinco anos. Contudo, os tratamentos anticancerígenos podem prejudicar a fertilidade dos pacientes; portanto, a preservação da fertilidade é recomendada antes do início da terapia. O único método para preservar a fertilidade de meninas pré-púberes, que também pode ser usado para mulheres púberes, é a criopreservação de tecido ovariano (OTC) com posterior autotransplante. Embora 200 nascimentos tenham sido relatados em todo o mundo após OTC e transplante, são necessárias melhorias significativas. Na verdade, os protocolos de congelamento e descongelamento variam de acordo com os laboratórios (meios, crioprotetores, curva de congelamento, etc…) e os critérios de seleção não são justificados. Além disso, a maioria dos laboratórios utiliza dispositivos inseguros (por ex. criotubos com tampa de rosca) para OTC, expondo os tecidos ovarianos a riscos biológicos durante o armazenamento de amostras em tanques de nitrogênio. Para eliminar estes riscos, foram comercializados novos dispositivos de “alta segurança” (criotubos soldados). No entanto, embora a soldadura térmica possa alterar a qualidade do tecido, a funcionalidade do tecido ovariano humano congelado com estes dispositivos inovadores ainda não foi avaliada. Os objetivos do nosso estudo são i) otimizar os protocolos de congelamento e descongelamento para OTC humano de acordo com as propriedades termodinâmicas do meio de congelamento e o tipo de dispositivo (criotubo soldado ou parafusado) e ii) determinar se o tipo de criotubo influencia o qualidade do tecido ovariano humano.
Este projeto permitirá alcançar uma melhor compreensão do impacto do congelamento na funcionalidade do tecido ovariano, bem como a implementação de um protocolo ideal para OTC dentro do laboratório ART do hospital Clermont-Ferrand para otimizar o atendimento ao paciente.
Visão geral do estudo
Status
Ativo, não recrutando
Condições
Descrição detalhada
O objetivo deste projeto é determinar se o tipo de tubo criogênico (com tampa de rosca ou termosoldado) influencia a qualidade e funcionalidade do tecido ovariano após a criopreservação.
Primeiramente, será realizada uma caracterização das propriedades termodinâmicas do meio de congelamento utilizando um calorímetro diferencial de varredura (Diamond DSC, PerkinElmer) para otimizar os protocolos de congelamento e descongelamento.
Esta análise definirá parâmetros importantes como temperatura de cristalização (Tc), temperatura de final de fusão (Tm) e temperaturas de transição (Tg'1).
Uma vez otimizados os protocolos de congelamento e descongelamento, utilizaremos o córtex ovariano humano circundando cistos benignos, modelo previamente validado por nosso laboratório, para determinar se o tipo de criotubo influencia a qualidade do tecido ovariano humano.
Estas amostras corticais ovarianas geralmente destruídas em clínicas compartilham características semelhantes com o córtex ovariano normal.
O tecido ovariano será cortado em fragmentos de 1mm3 e dividido em três grupos: córtex ovariano fresco (grupo 1, controle), córtex ovariano criopreservado em tubos criogênicos termossoldados (grupo 2) ou em tampa de rosca (grupo 3).
Avaliaremos a qualidade do tecido ovariano imediatamente após a ressecção para o grupo 1 ou após o descongelamento para os grupos 2 e 3, analisando a densidade e morfologia folicular (coloração HES) e o equilíbrio de proliferação/apoptose (Imunohistoquímica (IHQ) para KI67 e caspase 3 clivada).
Para avaliar a funcionalidade do tecido ovariano após o descongelamento, fragmentos do córtex ovariano serão cultivados in vitro.
Analisaremos i) densidade, tipo e morfologia folicular (coloração HES), ii) o equilíbrio proliferação/apoptose (IHC para KI67 e caspase 3 clivada), iii) os níveis de expressão dos principais reguladores da foliculogênese (IHC para GDF-9) e iv) os níveis de hormônios associados à foliculogênese (AMH, estrogênio) secretados em meio de cultura.
Tipo de estudo
Observacional
Inscrição (Real)
30
Contactos e Locais
Esta seção fornece os detalhes de contato para aqueles que conduzem o estudo e informações sobre onde este estudo está sendo realizado.
Locais de estudo
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Clermont-Ferrand, França, 63100
- University Hospital
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Critérios de participação
Os pesquisadores procuram pessoas que se encaixem em uma determinada descrição, chamada de critérios de elegibilidade. Alguns exemplos desses critérios são a condição geral de saúde de uma pessoa ou tratamentos anteriores.
Critérios de elegibilidade
Idades elegíveis para estudo
- Adulto
Aceita Voluntários Saudáveis
Não
Método de amostragem
Amostra Não Probabilística
População do estudo
Mulher adulta agendada para ressecção benigna de cisto ovariano no Centro Hospitalar Universitário de Clermont-Ferrand.
Descrição
Critérios de inclusão:
- Mulher adulta agendada para ressecção benigna de cisto ovariano (cistos dermóides, funcionais, mucinosos ou serosos)
- Abaixo de 37 anos e acima de 18 anos
- Capaz de dar consentimento informado por escrito para participar do estudo de pesquisa
- Filiado ao serviço de assistência social
Critérios de exclusão:
- Mulheres acima de 37 anos e abaixo de 18 anos
- Síndrome dos ovários policísticos
- Reserva ovariana diminuída
- Endometriose grave
- Cistos malignos e endometriais
Plano de estudo
Esta seção fornece detalhes do plano de estudo, incluindo como o estudo é projetado e o que o estudo está medindo.
Como o estudo é projetado?
Detalhes do projeto
Coortes e Intervenções
Grupo / Coorte |
Intervenção / Tratamento |
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Fragmentos frescos de córtex ovariano
O córtex ovariano pericístico será cortado em fragmentos de 1mm3 e analisado diretamente no dia da coleta (D0) ou após cultura organotípica (D7 e D14).
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Fragmentos de córtex ovariano congelados em criotubos termossoldados.
O córtex ovariano pericístico será cortado em fragmentos de 1mm3, congelados em dispositivo de congelamento lento programável (Nano Digitcool, Cryo Bio System) em criotubos termossoldados e armazenados em nitrogênio líquido (-196°C).
Em seguida, os fragmentos serão descongelados antes de serem analisados no dia do descongelamento (D'0) e após 7 e 14 dias (D7 e D14) de cultura organotípica.
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Criopreservação de tecido ovariano humano: imediatamente após a ressecção do cisto, o córtex ovariano pericístico será cortado em fragmentos de 1mm3 e criopreservado em criotubos parafusados ou termo-soldados usando um dispositivo de congelamento lento programável (Nano Digitcool, Cryo Bio System).
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Fragmentos de córtex ovariano congelados em frascos criogênicos rosqueados.
O córtex ovariano pericístico será cortado em fragmentos de 1mm3, congelados em aparelho de congelamento lento programável (Nano Digitcool, Cryo Bio System) em criotubos rosqueados e armazenados em nitrogênio líquido (-196°C).
Em seguida os fragmentos serão descongelados antes de serem analisados no dia do descongelamento (D'0) e após 7 e 14 dias (D7 e D14) de cultura organotípica.
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Criopreservação de tecido ovariano humano: imediatamente após a ressecção do cisto, o córtex ovariano pericístico será cortado em fragmentos de 1mm3 e criopreservado em criotubos parafusados ou termo-soldados usando um dispositivo de congelamento lento programável (Nano Digitcool, Cryo Bio System).
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O que o estudo está medindo?
Medidas de resultados primários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
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Morfologia do folículo ovariano pós-descongelamento
Prazo: 24 meses
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A morfologia do folículo fresco versus congelado (com criotubos termosoldados ou parafusados)/córtex ovariano descongelado será avaliada em cortes seriados corados com hematoxilina-eosina-açafrão. Os fragmentos serão fixados no dia da coleta para o grupo 1 e logo após o descongelamento para os grupos 2 e 3. A morfologia dos folículos será avaliada de acordo com os parâmetros descritos por Keros et al.
Hum Reprod.
2009.
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24 meses
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Medidas de resultados secundários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
|---|---|---|
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Densidade do folículo ovariano pós-descongelamento
Prazo: 24 meses
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A densidade folicular (= número de folículo/mm2) de córtex ovariano fresco versus congelado (com criotubos termosoldados ou parafusados)/descongelado será avaliada em cortes seriados corados com hematoxilina-eosina-açafrão. Os fragmentos serão fixados no dia da coleta para o grupo 1 e logo após o descongelamento para os grupos 2 e 3.
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24 meses
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Estágio do folículo ovariano após cultura organotípica
Prazo: 36 meses
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Estágios foliculares (% de folículos primordiais, primários, secundários e antrais) em frescos versus congelados (com criotubos termosoldados ou parafusados)/córtex ovariano descongelado serão avaliados em cortes seriados corados com hematoxilina-eosina-açafrão. Os fragmentos serão fixados após 7 ou 14 dias de cultura organotípica.
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36 meses
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Morfologia do folículo ovariano após cultura organotípica
Prazo: 36 meses
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A morfologia do folículo fresco versus congelado (com criotubos termosoldados ou parafusados)/córtex ovariano descongelado será avaliada em cortes seriados corados com hematoxilina-eosina-açafrão. Os fragmentos serão fixados após 7 ou 14 dias de cultura organotípica.
A morfologia dos folículos será avaliada de acordo com os parâmetros descritos por Keros et al.
Hum Reprod.
2009.
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36 meses
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Expressão de GDF-9 após cultura organotípica
Prazo: 36 meses
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a porcentagem de folículos positivos para GDF9 (ou seja, com um oócito positivo para GDF-9) em córtex ovariano fresco e congelado (com criotubos termosoldados ou parafusados) /descongelado será avaliada em seções seriadas imunocoradas.
Os fragmentos serão fixados após 7 ou 14 dias de cultura organotípica.
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36 meses
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Propriedades termodinâmicas do meio de congelamento
Prazo: 12 meses
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Um calorímetro diferencial de varredura (DiamondDSC, PerkinElmer) será utilizado para determinar a temperatura de cristalização (Tc), temperatura de final de fusão (Tm) e temperatura de transição (Tg'1) do meio de congelamento (Leibovitz com 4 mg/mL HSA, DMSO 1,5M e sacarose 0,1M).
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12 meses
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Proliferação do folículo ovariano pós-incrustantes
Prazo: 24 meses
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A porcentagem de células proliferativas (oócitos ou granulosa positivas para Ki-67 em córtex ovariano fresco e congelado (com crioviais termo soldados ou parafusados) será avaliado em seções seriais imunocorreradas.
Os fragmentos serão fixados no dia da coleta para o grupo 1 e diretamente após o degelo para os grupos 2 e 3.
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24 meses
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Apoptose do folículo ovariano pós-descida
Prazo: 24 meses
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A porcentagem de células apoptóticas (oócitos ou células da granulosa positiva da caspase 3) em caspase fresca e congelada (com córtex ovariano de soldado ou parafuso termo soldado ou parafusado) será avaliado em seções seriais imunocoridas.
Os fragmentos serão fixados no dia da coleta para o grupo 1 e diretamente após o degelo para os grupos 2 e 3.
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24 meses
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Proliferação após cultura organotípica
Prazo: 36 meses
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A porcentagem de células proliferativas (oócitos ou granulosa positivas para Ki-67) em córtex ovariano fresco e congelado (com crioviais termo soldados ou parafusados) será avaliado em seções seriais imunocoridas.
Os fragmentos serão fixados após 7 ou 14 dias de cultura organotípica.
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36 meses
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Apoptose após cultura organotípica
Prazo: 36 meses
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A porcentagem de células apoptóticas (oócitos ou células da granulosa positiva da caspase 3) em caspase fresca e congelada (com córtex ovariano de soldado ou parafuso termo soldado ou parafusado) será avaliado em seções seriais imunocoridas.
Os fragmentos serão fixados após 7 ou 14 dias de cultura organotípica.
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36 meses
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Secreção de AMH após cultura organotípica
Prazo: 36 meses
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Os níveis de AMH serão quantificados em meio de cultura durante a cultura organotípica de córtex ovariano fresco e congelado (com crioviais termo soldados ou parafusados) /descongelados.
A mídia de cultura será colhida a cada três dias de cultura por 14 dias.
AMH será quantificada por eletroquimiluminescência
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36 meses
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Secreção de estrogênio após cultura organotípica
Prazo: 36 meses
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Os níveis de estrogênio serão quantificados em meio de cultura durante a cultura organotípica de córtex ovariano fresco e congelado (com crioviais termo soldados ou parafusados) /descongelados.
A mídia de cultura será colhida a cada três dias de cultura por 14 dias.
O estrogênio será quantificado por eletroquimiluminescência
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36 meses
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Colaboradores e Investigadores
É aqui que você encontrará pessoas e organizações envolvidas com este estudo.
Patrocinador
Investigadores
- Investigador principal: Florence BRUGNON, MD, PhD, University Hospital, Clermont-Ferrand
Datas de registro do estudo
Essas datas acompanham o progresso do registro do estudo e os envios de resumo dos resultados para ClinicalTrials.gov. Os registros do estudo e os resultados relatados são revisados pela National Library of Medicine (NLM) para garantir que atendam aos padrões específicos de controle de qualidade antes de serem publicados no site público.
Datas Principais do Estudo
Início do estudo (Real)
5 de maio de 2022
Conclusão Primária (Real)
1 de junho de 2025
Conclusão do estudo (Estimado)
31 de dezembro de 2025
Datas de inscrição no estudo
Enviado pela primeira vez
5 de dezembro de 2024
Enviado pela primeira vez que atendeu aos critérios de CQ
5 de dezembro de 2024
Primeira postagem (Real)
9 de dezembro de 2024
Atualizações de registro de estudo
Última Atualização Postada (Real)
29 de junho de 2025
Última atualização enviada que atendeu aos critérios de controle de qualidade
25 de junho de 2025
Última verificação
1 de junho de 2025
Mais Informações
Termos relacionados a este estudo
Palavras-chave
Termos MeSH relevantes adicionais
Outros números de identificação do estudo
- 2022_Brugnon_FERTIOVO
Informações sobre medicamentos e dispositivos, documentos de estudo
Estuda um medicamento regulamentado pela FDA dos EUA
Não
Estuda um produto de dispositivo regulamentado pela FDA dos EUA
Não
produto fabricado e exportado dos EUA
Não
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