Preservación de la fertilidad de las mujeres: evaluación de métodos innovadores para la criopreservación del tejido ovárico (FERTIOVO)
25 de junio de 2025 actualizado por: University Hospital, Clermont-Ferrand
Las recientes innovaciones en el diagnóstico y la terapia del cáncer han mejorado la supervivencia a cinco años de los pacientes. Sin embargo, los tratamientos contra el cáncer pueden afectar la fertilidad del paciente; por lo tanto, se recomienda preservar la fertilidad antes de iniciar el tratamiento. El único método para preservar la fertilidad de las jóvenes prepúberes, que también puede utilizarse para las mujeres púberes, es la criopreservación del tejido ovárico (OTC) con un posterior autotrasplante. Aunque se han notificado 200 nacimientos en todo el mundo después de medicamentos sin receta y trasplantes, se requieren mejoras significativas. De hecho, los protocolos de congelación y descongelación varían según los laboratorios (medios, crioprotectores, curva de congelación, etc.) y los criterios de selección no están justificados. Además, la mayoría de los laboratorios utilizan dispositivos inseguros (p. ej. crioviales con tapa de rosca) para venta libre, que exponen los tejidos ováricos a peligros biológicos durante el almacenamiento de muestras en tanques de nitrógeno. Para eliminar estos riesgos, se han comercializado novedosos dispositivos de "alta seguridad" (criotubos soldados). Sin embargo, si bien la soldadura térmica podría alterar la calidad del tejido, aún no se ha evaluado la funcionalidad del tejido de ovario humano congelado con estos dispositivos innovadores. Los objetivos de nuestro estudio son i) optimizar los protocolos de congelación y descongelación para OTC humanos según las propiedades termodinámicas del medio de congelación y el tipo de dispositivo (criotubo soldado o atornillado) y ii) determinar si el tipo de criotubo influye en la Calidad del tejido ovárico humano.
Este proyecto permitirá alcanzar una mejor comprensión del impacto de la congelación en la funcionalidad del tejido ovárico, así como la implementación de un protocolo óptimo para OTC dentro del laboratorio de ART del hospital de Clermont-Ferrand para optimizar la atención al paciente.
Descripción general del estudio
Estado
Activo, no reclutando
Condiciones
Intervención / Tratamiento
Descripción detallada
El objetivo de este proyecto es determinar si el tipo de tubo criogénico (con tapón de rosca o termosoldado) influye en la calidad y funcionalidad del tejido ovárico tras la criopreservación.
En primer lugar, se llevará a cabo una caracterización de las propiedades termodinámicas del medio de congelación utilizando un calorímetro diferencial de barrido (Diamond DSC, PerkinElmer) para optimizar los protocolos de congelación y descongelación.
Este análisis definirá parámetros importantes como la temperatura de cristalización (Tc), la temperatura de fin de fusión (Tm) y las temperaturas de transición (Tg'1).
Una vez optimizados los protocolos de congelación y descongelación, utilizaremos la corteza ovárica humana que rodea los quistes benignos, un modelo previamente validado por nuestro laboratorio, para determinar si el tipo de criotubo influye en la calidad del tejido ovárico humano.
Estas muestras de corteza ovárica que normalmente se destruyen en las clínicas comparten características similares con la corteza ovárica normal.
El tejido ovárico se cortará en fragmentos de 1 mm3 y se dividirá en tres grupos: corteza ovárica fresca (grupo 1, control), corteza ovárica criopreservada en tubos criogénicos termosoldados (grupo 2) o en tapón de rosca (grupo 3).
Evaluaremos la calidad del tejido ovárico inmediatamente después de la resección para el grupo 1 o después de la descongelación para los grupos 2 y 3 mediante el análisis de la densidad y morfología del folículo (tinción con HES) y el equilibrio entre proliferación y apoptosis (inmunohistoquímica (IHC) para KI67 y caspasa 3 escindida).
Para evaluar la funcionalidad del tejido ovárico después de la descongelación, se cultivarán in vitro fragmentos de corteza ovárica.
Analizaremos i) la densidad, el tipo y la morfología del folículo (tinción con HES), ii) el equilibrio proliferación/apoptosis (IHC para KI67 y caspasa 3 escindida), iii) los niveles de expresión de los principales reguladores de la foliculogénesis (IHC para GDF-9) y iv) los niveles de hormonas asociadas a la foliculogénesis (AMH, estrógeno) secretadas en el medio de cultivo.
Tipo de estudio
De observación
Inscripción (Actual)
30
Contactos y Ubicaciones
Esta sección proporciona los datos de contacto de quienes realizan el estudio e información sobre dónde se lleva a cabo este estudio.
Ubicaciones de estudio
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Clermont-Ferrand, Francia, 63100
- University Hospital
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Criterios de participación
Los investigadores buscan personas que se ajusten a una determinada descripción, denominada criterio de elegibilidad. Algunos ejemplos de estos criterios son el estado de salud general de una persona o tratamientos previos.
Criterio de elegibilidad
Edades elegibles para estudiar
- Adulto
Acepta Voluntarios Saludables
No
Método de muestreo
Muestra no probabilística
Población de estudio
Mujer adulta programada para resección de quiste ovárico benigno en el Centro Hospitalario Universitario de Clermont-Ferrand.
Descripción
Criterios de inclusión:
- Mujer adulta programada para resección de quiste ovárico benigno (quistes dermoides, funcionales, mucinosos o serosos)
- Menores de 37 años y mayores de 18 años
- Capaz de dar consentimiento informado por escrito para participar en el estudio de investigación.
- Afiliado al servicio de bienestar social
Criterios de exclusión:
- Mujeres mayores de 37 años y menores de 18 años
- Síndrome de ovario poliquístico
- Reserva ovárica disminuida
- endometriosis severa
- Quistes malignos y endometriales.
Plan de estudios
Esta sección proporciona detalles del plan de estudio, incluido cómo está diseñado el estudio y qué mide el estudio.
¿Cómo está diseñado el estudio?
Detalles de diseño
Cohortes e Intervenciones
Grupo / Cohorte |
Intervención / Tratamiento |
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Fragmentos frescos de corteza ovárica
La corteza ovárica periquística se cortará en fragmentos de 1 mm3 y se analizará directamente el día de la recolección (D0) o después del cultivo organotípico (D7 y D14).
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Fragmentos de corteza ovárica congelados en crioviales termosoldados.
La corteza ovárica periquística se cortará en fragmentos de 1 mm3, se congelará utilizando un dispositivo de congelación lento y programable (Nano Digitcool, Cryo Bio System) en crioviales termosoldados y se almacenará en nitrógeno líquido (-196 °C).
Luego, los fragmentos se descongelarán antes de ser analizados el día de la descongelación (D'0) y después de 7 y 14 días (D7 y D14) de cultivo organotípico.
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Criopreservación de tejido de ovario humano: inmediatamente después de la resección del quiste, la corteza ovárica periquística se cortará en fragmentos de 1 mm3 y se criopreservará en crioviales atornillados o termosoldados utilizando un dispositivo de congelación lento programable (Nano Digitcool, Cryo Bio System).
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Fragmentos de corteza ovárica congelados en crioviales atornillados.
La corteza ovárica periquística se cortará en fragmentos de 1 mm3, se congelará utilizando un dispositivo de congelación programable lento (Nano Digitcool, Cryo Bio System) en crioviales atornillados y se almacenará en nitrógeno líquido (-196 °C).
Luego los fragmentos se descongelarán antes de ser analizados el día de la descongelación (D'0) y después de 7 y 14 días (D7 y D14) de cultivo organotípico.
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Criopreservación de tejido de ovario humano: inmediatamente después de la resección del quiste, la corteza ovárica periquística se cortará en fragmentos de 1 mm3 y se criopreservará en crioviales atornillados o termosoldados utilizando un dispositivo de congelación lento programable (Nano Digitcool, Cryo Bio System).
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¿Qué mide el estudio?
Medidas de resultado primarias
Medida de resultado |
Medida Descripción |
Periodo de tiempo |
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Morfología del folículo ovárico post-descongelación
Periodo de tiempo: 24 meses
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La morfología del folículo de la corteza ovárica fresca versus congelada (con crioviales termosoldados o atornillados) / descongelada se evaluará en secciones seriadas teñidas con hematoxilina-eosina-azafrán. Los fragmentos se fijarán el día de la recolección para el grupo 1 y directamente después de la descongelación para los grupos 2 y 3. La morfología de los folículos se evaluará según los parámetros descritos por Keros et al.
Hum Reproducción.
2009.
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24 meses
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Medidas de resultado secundarias
Medida de resultado |
Medida Descripción |
Periodo de tiempo |
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Densidad de folículos ováricos post-descongelación
Periodo de tiempo: 24 meses
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La densidad de folículos (= número de folículos/mm2) de corteza ovárica fresca versus congelada (con crioviales termosoldados o atornillados)/descongelada se evaluará en secciones seriadas teñidas con hematoxilina-eosina-azafrán. Los fragmentos se fijarán el día de la recogida para el grupo 1 y directamente después de la descongelación para los grupos 2 y 3.
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24 meses
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Etapa del folículo ovárico después del cultivo organotípico.
Periodo de tiempo: 36 meses
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Los estadios de los folículos (% de folículos primordiales, primarios, secundarios y antrales) en corteza ovárica fresca versus congelada (con crioviales termosoldados o atornillados)/descongelada se evaluarán en secciones seriadas teñidas con hematoxilina-eosina-azafrán. Los fragmentos se fijarán tras 7 o 14 días de cultivo organotípico.
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36 meses
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Morfología del folículo ovárico después del cultivo organotípico.
Periodo de tiempo: 36 meses
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La morfología del folículo de la corteza ovárica fresca versus congelada (con crioviales termosoldados o atornillados) / descongelada se evaluará en secciones seriadas teñidas con hematoxilina-eosina-azafrán. Los fragmentos se fijarán tras 7 o 14 días de cultivo organotípico.
La morfología de los folículos se evaluará según los parámetros descritos por Keros et al.
Hum Reproducción.
2009.
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36 meses
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Expresión de GDF-9 después de cultivo organotípico.
Periodo de tiempo: 36 meses
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el porcentaje de folículos positivos para GDF9 (es decir, con un ovocito positivo para GDF-9) en corteza ovárica fresca y congelada (con crioviales termosoldados o atornillados) / descongelada se evaluará en secciones seriadas inmunoteñidas.
Los fragmentos se fijarán tras 7 o 14 días de cultivo organotípico.
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36 meses
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Propiedades termodinámicas del medio de congelación.
Periodo de tiempo: 12 meses
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Se utilizará un calorímetro diferencial de barrido (DiamondDSC, PerkinElmer) para determinar la temperatura de cristalización (Tc), temperatura de fin de fusión (Tm) y temperatura de transición (Tg'1) del medio de congelación (Leibovitz con 4 mg/mL). HSA, DMSO 1,5 M y sacarosa 0,1 M).
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12 meses
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Proliferación de folículos ováricos posteriores a descongelación
Periodo de tiempo: 24 meses
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El porcentaje de proliferativo (células de ovocitos o granulosa positivos para Ki-67 en la corteza de ovario fresco y congelado (con cryoviales termosoldados o atornillados) /corteza de ovario descongelada se evaluará en secciones seriales inmunotinadas.
Los fragmentos se fijarán el día de la recolección para el Grupo 1 y directamente después de descongelar los grupos 2 y 3.
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24 meses
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Apoptosis folículo ovárica posterior a descongelado
Periodo de tiempo: 24 meses
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El porcentaje de caspasa 3 escindida positiva en apoptótica (ovocitos o glanulosa Caspasa 3) en la corteza de ovario fresco y congelado (con cryoviales termooleados o atornillados) /corteza de ovario descongelada en secciones seriales inmunotineas.
Los fragmentos se fijarán el día de la recolección para el Grupo 1 y directamente después de descongelar los grupos 2 y 3.
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24 meses
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Proliferación después del cultivo organotípico
Periodo de tiempo: 36 meses
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El porcentaje de proliferativo (células de ovocitos o granulosa positivos para Ki-67) en la corteza de ovario fresca y congelada (con cryovials termosoldados o atornillados) /corteza de ovario descongelada se evaluará en secciones seriales inmunotinadas.
Los fragmentos se solucionarán después de 7 o 14 días de cultura organotípica.
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36 meses
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Apoptosis después del cultivo orgánico
Periodo de tiempo: 36 meses
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El porcentaje de caspasa 3 escindida positiva en apoptótica (ovocitos o glanulosa Caspasa 3) en la corteza de ovario fresco y congelado (con cryoviales termooleados o atornillados) /corteza de ovario descongelada en secciones seriales inmunotineas.
Los fragmentos se solucionarán después de 7 o 14 días de cultura organotípica.
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36 meses
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Secreción de AMH después de la cultura organotípica
Periodo de tiempo: 36 meses
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Los niveles de AMH se cuantificarán en medio de cultivo durante el cultivo organotípico de fresco y congelado (con crioviales termooleados o atornillados) /corteza ovárica descongelada.
Los medios de cultura se cosecharán cada tres días de cultura durante 14 días.
AMH se cuantificará por electroquímiluminiscencia
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36 meses
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Secreción de estrógenos después del cultivo organotípico
Periodo de tiempo: 36 meses
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Los niveles de estrógeno se cuantificarán en medio de cultivo durante el cultivo organotípico de fresco y congelado (con crioviales termooleados o atornillados) /corteza ovárica descongelada.
Los medios de cultura se cosecharán cada tres días de cultura durante 14 días.
El estrógeno se cuantificará por electroquímiluminiscencia
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36 meses
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Colaboradores e Investigadores
Aquí es donde encontrará personas y organizaciones involucradas en este estudio.
Patrocinador
Investigadores
- Investigador principal: Florence BRUGNON, MD, PhD, University Hospital, Clermont-Ferrand
Fechas de registro del estudio
Estas fechas rastrean el progreso del registro del estudio y los envíos de resultados resumidos a ClinicalTrials.gov. Los registros del estudio y los resultados informados son revisados por la Biblioteca Nacional de Medicina (NLM) para asegurarse de que cumplan con los estándares de control de calidad específicos antes de publicarlos en el sitio web público.
Fechas importantes del estudio
Inicio del estudio (Actual)
5 de mayo de 2022
Finalización primaria (Actual)
1 de junio de 2025
Finalización del estudio (Estimado)
31 de diciembre de 2025
Fechas de registro del estudio
Enviado por primera vez
5 de diciembre de 2024
Primero enviado que cumplió con los criterios de control de calidad
5 de diciembre de 2024
Publicado por primera vez (Actual)
9 de diciembre de 2024
Actualizaciones de registros de estudio
Última actualización publicada (Actual)
29 de junio de 2025
Última actualización enviada que cumplió con los criterios de control de calidad
25 de junio de 2025
Última verificación
1 de junio de 2025
Más información
Términos relacionados con este estudio
Palabras clave
Términos MeSH relevantes adicionales
Otros números de identificación del estudio
- 2022_Brugnon_FERTIOVO
Información sobre medicamentos y dispositivos, documentos del estudio
Estudia un producto farmacéutico regulado por la FDA de EE. UU.
No
Estudia un producto de dispositivo regulado por la FDA de EE. UU.
No
producto fabricado y exportado desde los EE. UU.
No
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