성숙한 조혈 계통에서 원시 조혈 세포로의 레트로바이러스 벡터 매개 유전자 전달 및 벡터 매개 도입유전자 발현을 연구하기 위해 일반 지원자로부터 얻은 말초 혈액 줄기 세포
연구 개요
상태
정황
상세 설명
말초 혈액은 종양, 혈액 및 유전 질환 환자의 조혈 재구성을 위한 골수 대체 공급원을 제공하는 조혈 줄기 세포의 공급원으로 확립되었습니다. 성분채집술은 많은 수의 CD34+(초기 조혈 전구체의 표지자) 세포를 수집하기 위한 골수 수확보다 덜 효율적이지만, 성분채집술은 외상이 적고 마취가 필요하지 않으며 골수 수확보다 더 자주 수행할 수 있습니다. 이 전임상 연구 프로젝트의 목적은 말초혈액으로 동원된 조혈모세포를 레트로바이러스 매개 유전자 치료의 표적으로 사용하는 것을 조사하고 원시 세포의 도입 효율을 렌티바이러스 및 포미 바이러스 벡터 시스템과 비교하고 평가하는 것입니다. 조혈 성장 인자(사이토카인)를 사용하여 체외에서 줄기 세포를 확장하는 능력. 이 연구의 연구 참여자는 건강한 성인 지원자가 될 것입니다.
성장 인자인 Granulocyte-Colony Stimulating Factor(G-CSF)는 골수에서 순환계로 증가된 수의 원시 조혈 세포를 동원하기 위해 성분채집 전 4일 동안 주어질 것입니다. 유핵 혈액 세포는 성분채집술에 의해 수집되고 항체 기반 기술을 사용하여 분리된 CD34+-풍부 세포 집단입니다.
G-CSF의 투여는 정상 지원자로부터 충분한 수의 원시 줄기 및 전구 세포를 수집할 수 있도록 하는 데 필수적입니다. 이 연구에서 사용되는 용량에서, G-CSF 투여 4일 동안 말초 혈액에서 CD34+ 세포 농도의 15-35배 증가가 발생하여 평균 약 1-2 1-2x108개의 정제된 CD34+ 세포를 회수할 수 있는 x1010 유핵 세포. 이 숫자는 체외 배양, 벡터 입자를 사용한 형질도입 및 면역결핍 마우스 모델에서 형질도입된 세포의 분석을 포함하는 실험 설계를 허용하기에 충분합니다.
줄기세포와 전구세포 동원을 위한 G-CSF의 사용은 안전하고 효과적인 것으로 입증된 자가 및 동종 이식 모두에 널리 사용되는 임상 기술입니다. 뼈 및 근육통, 두통 및 피로는 일반적으로 아세트아미노펜으로 관리되는 가장 흔한 합병증이며 드물게 G-CSF 중단이 필요합니다. 알칼리성 포스파타아제 및 LDH의 일시적인 상승이 일반적입니다. 후속 연구에서 G-CSF 투여 및 성분 채혈 후 장기간의 경미한 호중구감소증, 림프구감소증 및 혈소판감소증이 나타났습니다. 비침습적 측정으로 비장 확대가 나타났으며 정상인의 비장 파열 사례 4건이 설명되었습니다. 98%에서 96%로 O2 포화도 감소와 관련된 동맥 pO2 감소가 보고되었습니다. 일시적인 혈전성향증은 혈액 응고 매개변수의 변화를 기반으로 추론되었습니다.
염증성 또는 감염성 병변의 발달을 포함하는 다른 드문 합병증이 보고되었습니다. 헤모글로빈 SC 질환이 있는 동종 이식을 위한 형제 기증자에게 치명적인 위기가 발생했습니다. 이러한 드문 합병증은 G-CSF 투여 후 정상 개인의 원시 조혈 세포를 회수하기 위한 성분채집술이 10년 이상 모든 주요 이식 센터에서 활용되어 왔으며 일반적으로 안전하고 심각한 합병증이 없다는 맥락에서 다루어야 합니다. 우리는 연구 참가자의 연령 범위를 18-40세로 제한하고 염증성 질환, 심혈관 질환, 혈전증 또는 폐색전증, 염증성 피부 질환, 혈액 질환 또는 혈색소 병증의 병력이 있는 사람을 제외함으로써 심각한 합병증의 위험을 최소화할 것을 제안합니다.
다양한 사이토카인 조합 및 배양 조건을 사용하여 시험관 내에서 동원된 CD34+ 세포를 확장하는 능력은 유세포 분석법, 시험관 내 콜로니 분석법을 사용하고 면역결핍 마우스에서 조혈을 확립할 수 있는 세포의 농도를 정량화하여 검사할 것입니다. 확장되지 않은 CD34+ 세포와 확장된 CD34+ 세포는 모두 레트로바이러스 매개 유전자 전달을 위한 표적으로서의 적합성을 조사하기 위해 고안된 실험에 사용될 것입니다. 유전자 전달 효율 및 전달된 서열의 기능적 발현은 CD34+ 세포의 분화된 자손에서 평가될 것이다.
우리는 원시 인간 조혈 세포로의 유전자 전달의 상대적 효율성과 관련하여 렌티바이러스 및 포미 바이러스 벡터 시스템을 비교할 계획입니다. 섬유아세포 성장 인자-1 및 Wnt 3A와 같은 원시 뮤린 조혈 세포의 확장을 유발하는 것으로 보고된 다양한 물질도 배양에서 원시 인간 조혈 세포의 영향에 대해 평가됩니다. 또 다른 초점은 분화하는 적혈구계 세포에서 글로빈 유전자 발현의 상대적인 수준과 관련하여 다양한 글로빈 유전자 벡터를 비교하는 것입니다. 마지막으로, 원시 조혈 세포의 생존력 및 생착 가능성에 대한 동결 보존의 영향을 평가할 것이다. 이 연구 제안은 유전 질환, 특히 재증식 줄기 세포로 유전자 전달을 기반으로 하는 헤모글로빈 장애에 대한 치료 전략 개발에 도움이 될 전임상 데이터를 제공할 것입니다.
연구 유형
등록 (실제)
연락처 및 위치
연구 장소
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Tennessee
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Memphis, Tennessee, 미국, 38105
- St. Jude Children's Research Hospital
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참여기준
자격 기준
공부할 수 있는 나이
건강한 자원 봉사자를 받아들입니다
연구 대상 성별
샘플링 방법
연구 인구
설명
포함 기준:
- 연령은 18세 이상 40세 이하입니다.
- SJCRH Blood Donor Center 표준 운영 절차에 따라 자가 헌혈자에 대한 기증 기준을 충족합니다.
- 헌혈자 센터 간호 직원, 의사 직원 또는 의사 조사관의 판단에 따라 검사 시 성분 채혈을 위한 적절한 정맥 접근.
제외 기준:
- 암컷 - 수유.
- 아스피린 또는 비스테로이드성 항염증제와 같이 혈소판 기능에 악영향을 미치는 것으로 의사의 판단에 따라 전신 약물의 동시 사용.
다음 진단 중 하나(이전 또는 현재):
- 폐 질환.
- 염증성 장애.
- 관상동맥 질환.
- 뇌졸중(뇌혈관 사고).
- 고혈압.
- 심장 부정맥.
- 정맥 혈전증.
- 폐색전증
- 혈액 질환.
- 습진 또는 건선.
추가 자격 기준(정보에 입각한 동의서 서명 후 획득)
- 체질량 지수가 30kg/m2 미만입니다.
- 간비대나 비장비대가 없습니다.
- 12.5g/dL 이상의 헤모글로빈.
- 혈소판 수는 150,000/mm3 이상입니다.
- 총 WBC > 4200/ul 및 호중구 수 >1800/ul.
- 암컷 - 임신하지 않음(음성 혈청 또는 소변, 정보에 입각한 동의서 서명 후 획득).
공부 계획
연구는 어떻게 설계됩니까?
디자인 세부사항
코호트 및 개입
그룹/코호트 |
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면역결핍 마우스
전체 정보는 연구 설명을 참조하십시오.
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연구는 무엇을 측정합니까?
주요 결과 측정
결과 측정 |
기간 |
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사이토카인 투여에 의해 말초 혈액으로 동원된 원시 조혈 세포를 형질도입하는 렌티바이러스 및 거품형 바이러스 벡터의 상대적 효율을 비교하기 위함.
기간: 기증자 세포의 성분 채집 후 최대 3년.
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기증자 세포의 성분 채집 후 최대 3년.
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공동 작업자 및 조사자
수사관
- 수석 연구원: Arthur W Nienhuis, MD, St. Jude Children's Research Hospital
간행물 및 유용한 링크
연구 기록 날짜
연구 주요 날짜
연구 시작
기본 완료 (실제)
연구 완료 (실제)
연구 등록 날짜
최초 제출
QC 기준을 충족하는 최초 제출
처음 게시됨 (추정)
연구 기록 업데이트
마지막 업데이트 게시됨 (추정)
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마지막으로 확인됨
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