인간 자궁내막에서 분비되는 세포밖 소포체의 분리 및 특성 규명

지난 수십 년 동안 더 일반적으로 세포 외 소포로 간주되는 막으로 둘러싸인 구획의 방출은 복잡한 유기체의 세포 간, 단세포 유기체 간 또는 단세포 유기체와 숙주 간의 새로운 통신 메커니즘으로 확립되었습니다. 이러한 소포는 모든 체액에서 기술되었으며 현재 형성되는 메커니즘에 따라 세 가지 유형으로 분류됩니다. 크기가 30~150nm 범위인 엑소좀(세포 내에서 형성됨); 100~1000nm(세포막에서 형성됨)의 미세소포체와 크기가 1μm보다 큰 세포사멸체(프로그램된 세포 사멸을 겪고 있는 세포에 의해 생성됨).

자궁내막액은 자궁과 혈청 삼출물을 형성하는 다양한 세포 유형에서 기원하는 자궁강에 존재하는 점성 액체입니다. 그것은 배아가 이식되고 최소 침습 기술로 검색될 수 있는 상황에 대한 정확한 보기를 제공합니다.

이 파일럿 연구의 주요 목적은 자궁내막에서 자궁내막액으로 분비되는 세포외 소포를 분리하고 특성화하는 것이며, 이 사실이 설명된 것은 이번이 처음입니다. 일련의 차등 원심분리 및 여과를 기반으로 자궁내막액(즉, 세포사멸체, 미세소포 및 엑소솜) 내에 존재하는 다른 소포 집단의 분리를 위한 방법을 표준화하기 위한 것입니다. 분리된 소포의 형태학적 특성화는 세 가지 수준에서 수행됩니다: 투과 전자 현미경에 의한 외부 형태 연구, 웨스턴 블롯에 의한 상이한 소포 집단 표면 마커의 특성화 및 나노입자 추적 분석에 의한 소포 집단 크기 분포 분석.

연구의 두 번째 부분은 월경 주기 전반에 걸쳐 세포외 소포의 내용물을 평가하는 것입니다. 이를 위해 28~30일의 정식 월경 주기를 5단계로 분류했습니다. 즉, I기(0~8일), II기(9~14일), III기(15~18일), IV기( 19-24일) 및 단계 V(25-30). 소낭 내용물 설명을 위한 실험 설계는 다음과 같은 두 가지 수준의 비교로 구성됩니다. 주기의 각 단계에서 그리고 각 소포 집단에 대해 동일한 소포 집단. 소포 내용물의 이러한 특성화는 단백질, 지질 및 기타 작은 대사산물 구성을 분석하기 위해 질량 분석 기술을 사용하여 이루어질 것입니다. 그들의 존재는 주기의 순간과 자궁내막의 정상적인 생리적 기능 모두와 관련되는 것을 목표로 합니다. 한편, 대량 시퀀싱에 의한 이러한 소포 집단의 DNA 및 RNA 함량 분석이 수행될 것입니다. 여기서 목적은 월경 주기의 순간을 결정하기 위해 이러한 분자의 잠재적인 예측 유용성뿐만 아니라 표적 세포에 대한 기능의 전달을 분석하는 것입니다.