Ihmisen endometriumin erittämien solunulkoisten rakkuloiden eristäminen ja karakterisointi
Ihmisen kohdun limakalvon endometriumin nesteeseen erittämien solunulkoisten rakkuloiden eristäminen ja karakterisointi
Tutkimuksen yleiskatsaus
Tila
Ehdot
Interventio / Hoito
Yksityiskohtainen kuvaus
Viime vuosikymmeninä kalvosuljettujen osastojen emissio, joita yleisesti pidetään solunulkoisina rakkuloina, on vakiintunut uudeksi kommunikaatiomekanismiksi joko monimutkaisen organismin solujen välillä, yksisoluisten organismien välillä tai yksisoluisen organismin ja isännän välillä. Näitä rakkuloita on kuvattu kaikissa kehon nesteissä, ja ne luokitellaan tällä hetkellä kolmeen tyyppiin niiden muodostumismekanismin mukaan: eksosomit, joiden koko vaihtelee välillä 30 - 150 nm (muodostettu intrasellulaarisesti); mikrovesikkeleitä, 100 - 1000 nm (muodostettu solukalvosta) ja apoptoottisia kappaleita, joiden koko on suurempi kuin 1 um (jota tuottavat solut, jotka läpikäyvät ohjelmoidun solukuoleman).
Endometriumneste on kohdun ontelossa oleva viskoosi neste, joka on peräisin eri solutyypeistä, jotka muodostavat kohdun ja seerumin eritteet. Se tarjoaa tarkan kuvan kontekstista, jossa alkio istutetaan, ja se voidaan palauttaa minimaalisesti invasiivisella tekniikalla.
Tämän pilottitutkimuksen päätavoitteena on eristää ja karakterisoida solunulkoiset rakkulat, joita kohdun limakalvo erittää kohdun limakalvon nesteeseen. Tämä on ensimmäinen kerta, kun tämä tosiasia kuvataan. Sen tarkoituksena on standardoida menetelmä erilaisten kohdun limakalvon nesteessä olevien vesikkelipopulaatioiden (eli apoptoottisten kappaleiden, mikrovesikkelien ja eksosomien) eristämiseksi, joka perustuu sarjadifferentiaaliseen sentrifugointiin ja suodatukseen. Eristettyjen vesikkelien morfologinen karakterisointi tehdään kolmella tasolla: ulkoisen morfologian tutkimus transmissioelektronimikroskoopilla, eri vesikkelipopulaatioiden pintamarkkerien karakterisointi Western Blot -menetelmällä ja vesikkelipopulaatioiden kokojakaumien analysointi nanopartikkelien seurantaanalyysillä.
Tutkimuksen toinen osa on suunnattu arvioimaan ekstrasellulaaristen rakkuloiden sisältöä koko kuukautiskierron ajan. Tätä tarkoitusta varten kanoninen 28-30 päivän kuukautiskierto on luokiteltu viiteen vaiheeseen: vaihe I (päivät 0-8), vaihe II (päivät 9-14), vaihe III (päivät 15-18), vaihe IV ( päivät 19-24) ja vaihe V (25-30). Vesikkeleiden sisällön kuvauksen kokeellinen suunnittelu koostuu kahdesta vertailutasosta: (1) eri vesikkelipopulaatioiden erilaisten pitoisuuksien analyysi kuukautiskierron samassa vaiheessa ja kunkin vaiheen osalta ja (2) kuukautiskierron erilaisten pitoisuuksien analyysi. sama vesikkelipopulaatio syklin jokaisessa vaiheessa ja jokaisessa vesikulaaripopulaatiossa. Tämä rakkulasisällön karakterisointi tehdään käyttäen massaspektrometriatekniikoita proteiinien, lipidien ja muiden pienten metaboliittien koostumuksen analysoimiseksi. Niiden läsnäolo pyritään liittämään sekä kiertokulkuun että kohdun limakalvon normaaliin fysiologiseen toimintaan. Toisaalta näiden vesikulaaripopulaatioiden DNA- ja RNA-sisällöt analysoidaan massiivisella sekvensoinnilla. Tavoitteena on analysoida toiminnallisuuksien siirtymistä kohdesoluihin sekä näiden molekyylien mahdollista ennakoivaa käyttökelpoisuutta kuukautiskierron hetken määrittämiseksi.
Opintotyyppi
Ilmoittautuminen (Odotettu)
Yhteystiedot ja paikat
Opiskelupaikat
-
-
-
Valencia, Espanja, 46015
- Rekrytointi
- IVI Valencia
-
Ottaa yhteyttä:
- Carlos Simon, MD PhD
- Puhelinnumero: +34963050900
- Sähköposti: carlos.simon@ivi.es
-
-
Osallistumiskriteerit
Kelpoisuusvaatimukset
Opintokelpoiset iät
Hyväksyy terveitä vapaaehtoisia
Sukupuolet, jotka voivat opiskella
Näytteenottomenetelmä
Tutkimusväestö
Tämän tutkimuksen analyysi tehdään käyttämällä kohdun limakalvon nestenäytteitä, jotka on otettu terveiltä, hedelmällisiltä, normaalia pyöräilyä olevilta naisilta, jotka täyttävät sisällyttämis-/poissulkemiskriteerit.
Nämä potilaat rekrytoidaan yhteen kansalliseen keskukseen: IVI Valenciaan. Heidän rekrytointinsa suorittaa rutiininomaisen kliinisen käytännön aikana aiemmin mainitun keskuksen tutkimusryhmä.
Tutkimusryhmän tehtävänä on tarkistaa potilaiden lääkärinlausunnot ja ottaa yhteyttä niihin potilaisiin, jotka täyttävät valintakriteerit ja ovat halukkaita osallistumaan tutkimukseen.
Kuvaus
Sisällyttämiskriteerit:
- Terveet naiset luonnollisissa sykleissä.
- Ikä: 18-35 vuotta (molemmat mukana).
- Normaali karyotyyppi.
- Negatiiviset serologiset tulokset HIV:lle, HBV:lle, HBC:lle, RPR:lle.
- BMI: 18-30 kg/m2 (molemmat mukana).
- Säännöllinen kuukautiskierto (3-4/28-30 päivää).
Poissulkemiskriteerit:
- Potilaat, joilla oli ollut IUD-laite viimeisten 3 kuukauden aikana.
- Potilaat, jotka olivat käyttäneet hormonaalista ehkäisyä edellisten 2 kuukauden aikana.
- Adnexaaliset tai kohdun patologiat.
- Munasarjojen monirakkulaoireyhtymä.
- Potilaat, jotka kärsivät vakavista tai hallitsemattomista bakteeri-, sieni- tai virustartuntataudeista, jotka voivat mahdollisesti häiritä potilaan osallistumista tai tutkimuksen tuloksia (tutkijaryhmän päätutkijan arvioima).
- Mikä tahansa epävakaa sairaus tai lääketieteellinen tila, joka voi häiritä tutkimusta tai vaarantaa potilaan terveyden (tutkijaryhmän päätutkijan arvioima).
Opintosuunnitelma
Miten tutkimus on suunniteltu?
Suunnittelun yksityiskohdat
- Havaintomallit: Vain tapaus
- Aikanäkymät: Tulevaisuuden
Kohortit ja interventiot
Ryhmä/Kohortti |
Interventio / Hoito |
|---|---|
|
Potilaat Endometrium Neste
Endometriumnestenäytteet terveiltä ja hedelmällisiltä naisilta niiden luonnollisessa kierrossa, ikä vaihtelee 18-35 vuotta, normaali karyotyyppi, negatiivinen HIV-, HBV-, HCV- ja RPR-positiivisille, BMI 18-30 kg/m2 (molemmat mukana) ja säännöllinen kuukautiskierto (3-4/28-30 päivää). Tämä ainutlaatuinen tehtäväryhmä jaetaan viiteen alaryhmään, jotka huolehtivat kuukautiskierron hetkestä, johon potilas voidaan luokitella: vaihe I (päivät 0-8), vaihe II (päivät 9-14), vaihe III (päivät 15- 18), vaihe IV (päivät 19-24) ja vaihe V (päivät 25-30). |
Mitä tutkimuksessa mitataan?
Ensisijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
Solunulkoisten rakkuloiden morfologinen karakterisointi
Aikaikkuna: 3 kuukautta
|
Solunulkoisten rakkuloiden morfologian arviointi transmissioelektronimikroskoopilla joko ultraohuilla leikkauksilla ja positiivisella värjäyksellä tai kerrostumis- ja positiivisella värjäystekniikoilla. Tavoitteena on erottaa vesikkelipopulaatiot niiden ulkoisten näkökohtien ja koon perusteella. |
3 kuukautta
|
|
Ekstrasellulaaristen vesikkelien kokojakaumaprofiilien karakterisointi
Aikaikkuna: 45 päivää
|
Eri solunulkoisten vesikkelipopulaatioiden sisältämien vesikkeleiden kokojakauman analyysi käyttämällä kahta nanopartikkelien seurantaanalyysitekniikkaa: ZetaSizer Nano ja NanoSight300. Odotettu tulos on joukko kaavioita, joissa on vesikkeleiden kokoaluetiedot eri populaatioissa ja vesikkelipitoisuustiedot NanoSight300:aa käytettäessä. |
45 päivää
|
|
Ekstrasellulaaristen vesikkelipopulaatioiden karakterisointi spesifisillä markkereilla
Aikaikkuna: 45 päivää
|
Populaatiospesifisten markkerien analyysi Western blot -menetelmällä endometriumin nesterakkuloiden populaatioiden erottamiseksi edelleen. Tavoitteena on erottaa populaatiot näiden merkkiaineiden läsnäolon tai puuttumisen perusteella. |
45 päivää
|
Toissijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Aikaikkuna |
|---|---|
|
Kvalitatiiviset (nimet) ja kvantitatiiviset (ilmentymistasot) tiedot eri biomolekyyleistä, joita näytteissä voi olla: DNA, RNA, proteiinit, lipidit ja muut pienet aineenvaihduntatuotteet.
Aikaikkuna: kolme vuotta
|
kolme vuotta
|
Yhteistyökumppanit ja tutkijat
Sponsori
Tutkijat
- Päätutkija: Felipe Vilella, BSc PhD, Igenomix
Opintojen ennätyspäivät
Opi tärkeimmät päivämäärät
Opiskelun aloitus
Ensisijainen valmistuminen (Odotettu)
Opintojen valmistuminen (Odotettu)
Opintoihin ilmoittautumispäivät
Ensimmäinen lähetetty
Ensimmäinen toimitettu, joka täytti QC-kriteerit
Ensimmäinen Lähetetty (Arvio)
Tutkimustietojen päivitykset
Viimeisin päivitys julkaistu (Arvio)
Viimeisin lähetetty päivitys, joka täytti QC-kriteerit
Viimeksi vahvistettu
Lisää tietoa
Tähän tutkimukseen liittyvät termit
Avainsanat
Muita asiaankuuluvia MeSH-ehtoja
Muut tutkimustunnusnumerot
- 1603-IGX-017-FV
Yksittäisten osallistujien tietojen suunnitelma (IPD)
Aiotko jakaa yksittäisten osallistujien tietoja (IPD)?
Nämä tiedot haettiin suoraan verkkosivustolta clinicaltrials.gov ilman muutoksia. Jos sinulla on pyyntöjä muuttaa, poistaa tai päivittää tutkimustietojasi, ota yhteyttä register@clinicaltrials.gov. Heti kun muutos on otettu käyttöön osoitteessa clinicaltrials.gov, se päivitetään automaattisesti myös verkkosivustollemme .