人子宫内膜分泌的细胞外囊泡的分离和表征

在过去的几十年中，膜封闭隔室（通常被认为是细胞外囊泡）的排放已被确立为复杂生物体细胞之间、单细胞生物体之间或单细胞生物体与宿主之间的一种新的通讯机制。 这些囊泡在所有体液中都有描述，目前根据它们形成的机制分为三种类型： 外泌体，大小范围为 30 至 150 nm（在细胞内形成）； 100 到 1000 nm 之间的微泡（由细胞膜形成）和尺寸大于 1 µm 的凋亡小体（由经历程序性细胞死亡的细胞产生）。

子宫内膜液是存在于子宫腔中的粘性液体，源自形成子宫和血清渗出物的不同细胞类型。 它提供了胚胎植入环境的精确视图，并且可以通过微创技术将其取出。

这项初步研究的主要目的是分离和表征子宫内膜分泌到子宫内膜液中的细胞外囊泡，这是第一次描述这一事实。 它旨在标准化一种基于连续差速离心和过滤分离子宫内膜液中存在的不同囊泡群（即：凋亡小体、微泡和外泌体）的方法。 分离的囊泡的形态学表征将在三个层面上进行：通过透射电子显微镜研究外部形态，通过蛋白质印迹表征不同囊泡种群表面标记，以及通过纳米粒子跟踪分析分析囊泡种群大小分布。

研究的第二部分旨在评估整个月经周期中细胞外囊泡的含量。 为此，将 28 至 30 天的规范月经周期分为 5 个阶段：第一阶段（第 0-8 天）、第二阶段（第 9-14 天）、第三阶段（第 15-18 天）、第四阶段（第 19-24 天）和第五阶段（25 至 30）。 囊泡内容描述的实验设计包括两个层次的比较：（1）不同囊泡群体在月经周期同一阶段和每个阶段的差异内容分析和（2）差异内容分析在循环的每个阶段和每个囊泡种群中，囊泡的数量相同。 囊泡内容物的这种表征将使用质谱技术来分析蛋白质、脂质和其他小代谢物组成。 它们的存在旨在与周期的时刻和子宫内膜的正常生理功能相关。 另一方面，将通过大规模测序对这些囊泡种群的 DNA 和 RNA 含量进行分析。 这里的目标是分析功能向目标细胞的传输以及这些分子的潜在预测用途以确定月经周期的时刻。