Helicobacter Pylori 박멸에서 CYP2C19 다형성의 효과

소개:

H. pylori는 세계 보건 기구(WHO) 국제 암 연구 기관(IARC)에 의해 발암 물질 I로 선언 및 비준되었습니다. 전 세계적으로 H. pylori에 대해 권장되는 1차 치료 제균 치료는 양성자 펌프 억제제(PPI)와 두 가지 항생제(아목시실린 및 클라리트로마이신 또는 메트로니다졸)를 결합합니다. 그러나 오늘날 이 치료법의 효과는 주로 H. pylori 항생제 내성으로 인해 "백분율" 75% 미만입니다. 치료 실패와 관련된 다른 요인은 치료 순응도와 약물 약동학에 영향을 미칠 수 있는 숙주 유전 요인, 특히 PPI 약동학 PPI는 박멸 요법에서 필수적인 역할을 하며, 깊은 산 분비를 억제하여 수소 이온 전위(pH)를 6.0 이상으로 증가시킵니다. 이는 H. pylori가 위 pH가 6.0 미만일 때보다 더 활발하게 복제할 수 있게 하여 항균 활성을 향상시켜 항균제 안정성 및 위에서 항생제 농도를 높입니다. PPI의 작용은 시토크롬 P450(CYP) 효소에 의한 대사에 따라 달라집니다. 최근 연구에 따르면 오메프라졸에서 관찰된 것처럼 CYP2C19 유전자형이 위에서 산 분비를 억제하는 PPI의 능력에 영향을 미칠 수 있는 것으로 나타났습니다. 오메프라졸은 CYP2C19(90%"백분율") 및 CYP3A4(10%"백분율")에 의해 대사됩니다. CYP2C19 유전자에는 21개의 다형성이 있으며 그 중 3개는 PPI 대사에 중요한 역할을 합니다. 따라서 다형성에 따라 초기 대사자(EM)("별표"*1/"별표"*1), 중간 대사자(IM)("별표"*1/"별표"*X) 및 불량 대사자("별표"*1/"별표"*1)로 지정됩니다. PM) ("별표"*X/"별표"*X). 여기서 "별표"*1 대립유전자는 야생형 대립유전자("야생형")이고 "별표"*X는 돌연변이된 대립유전자에 해당합니다. 유전자형 CYP2C19 "별표"*1/"별표"*2 o"별표" *1/"별표"*3를 가진 환자는 IM이고 유전자형 CYP2C19 "별표"*2/"별표"*2 또는 CYP2C19 "별표"를 가진 환자는 IM입니다. *3/"별표"*3는 PM입니다. CYP2C19 "별표"*2 및 CYP2C19 "별표"*3 다형성의 존재는 개별 대사자 표현형을 예측합니다. 2006년에 CYP2C19"별표"*17 대립유전자가 발견되었으며, CYP2C19"별표"*1/"별표"*17 형태의 이형접합체는 다른 저자에 의해 단순히 초고속 대사자로 간주되기 때문에 그 기능이 임상적으로 중요합니다. 이 후자의 다형성의 임상적 의미는 다음에 의존합니다. PPI가 빠르게 대사되면 표준 PPI 용량은 산 분비를 적절하게 억제하지 못하고 미생물이 항생제에 민감한 경우 H. pylori 박멸 요법의 효과가 떨어집니다. H. pylori를 박멸하기 위한 콜롬비아의 최근 연구에서는 clarithromycin 또는 levofloxacin과 amoxicillin을 병용한 삼중 요법을 사용하여 유기체가 이러한 항생제에 민감하지만 달성된 박멸에는 가변성이 있다고 보고했습니다. 이러한 결과는 항균제 내성과는 다른 추가적인 요인이 우리 인구의 치료 효과에 영향을 미칠 수 있는 가능성을 제시할 수 있습니다.

일반적인 방법:

현재의 목적은 H.pylori 박멸에 대한 CYP2C19 유전적 다형성 영향을 결정하는 것이었습니다. 이를 위해 무작위 단일 맹검 임상 시험을 수행했습니다. 2012년부터 2015년까지 콜롬비아 보고타에서 진행되었습니다. 이 연구는 Good Clinical Practice 지침과 헬싱키 선언의 윤리적 원칙에 따라 수행되었습니다. 참여 기관의 윤리 위원회는 모든 참가자가 서면 동의서에 서명한 연구 프로토콜을 승인했습니다.

정보에 입각한 동의를 얻은 후 356명의 환자가 연구에 참여하도록 초대되었습니다. 등록된 모든 참가자는 조직학, 미생물학 및 유전자형 검사를 위한 위 생검을 얻기 위해 콜롬비아 보고타 D.C.의 임상 센터인 상부 내시경 서비스에서 수행되는 초기 내시경 검사를 받았습니다. 그러나 제안된 엄격한 포함 및 제외 기준으로 인해 356명의 참가자 중 133명만 연구에 포함되었습니다.

연구의 모든 참가자는 최소 6시간의 금식과 함께 무균 상태에서 상부 소화관의 내시경 검사를 받았습니다. 내시경 검사 동안 조직 병리학, 미생물학 및 분자 분석을 위해 전정부에서 5개의 생검을, 신체에서 4개의 생검을 채취했습니다. 조직병리학적 분석을 위해 생검 샘플을 적절하게 표시된 별도의 용기에 병리학 부서로 보냈습니다. 미생물 및 분자 분석을 위해 3개의 전정부 및 3개의 위 생검을 수집하여 다음과 같이 사용했습니다: 빠른 우레아제 검사를 위한 전정부 생검 1개, H. pylori 배양 및 감수성을 위한 생검 2개(전방 및 위체 생검 1개) 시험. H. pylori에 대한 추가 검사 중 하나 또는 둘 다 양성인 경우에만 배양을 수행했습니다. 배양은 음성이나 다른 검사에서는 양성이면 분자생물학적 분석(ureA gene detection H. pylori)으로 미생물 검출을 확인하였다. 2개 이상의 테스트에서 양성이 나왔을 때 참가자가 H. pylori에 감염된 것으로 간주되었습니다. 또 다른 생검은 DNA 추출 및 CYP2C19 유전자 다형성의 후속 분석에 사용되었습니다.

7% "백분율" v/v 말 혈액, Isovitalex(BD) 및 Helicobacter Pylori Selective Supplement (Dent) (옥소이드). 다음으로 샘플을 37°C에서 11% "백분율" 이산화탄소(CO2)와 함께 3~5일 동안 배양했습니다. 순수 콜로니로부터의 항생제 감수성 시험은 아목시실린 및 클라리트로마이신 최소 억제 농도(MIC)를 결정하기 위해 임상 및 실험실 표준 연구소(CLSI)에 따라 한천 희석법(골드 스탠다드 방법)에 의해 수행되었습니다. 또한 본 연구에 포함된 133명의 모든 환자에서 CYP2C19 다형성 "별표"*1, "별표"*2, "별표"*3 및 "별표"*17가 확인되었습니다. 이를 위해 시판 키트(QIAGEN)의 인간 샘플에서 DNA 분리에 의해 위 생검에서 DNA를 얻은 다음 각각의 다형성을 식별했습니다.

CYP2C19 "별표"*1,"별표"*2,"별표"*3 다형성은 인간 CYP2C19"별표"*2 및 CYP2C19"별표"에 대한 Modular Assays 키트를 사용하여 실시간 중합효소 연쇄 반응(RT-PCR)에 의해 결정되었습니다. *3(Roche), 제조업체의 지침에 따름. 그리고 대립유전자 "별표"*17의 결정을 위해 Baldwin et al. 보고서.

두 가지 유형의 치료법을 비교한 연구로 인해 133명의 환자는 컴퓨터 프로그램을 통해 무작위로 두 그룹으로 치료를 받았습니다. 그룹 1 또는 기존 그룹 및 그룹 2 또는 개인화 그룹. 두 그룹 모두 아목시실린과 클래리트로마이신을 받았지만 첫 번째 그룹은 오메프라졸의 표준 용량을 받았고 두 번째 그룹에서는 오메프라졸 용량이 각 참가자의 CYP2C19 다형성에 따라 조정되었습니다.

미생물 및 분자 테스트를 수행한 후 참가자는 컴퓨터 생성 무작위 목록에서 제공하는 무작위 교차 순서에 따라 치료 요법에 할당되었습니다. 참가자들은 할당된 그룹에 따라 치료 전달 약속을 지정하기 위해 전화로 연락을 받았습니다.

모든 참가자에게는 다양한 약물로 발생할 수 있는 부작용에 대한 자세한 정보가 제공되었습니다. 설사, 금속 맛, 메스꺼움, 더부룩한 느낌, 식욕 부진, 구토, 복통, 변비 및 발진과 같은 증상을 포함하는 검증되고 미리 코딩된 설문지를 사용하여 가능한 부작용의 확인을 전화로 수행했습니다. 각 증상의 강도는 리커트 척도를 사용하여 0에서 3까지 등급을 매겼습니다: 0: 없음, 3: 심함. 최종적으로 H. pylori 제균은 항원 검사(Meridian®)에 의해 치료 8주 후 확인되었습니다. 이 테스트를 위해 각 참가자에게 대변 샘플을 요청했습니다. 테스트는 제조업체의 지침에 따라 수행되었습니다.

결과 분석을 위해 참가자들의 데이터베이스를 엑셀과 spss로 생성하였다. 이 데이터베이스에는 각 참가자의 일반적인 특성, 각 미생물 테스트 결과, 분자 생물학이 포함되었습니다. 사용된 치료의 효과에 대한 기술 통계 및 분석이 수행되었습니다.