ヘリコバクター ピロリ除菌における CYP2C19 多型の効果

序章：

ヘリコバクター ピロリは、世界保健機関 (WHO) の国際がん研究機関 (IARC) によって発がん性物質 I として宣言および承認されています。 ヘリコバクター ピロリに対して世界的に推奨されている第一選択療法の根絶治療は、プロトンポンプ阻害剤 (PPI) と 2 つの抗生物質 (アモキシシリンおよびクラリスロマイシンまたはメトロニダゾール) を組み合わせたものです。 しかし、今日では、主にピロリ菌の抗生物質耐性のために、この治療法の有効性は 75% 未満です。 治療の失敗に関与するその他の要因は、治療の順守と、投薬の薬物動態、特に PPI の薬物動態に影響を与える可能性のある宿主の遺伝的要因です。 これにより、ピロリ菌は胃の pH が 6.0 未満の場合よりも活発に複製できるため、抗生物質活性が向上し、胃内の抗菌剤の安定性と抗生物質濃度が向上します。 PPI の作用は、シトクロム P450 (CYP) 酵素による代謝に依存します。最近の研究では、CYP2C19 遺伝子型が、オメプラゾールで観察されたように、胃の酸分泌を抑制する PPI の能力に影響を与える可能性があることが示されています。 オメプラゾールは、ＣＹＰ２Ｃ１９（９０％「パーセンテージ」）およびＣＹＰ３Ａ４（１０％「パーセンテージ」）によって代謝される。 CYP2C19 遺伝子には 21 の多型があり、そのうちの 3 つは PPI 代謝で重要な役割を果たします。 したがって、多型に応じて、初期代謝型 (EM) (「アスタリスク」*1/「アスタリスク」*1)、中間代謝型 (IM) (「アスタリスク」*1/「アスタリスク」*X)、および低代謝型 ( PM) (「アスタリスク」*X/「アスタリスク」*X)。 ここで、「アスタリスク」*1 対立遺伝子は野生型対立遺伝子 (「野生型」) であり、「アスタリスク」*X は変異対立遺伝子に対応します。 遺伝子型CYP2C19「アスタリスク」*1/「アスタリスク」*2 o「アスタリスク」*1/「アスタリスク」*3の患者はIM、遺伝子型CYP2C19「アスタリスク」*2/「アスタリスク」*2またはCYP2C19「アスタリスク」の患者※3/「アスタリスク」※3はPMです。 CYP2C19「アスタリスク」*2 および CYP2C19「アスタリスク」*3 多型の存在は、個々の代謝表現型を予測します。 2006 年に CYP2C19「アスタリスク」*17 対立遺伝子が発見されました。この対立遺伝子の機能は臨床的に重要です。CYP2C19「アスタリスク」*1/「アスタリスク」*17 型を持つヘテロ接合体は、他の著者によって単純に超高速代謝体と見なされているためです。 この後者の多型の臨床的意義は、次のことに依存しています。PPI が迅速に代謝される場合、標準的な PPI 用量では酸分泌を十分に抑制できず、微生物が抗生物質に敏感な場合、ピロリ菌除菌療法の効果が低下します。 クラリスロマイシンまたはレボフロキサシンとアモキシシリンを組み合わせた 3 剤療法を使用してピロリ菌を根絶するためのコロンビアでの最近の研究では、微生物はこれらの抗生物質に敏感であるが、達成された根絶にはばらつきがあることが報告されました。 これらの結果は、抗菌薬耐性とは異なる追加の要因が、私たちの人口の治療効果に影響を与える可能性を示唆している可能性があります.

一般的な方法:

現在の目的は、CYP2C19 遺伝子多型が H.pylori 除菌に及ぼす影響を判断することでした。 この目的のために、ランダム化された単一盲検の臨床試験が行われました。 2012 年から 2015 年にかけてコロンビアのボゴタで実施されました。 この研究は、グッド クリニカル プラクティスのガイドラインとヘルシンキ宣言の倫理原則に従って実施されました。 参加機関の倫理委員会は、すべての参加者が書面によるインフォームドコンセントに署名した研究プロトコルを承認しました。

インフォームド コンセントを得た後、356 人の患者が研究に参加するよう招待されました。 登録されたすべての参加者は、最初の内視鏡検査を受け、組織学、微生物学的および遺伝子型検査のための胃生検を取得するために、コロンビアのボゴタ、DC、コロンビアの臨床センターである上部内視鏡検査サービスで実施されました。 ただし、提案された厳密な包含および除外基準により、356 人の参加者のうち、133 人のみが研究に含まれました。

この研究のすべての参加者は、無菌条件下で上部消化管の内視鏡検査を受け、最低 6 時間の絶食が行われました。 内視鏡検査中に、組織病理学、微生物学および分子分析のために、前庭部から5つの生検が、体から4つの生検が採取されました。 組織病理学的分析のために、生検サンプルは、適切にマークされた別々の容器に入れて病理学に送られました。 微生物学的および分子分析のために、胃の 3 つの洞および 3 つの胃体の生検が収集され、次のように使用されました。テスト。 培養は、1 つまたは両方の追加検査で H. pylori が陽性の場合にのみ実施されました。 培養が陰性であるが、他の検査が陽性であった場合、微生物の検出は分子生物学分析 (ureA 遺伝子検出 H. pylori) によって確認されました。 2 つ以上の検査が陽性の場合、参加者はピロリ菌に感染していると見なされました。 別の生検は、DNA 抽出と CYP2C19 遺伝子多型のその後の分析に使用されました。

培養は、急速ウレアーゼ試験および組織学が陽性であった参加者の生検から、7%「パーセンテージ」v/v 馬血液、イソビタレックス (BD) およびHelicobacter Pylori 選択的サプリメント (Dent) (Oxoid)。 続いて、試料を３７℃で１１％「パーセンテージ」の二酸化炭素（ＣＯ ２ ）で３～５日間インキュベートした。 純粋なコロニーからの抗生物質感受性試験は、アモキシシリンとクラリスロマイシンの最小発育阻止濃度 (MIC) を決定するために、Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) に従って寒天希釈法 (ゴールド スタンダード法) によって実施されました。 また、CYP2C19 遺伝子多型「アスタリスク」*1、「アスタリスク」*2、「アスタリスク」*3、「アスタリスク」*17 は、本試験に含まれる 133 人の患者全員で特定されました。 この提案のために、ＤＮＡは、市販のキット（ＱＩＡＧＥＮ）からのヒトサンプルからのＤＮＡ単離によって胃生検から得られ、次いで、それぞれの多型の同定が行われた。

CYP2C19「アスタリスク」*1、「アスタリスク」*2、「アスタリスク」*3の多型は、ヒトCYP2C19「アスタリスク」*2およびCYP2C19「アスタリスク」のモジュラーアッセイキットを用いたリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（RT-PCR）により決定されました*3 (Roche)、メーカーの指示による。 また、ボールドウィンらによるアレル「アスタリスク」*17 の決定には、nested PCR と制限断片長多型 (RFLP) が行われました。報告。

2 種類の治療法を比較した研究により、133 人の患者はコンピューター プログラムによって無作為に 2 つのグループに治療を受けました。 グループ 1 または従来のグループとグループ 2 または個人化されたグループ。 どちらのグループもアモキシシリンとクラリスロマイシンを投与されましたが、最初のグループは標準用量のオメプラゾールを投与され、2番目のグループでは各参加者のCYP2C19多型に従ってオメプラゾールの投与量が調整されました.

微生物学的および分子学的検査を実施した後、参加者は、コンピューターで生成されたランダム化リストによって提供される、ランダム化されたクロスオーバーシーケンスに従って治療計画に割り当てられました。 参加者は、割り当てられたグループに従って治療実施の予約を割り当てるために電話で連絡を受けました。

すべての参加者は、さまざまな薬で発生する可能性のある副作用に関する詳細な情報を与えられました. 可能性のある副作用の検証は、次の症状を含む検証済みで事前にコード化されたアンケートを使用して電話で行われました: 下痢、金属味、吐き気、膨満感、食欲不振、嘔吐、腹痛、便秘、および発疹。 各症状の強度は、リッカート スケールを使用して、0 から 3 までの等級付けされました: 0: なし、3: 重度。 最後に、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉの根絶は、抗原試験（Ｍｅｒｉｄｉａｎ（登録商標））によって治療後８週間で確認された。 このテストでは、各参加者に便サンプルが要求されました。 試験はメーカーの指示に従って実施された。

結果を分析するために、参加者のデータベースが Excel と spss で作成されました。 これらのデータベースには、各参加者の一般的な特徴、各微生物検査の結果、分子生物学が含まれていました。 使用された治療の有効性の記述統計と分析が行われました。