Effekt af CYP2C19-polymorfi i udryddelse af Helicobacter pylori

Introduktion:

H. pylori er blevet erklæret og ratificeret som carcinogen I af Verdenssundhedsorganisationen (WHO) International Agency for Research on Cancer (IARC). Globalt førstevalgsbehandling til udryddelse af H. pylori, kombinerer en protonpumpehæmmer (PPI) med to antibiotika (amoxicillin og clarithromycin eller metronidazol). Imidlertid er effektiviteten af ​​denne terapi i dag mindre end 75 % "procent", primært på grund af H. pylori-antibiotikaresistens. Andre faktorer involveret i terapeutisk svigt er behandlingsadhærens og værtsgenetiske faktorer, der kan påvirke medicinfarmakokinetik, specifikt PPI farmakokinetik PPI spiller en væsentlig rolle i udryddelsesterapier, det undertrykker dyb syresekretion og øger således hydrogenionpotentialet (pH) over 6,0. Dette gør det muligt for H. pylori at replikere mere aktivt, end når mavens pH er mindre end 6,0, og forbedrer derfor antibiotisk aktivitet, hvilket fremmer større antimikrobielt middels stabilitet og antibiotikakoncentration i maven. PPIs virkning afhænger af dets metabolisme af cytochrom P450 (CYP)-enzymer. Nylige undersøgelser har vist, at CYP2C19-genotypen kan påvirke PPIs evne til at undertrykke syresekretion i maven, som det er blevet observeret for omeprazol. Omeprazol metaboliseres af CYP2C19 (90% "procent") og af CYP3A4 (10% "procent"). CYP2C19-genet har 21 polymorfier, hvoraf tre spiller en vigtig rolle i PPI-metabolismen. Afhængigt af polymorfi er de således udpeget som tidlige metabolisatorer (EM) ("stjerne"*1/"stjerne"*1), mellemmetabolisatorer (IM) ("stjerne"*1/"stjerne"*X) og dårlige metabolisatorer ( PM) ("stjerne"*X/"stjerne"*X). Hvor "stjerne"*1 allel er vildtype-allelen ("vildtype") og "stjerne"*X svarer til muteret allel. Patienter med genotype CYP2C19 "stjerne"*1/"stjerne"*2 o"stjerne" *1/"stjerne"*3 er im og dem med genotype CYP2C19 "stjerne"*2/"stjerne"*2 eller CYP2C19 "stjerne" *3/"stjerne"*3 er PM. Tilstedeværelsen af ​​CYP2C19 "stjerne"*2 og CYP2C19 "stjerne"*3 polymorfismer forudsiger den individuelle metabolisator fænotype. I 2006 blev CYP2C19"asterisk"*17-allelen fundet, hvis funktion er klinisk vigtig, fordi heterozygoter, med CYP2C19"asterisk"*1/"asterisk"*17-former simpelthen betragtes som ultrahurtige metabolisatorer af andre forfattere. Den kliniske implikation af denne sidstnævnte polymorfi er afhængig af følgende: hvis PPI'er hurtigt metaboliseres, undertrykker standard PPI's dosis ikke tilstrækkeligt syresekretion, og H. pylori-udryddelsesterapi vil være mindre effektiv, hvis mikroorganismen er følsom over for antibiotika. Et nyligt arbejde i Colombia for at udrydde H. pylori ved at bruge tripelterapi med clarithromycin eller levofloxacin kombineret med amoxicillin, rapporterede, at selv om organismen var følsom over for disse antibiotika, var der variation med den opnåede udryddelse. Disse resultater kan tyde på muligheden for, at yderligere faktorer, forskellige fra antimikrobiel resistens, kan påvirke behandlingens effektivitet i vores befolkning.

Generelle metoder:

Formålet med nutiden var at bestemme CYP2C19 genetisk polymorfis indflydelse på H.pylori-udryddelse. Til dette formål blev der udført et randomiseret enkeltblindet klinisk forsøg. Det blev gennemført fra 2012 til 2015 i Bogotá, Colombia. Undersøgelsen blev udført i overensstemmelse med retningslinjerne for god klinisk praksis og etiske principper i Helsinki-erklæringen. De deltagende institutioners etiske udvalg godkendte undersøgelsesprotokollen, hvor alle deltagere underskrev skriftligt informeret samtykke.

Efter at have indhentet informeret samtykke blev 356 patienter inviteret til at deltage i undersøgelsen. Alle tilmeldte deltagere gennemgik indledende endoskopi, udført på den øvre endoskopitjeneste, klinisk center fra Bogotá, D.C., Colombia for at opnå gastrisk biopsi til histologi, mikrobiologisk og genotypisk test. Men på grund af de strenge inklusions- og eksklusionskriterier, der blev foreslået, blev kun 133 af de 356 deltagere inkluderet i undersøgelsen.

Alle deltagere i undersøgelsen gennemgik endoskopi af den øvre fordøjelseskanal under aseptiske forhold, med minimum seks timers faste. Under endoskopien blev der taget fem biopsier fra antrum og fire biopsier fra kroppen til histopatologi, mikrobiologi og molekylær analyse. Til histopatologisk analyse blev biopsiprøverne sendt til patologi i separate korrekt markerede beholdere. Til mikrobiologiske og molekylære analyser blev tre antral- og tre-kroppe af mave-biopsier indsamlet og brugt som følger: en biopsi fra antrum til hurtig urease-test, to biopsier (antrum og en fra kroppen af ​​maven) for H. pylori-dyrkning og modtagelighed prøve. Dyrkning blev kun udført, når en eller begge yderligere test var positive for H. pylori. Hvis kulturen var negativ, men alle andre tests var positive, blev påvisning af mikroorganismer bekræftet ved molekylærbiologisk analyse (ureA-genpåvisning H. pylori). Det blev anset for, at en deltager var inficeret med H. pylori, når to eller flere tests var positive. En anden biopsi blev brugt til DNA-ekstraktion og efterfølgende analyse af CYP2C19 genetisk polymorfi.

Dyrkning blev udført fra biopsier af deltagere, hvis hurtige ureasetest og histologi var positive, fra en biopsi af antrum og krop af maven på Brucella agar (BD) beriget med 7 % "procent" v/v hesteblod, Isovitalex (BD) og Helicobacter Pylori Selektivt Supplement (Dent) (Oxoid). Efterfølgende blev prøverne inkuberet ved 37°C med 11 % "procent" kuldioxid (CO2) i 3 til 5 dage. Antibiotikafølsomhedstest fra rene kolonier blev udført ved agarfortynding (guldstandardmetoden) ifølge Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) for at bestemme amoxicillin og clarithromycin minimum hæmmende koncentration (MIC). Derudover blev CYP2C19 polymorfi "stjerne"*1,"stjerne"*2,"stjerne"*3 og "stjerne"*17 identificeret for alle 133 patienter inkluderet i denne undersøgelse. Til dette forslag blev DNA opnået fra gastriske biopsier ved DNA-isolering fra humane prøver fra kommercielt kit (QIAGEN), og derefter blev identifikationen af ​​de respektive polymorfismer udført.

CYP2C19 "stjerne"*1,"stjerne"*2,"stjerne"*3 polymorfismer blev bestemt ved real-time polymerase kædereaktion (RT-PCR) ved hjælp af Modular Assays kit for human CYP2C19"stjerne"*2 og CYP2C19"stjerne" *3 (Roche), i henhold til producentens instruktioner. Og indlejret PCR og Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) blev udført til bestemmelse af allel "stjerne"*17 ifølge Baldwin et al. rapport.

På grund af undersøgelsen sammenlignede to typer behandlinger, blev de 133 patienter randomiseret til at modtage behandlingerne i to grupper af et computerprogram. Gruppe en eller konventionel gruppe og gruppe 2 eller personlig gruppe. Begge grupper modtog amoxicillin og clarithromycin, men den første gruppe modtog standarddoser af omeprazol, og i den anden gruppe blev omeprazoldoserne justeret i henhold til hver deltagers CYP2C19-polymorfi.

Efter at have udført mikrobiologisk og molekylær testning, blev deltagerne allokeret til et behandlingsregime i henhold til en randomiseret krydsningssekvens, leveret af en computergenereret randomiseringsliste. Deltagerne blev kontaktet telefonisk for at få tildelt en aftale om behandlingslevering i henhold til den tildelte gruppe.

Alle deltagere fik detaljeret information om de bivirkninger, der kunne opstå med de forskellige medikamenter. Verifikation af mulige bivirkninger blev udført telefonisk ved hjælp af et valideret og prækodet spørgeskema, der inkluderede følgende symptomer: diarré, metallisk smag, kvalme, oppustet følelse, appetitløshed, opkastning, mavesmerter, forstoppelse og udslæt. Intensiteten af ​​hvert symptom blev graderet fra nul til tre: 0: fraværende, 3: alvorlig, ved hjælp af en Likert-skala. Endelig blev H. pylori-udryddelse verificeret 8 uger efter behandling med antigentest (Meridian®). Til denne test blev hver deltager anmodet om en afføringsprøve. Testen blev udført i henhold til producentens anvisninger.

Til analyse af resultater blev der genereret en database over deltagerne i excel og i spss. Disse databaser inkluderede generelle karakteristika for hver deltager, resultat af hver af de mikrobiologiske test, molekylærbiologi. Der blev udført beskrivende statistikker og analyse af effektiviteten af ​​de anvendte behandlinger.