CYP2C19-polymorfismin vaikutus Helicobacter Pylorin hävittämiseen

Esittely:

Maailman terveysjärjestö (WHO) Kansainvälinen syöväntutkimuslaitos (IARC) on julistanut ja ratifioinut H. pylorin karsinogeeniksi I. H. pylorille suositeltu maailmanlaajuisesti ensisijainen terapiahoito, jossa protonipumpun estäjä (PPI) yhdistää kaksi antibioottia (amoksisilliini ja klaritromysiini tai metronidatsoli). Kuitenkin nykyään tämän hoidon tehokkuus on alle 75 % "prosenttiosuudesta", mikä johtuu pääasiassa H. pylori -antibioottiresistenssistä. Muita hoidon epäonnistumiseen vaikuttavia tekijöitä ovat hoitoon sitoutuminen ja isännän geneettiset tekijät, jotka voivat vaikuttaa lääkityksen farmakokinetiikkaan, erityisesti PPI:n farmakokinetiikka PPI:llä on olennainen rooli eradikaatiohoidoissa, se estää syvän hapon erittymistä ja nostaa siten vetyionipotentiaalin (pH) yli 6,0:n. Tämä sallii H. pylorin replikoitumisen aktiivisemmin kuin silloin, kun mahalaukun pH on alle 6,0, mikä parantaa antibioottiaktiivisuutta edistäen parempaa antimikrobisen aineen stabiilisuutta ja antibioottipitoisuutta mahassa. PPI:n vaikutus riippuu sen metaboliasta sytokromi P450 (CYP) -entsyymeillä. Viimeaikaiset tutkimukset ovat osoittaneet, että CYP2C19-genotyyppi voi vaikuttaa PPI:iden kykyyn estää hapon eritystä mahassa, kuten omepratsolin kohdalla on havaittu. Omepratsoli metaboloituu CYP2C19:n (90 % "prosenttiosuus") ja CYP3A4:n (10 % "prosenttiosuus") välityksellä. CYP2C19-geenillä on 21 polymorfismia, joista kolmella on tärkeä rooli PPI-aineenvaihdunnassa. Näin ollen polymorfismista riippuen ne nimetään varhaisiksi metaboloijiksi (EM) ("tähti"*1/"tähti"*1), välivaiheen metaboloijiksi (IM) ("tähti"*1/"tähti"*X) ja hitaiksi metaboloijiksi ("Asteriski"*1/"tähti"*1). PM) ("tähti"*X/"tähti"*X). Missä "tähti"*1-alleeli on villityypin alleeli ("villityyppi") ja "tähti"*X vastaavat mutatoitua alleelia. Potilaat, joiden genotyyppi on CYP2C19 "tähti"*1/"tähti"*2 tai "tähti" *1/"tähti"*3, ovat IM ja potilaat, joiden genotyyppi on CYP2C19 "tähti"*2/"tähti"*2 tai CYP2C19 "tähti" *3/"tähti"*3 ovat PM. CYP2C19 "tähti"*2 ja CYP2C19 "tähti"*3 polymorfismien läsnäolo ennustaa yksittäisen metaboloijan fenotyypin. Vuonna 2006 löydettiin CYP2C19"tähti"*17-alleeli, jonka toiminta on kliinisesti tärkeä, koska heterotsygootteja, joiden CYP2C19"tähti"*1/"tähti"*17 muodot ovat yksinkertaisesti pitäneet toisten kirjoittajien mukaan ultranopeina metaboloijina. Tämän jälkimmäisen polymorfismin kliininen merkitys perustuu seuraavaan: jos PPI:t metaboloituvat nopeasti, standardi PPI-annos ei pysty riittävästi hillitsemään hapon eritystä, ja H. pylori -hävityshoito on vähemmän tehokasta, jos mikro-organismi on herkkä antibiooteille. Hiljattain Kolumbiassa tehdyssä H. pylorin hävittämisessä, jossa käytettiin kolmoishoitoa klaritromysiinillä tai levofloksasiinilla yhdistettynä amoksisilliiniin, raportoitiin, että vaikka organismi oli herkkä näille antibiooteille, saavutetussa hävittämisessä oli vaihtelua. Nämä tulokset voivat viitata mahdollisuuteen, että muut tekijät, jotka poikkeavat mikrobien vastustuskyvystä, voivat vaikuttaa hoidon tehokkuuteen väestössämme.

Yleiset menetelmät:

Tämän esityksen tavoitteena oli määrittää CYP2C19:n geneettisen polymorfismin vaikutus H. pylorin hävittämiseen. Tätä tarkoitusta varten tehtiin satunnaistettu yksisokkoutettu kliininen tutkimus. Se toteutettiin vuosina 2012–2015 Bogotássa, Kolumbiassa. Tutkimus suoritettiin hyvän kliinisen käytännön ohjeiden ja Helsingin julistuksen eettisten periaatteiden mukaisesti. Osallistuvien laitosten eettinen komitea hyväksyi tutkimusprotokollan, jossa kaikki osallistujat allekirjoittivat kirjallisen tietoisen suostumuksen.

Tietoisen suostumuksen saatuaan 356 potilasta kutsuttiin osallistumaan tutkimukseen. Kaikille ilmoittautuneille osallistujille tehtiin ensimmäinen endoskopia, joka suoritettiin ylemmän endoskopiapalvelun kliinisen keskuksen Bogotásta, D.C.:stä, Kolumbiasta mahalaukun biopsian saamiseksi histologiaa, mikrobiologista ja genotyyppitestiä varten. Kuitenkin ehdotettujen tiukkojen sisällyttämis- ja poissulkemiskriteerien vuoksi 356 osallistujasta vain 133 osallistui tutkimukseen.

Kaikille tutkimukseen osallistuneille tehtiin ylemmän ruoansulatuskanavan endoskopia aseptisissa olosuhteissa vähintään kuuden tunnin paaston jälkeen. Endoskopian aikana otettiin viisi biopsiaa antrumista ja neljä biopsiaa kehosta histopatologiaa, mikrobiologiaa ja molekyylianalyysiä varten. Histopatologista analyysiä varten biopsianäytteet lähetettiin patologiaan erillisissä asianmukaisesti merkittyissä astioissa. Mikrobiologista ja molekyylianalyysiä varten kerättiin kolme mahalaukun antrumi- ja kolme kehon biopsiaa ja niitä käytettiin seuraavasti: yksi biopsia antrumista nopeaa ureaasitestiä varten, kaksi biopsiaa (antrumista ja yksi mahalaukun kehosta) H. pylori -viljelyn ja herkkyyden määrittämiseksi. testata. Viljely suoritettiin vain, kun toinen tai molemmat lisätestit olivat H. pylori -positiivisia. Jos viljelmä oli negatiivinen, mutta muut testit olivat positiivisia, mikro-organismien havaitseminen vahvistettiin molekyylibiologisella analyysillä (ureA-geenin havaitseminen H. pylori). Osallistujan katsottiin saaneen H. pylori -tartunnan, kun kaksi tai useampi testi oli positiivinen. Toista biopsiaa käytettiin DNA:n uuttamiseen ja myöhempään CYP2C19:n geneettisen polymorfismin analysointiin.

Viljely suoritettiin sellaisten osallistujien biopsioista, joiden nopea ureaasitesti ja histologia olivat positiivisia, antrumin ja mahalaukun biopsiasta Brucella-agarilla (BD), joka oli rikastettu 7 %:lla tilavuus/tilavuus hevosverellä, Isovitalex (BD) ja Helicobacter Pylori -selektiivinen lisäosa (Dent) (oksoidi). Sen jälkeen näytteitä inkuboitiin 37 °C:ssa 11 % "prosenttisen" hiilidioksidin (CO2) kanssa 3 - 5 päivää. Antibioottiherkkyystesti puhtaista pesäkkeistä suoritettiin agar-laimennuksella (kultastandardimenetelmä) Clinical and Laboratory Standards Instituten (CLSI) mukaisesti amoksisilliinin ja klaritromysiinin vähimmäisinhiboivan pitoisuuden (MIC) määrittämiseksi. Lisäksi CYP2C19-polymorfismi "tähti"*1", tähti"*2, tähti"*3 ja "tähti"*17 tunnistettiin kaikille tähän tutkimukseen sisältyneille 133 potilaalle. Tätä ehdotusta varten DNA saatiin mahalaukun biopsioista DNA-eristyksellä kaupallisesta pakkauksesta (QIAGEN) olevista ihmisnäytteistä, ja sitten suoritettiin vastaavien polymorfismien tunnistaminen.

CYP2C19 "tähti"*1"tähti"*2"tähti"*3 polymorfismit määritettiin reaaliaikaisella polymeraasiketjureaktiolla (RT-PCR) käyttämällä Modular Assays -pakkausta ihmisen CYP2C19 "tähti"*2 ja CYP2C19"tähti" *3 (Roche), valmistajan ohjeiden mukaan. Ja sisäkkäinen PCR ja Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) tehtiin alleelin "tähti"*17 määrittämiseksi Baldwin et ai. raportti.

Koska tutkimuksessa verrattiin kahta hoitotyyppiä, 133 potilasta satunnaistettiin saamaan hoidot kahteen ryhmään tietokoneohjelmalla. Ryhmä yksi tai perinteinen ryhmä ja ryhmä 2 tai henkilökohtainen ryhmä. Molemmat ryhmät saivat amoksisilliinia ja klaritromysiiniä, mutta ensimmäinen ryhmä sai standardiannoksia omepratsolia ja toisessa ryhmässä omepratsoliannoksia säädettiin kunkin osallistujan CYP2C19-polymorfismin mukaan.

Mikrobiologisen ja molekyylitestauksen suorittamisen jälkeen osallistujat jaettiin hoito-ohjelmaan satunnaistetun jakosekvenssin mukaisesti, joka toimitettiin tietokoneella luodun satunnaistuslistan avulla. Osallistujiin otettiin yhteyttä puhelimitse ja sovittiin aika hoitotoimituksiin osoitetun ryhmän mukaan.

Kaikille osallistujille annettiin yksityiskohtaista tietoa eri lääkkeiden mahdollisista haittavaikutuksista. Mahdolliset haittavaikutukset varmistettiin puhelimitse käyttäen validoitua ja ennalta koodattua kyselylomaketta, joka sisälsi seuraavat oireet: ripuli, metallin maku, pahoinvointi, turvotus, ruokahaluttomuus, oksentelu, vatsakipu, ummetus ja ihottuma. Kunkin oireen voimakkuus luokiteltiin nollasta kolmeen: 0: puuttuu, 3: vakava, käyttäen Likert-asteikkoa. Lopuksi H. pylorin hävittäminen varmistettiin 8 viikkoa hoidon jälkeen antigeenitestillä (Meridian®). Tätä testiä varten jokaiselta osallistujalta pyydettiin ulostenäyte. Testi suoritettiin valmistajan ohjeiden mukaan.

Tulosten analysointia varten luotiin tietokanta excelin ja spss:n osallistujista. Nämä tietokannat sisälsivät kunkin osallistujan yleiset ominaisuudet, kunkin mikrobiologisen testin tulokset ja molekyylibiologian. Käytettyjen hoitojen tehokkuudesta tehtiin kuvaavat tilastot ja analyysit.