낭포성 섬유증에서 넌센스 돌연변이 교정
CFTR 유전자에 넌센스 돌연변이가 있는 낭포성 섬유증 환자의 상기도 상피세포 넌센스 돌연변이 교정 분자의 최적화
넌센스 돌연변이의 존재는 NMD(넌센스 매개 mRNA 붕괴)라는 메커니즘에 의해 운반체 mRNA 돌연변이의 급속한 분해로 이어집니다[6, 13]. 현재 말도 안되는 돌연변이를 수정하기 위한 3가지 주요 전략이 있습니다: 엑손 건너뛰기, NMD 억제 및 말도 안되는 돌연변이 판독.
실험실에서 우리는 NMD의 억제와 translecture의 활성화를 결합한 넌센스 돌연변이를 수정하기 위한 전략을 개발했습니다. 이를 위해 NMD 억제 및/또는 판독 인핸서를 식별하기 위한 스크리닝 시스템을 구축했습니다. 이렇게 확인된 분자는 넌센스 돌연변이가 있는 쥐 모델과 세포주에서 테스트됩니다.
우리의 목표 중 하나는 넌센스 돌연변이를 효과적으로 교정할 수 있는 일련의 분자를 선택하는 것입니다. 이를 위해 우리는 매우 다양한 무의미한 돌연변이에 대해 이러한 분자를 테스트해야 합니다.
이 작업은 다음을 수행합니다.
- 적어도 하나의 분자로 테스트한 모든 넌센스 돌연변이를 교정할 수 있는지 확인
- 주어진 분자에 의해 수정된 돌연변이 그룹 내에서 공통적인 것을 결정합니다.
- 하나의 돌연변이가 한 분자에 의해 수정되고 다른 분자에 의해 수정되지 않거나 거의 없도록 만드는 매개변수를 할당할 수 있습니다.
따라서 이 연구는 조기 정지 코돈 인식에 대한 이론적 지식을 향상시킬 뿐만 아니라 낭포성 섬유증에서 CFTR 유전자의 무의미한 돌연변이를 환자를 위한 표적 방식으로 교정하기 위한 치료적 접근을 제안할 것입니다.
연구 개요
연구 유형
등록 (추정된)
연락처 및 위치
연구 연락처
- 이름: Anne Prévotat, MD
- 전화번호: +33 03 20 44 59 48
- 이메일: anne.prevotat@chru-lille.fr
연구 연락처 백업
- 이름: Fabrice Lejeune, PhD
- 이메일: fabrice.lejeune@inserm.fr
연구 장소
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Amiens, 프랑스
- 모병
- Camsp Chu Amiens
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Bron, 프랑스
- 모병
- Hopital Femme Mere Enfant - Hcl - Bron
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Lille, 프랑스
- 모병
- Hôpital Calmette,CHU
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수석 연구원:
- Anne Prévotat, MD
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Marseille, 프랑스
- 모병
- Aphm Hopital La Timone - Marseille
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Montpellier, 프랑스
- 모병
- CHU Montpellier
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Paris, 프랑스
- 모병
- Cmp Enfants Aphp Robert Debre - Paris
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Paris, 프랑스
- 모병
- Hu Paris Centre Site Cochin Aphp - Paris 14
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Strasbourg, 프랑스
- 모병
- Hopitaux Universitaires de Strasbour
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참여기준
자격 기준
공부할 수 있는 나이
건강한 자원 봉사자를 받아들입니다
샘플링 방법
연구 인구
설명
포함 기준:
- 만 8세 이상 남녀 성인 및 미성년자
- 낭포성 섬유증 환자는 CFTR 채널을 코딩하는 유전자의 2개 대립 유전자에 무의미한 돌연변이를 가지고 있습니다.
- CFTR 유전자에 관한 환자의 유전자형이 알려진 환자.
- 사회 보장 환자
- 동의한 주요 환자
- 부모의 승인을 받은 미성년 환자
제외 기준:
- CFTR 유전자에 nonsense 이외의 돌연변이가 있는 환자
- CFTR 유전자가 2개의 대립유전자에서 시퀀싱되지 않은 환자
- 본 연구에 참여하기를 원하지 않는 환자 또는 동의하지 않거나 동의할 수 없는 사람.
- 임산부 또는 수유부
- 큐레이터 또는 후견인의 환자
공부 계획
연구는 어떻게 설계됩니까?
디자인 세부사항
연구는 무엇을 측정합니까?
주요 결과 측정
결과 측정 |
측정값 설명 |
기간 |
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CEVAS 막을 통한 요오드화물 이온의 수송
기간: 수집 후 48시간 미만.
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환자 세포를 BEGM(Lonza) 배지에서 배양하고 넌센스 돌연변이 교정자와 함께 20시간 동안 SPQ(6-메톡시-N-3'-설포프로필퀴놀리늄용)라는 형광 분자와 함께 배양합니다.
요오드는 SPQ에 결합할 수 있으며 SPQ 형광을 소멸시킵니다.
질산염은 SPQ 형광을 소멸시키지 않고 SPQ에 결합합니다.
환자 세포를 먼저 요오드가 풍부한 배지에 넣어 SPQ 형광을 소멸시키고 두 번째로 질산염이 풍부한 배지에 넣으면 형광계.
실제로 질산염은 요오드가 CFTR 채널을 통해 세포를 빠져나가는 경우에만 SPQ 형광을 소멸시키지 않고 SPQ의 요오드를 대체할 수 있습니다.
이 분석은 넌센스 돌연변이의 교정자가 기능적 CFTR 단백질의 합성을 유도할 수 있는지 여부를 결정할 수 있게 합니다.
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수집 후 48시간 미만.
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2차 결과 측정
결과 측정 |
측정값 설명 |
기간 |
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환자 세포의 불멸화
기간: 평균 12개월
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환자 세포의 불멸화는 Gruenert et al., 2004에 기술된 바와 같이 복제 기점 결함 SV40을 발현하는 구조물의 형질감염에 의해 시도될 것이다.
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평균 12개월
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MRNA 및 단백질 수준에서 CFTR 유전자의 발현
기간: 1주일 미만.
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1주일 미만.
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공동 작업자 및 조사자
수사관
- 수석 연구원: Anne Prévotat, MD, University Hospital, Lille
연구 기록 날짜
연구 주요 날짜
연구 시작 (실제)
기본 완료 (추정된)
연구 완료 (추정된)
연구 등록 날짜
최초 제출
QC 기준을 충족하는 최초 제출
처음 게시됨 (실제)
연구 기록 업데이트
마지막 업데이트 게시됨 (실제)
QC 기준을 충족하는 마지막 업데이트 제출
마지막으로 확인됨
추가 정보
이 연구와 관련된 용어
추가 관련 MeSH 약관
기타 연구 ID 번호
- 2013_59
- 2014-A01236-41 (기타 식별자: ID-RCB number, ANSM)
개별 참가자 데이터(IPD) 계획
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약물 및 장치 정보, 연구 문서
미국 FDA 규제 의약품 연구
미국 FDA 규제 기기 제품 연구
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