Correção de mutações sem sentido na fibrose cística
Otimização de Moléculas Corretoras de Mutações Nonsense em Células Epiteliais das Vias Aéreas Superiores de Pacientes com Fibrose Cística Com Mutações Nonsense no Gene CFTR
A presença de uma mutação sem sentido leva à rápida degradação da mutação do mRNA transportador por um mecanismo chamado NMD (nonsense-mediated mRNA decaimento) [6, 13]. Existem atualmente 3 estratégias principais, pelo menos, para corrigir mutações sem sentido: salto de exon, inibição de NMD e readthrough de mutação sem sentido.
Em laboratório, desenvolvemos uma estratégia de correção de mutações nonsense combinando inibição de NMD e ativação de translecture. Para este propósito, construímos sistemas de triagem para identificar inibidores de NMD e/ou intensificadores de readthrough. As moléculas assim identificadas são então testadas em linhagens celulares e em modelos murinos portadores de uma mutação sem sentido.
Um de nossos objetivos é selecionar um conjunto de moléculas que possam corrigir efetivamente mutações sem sentido. Para isso temos que testar essas moléculas em uma grande diversidade de mutações sem sentido.
Este trabalho irá:
- determinar se podemos corrigir todas as mutações sem sentido testadas com pelo menos uma de nossas moléculas
- determinar o que é comum dentro de um grupo de mutações corrigidas por uma determinada molécula
- ser capaz de atribuir os parâmetros que fazem com que uma mutação seja corrigida por uma molécula e não ou pouco por outra.
Este estudo irá, portanto, melhorar nosso conhecimento teórico sobre o reconhecimento de stop códons prematuros, mas também propor abordagens terapêuticas para a correção de mutações sem sentido do gene CFTR na fibrose cística de forma direcionada para um paciente.
Visão geral do estudo
Status
Condições
Intervenção / Tratamento
Tipo de estudo
Inscrição (Estimado)
Contactos e Locais
Contato de estudo
- Nome: Anne Prévotat, MD
- Número de telefone: +33 03 20 44 59 48
- E-mail: anne.prevotat@chru-lille.fr
Estude backup de contato
- Nome: Fabrice Lejeune, PhD
- E-mail: fabrice.lejeune@inserm.fr
Locais de estudo
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Amiens, França
- Recrutamento
- Camsp Chu Amiens
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Bron, França
- Recrutamento
- Hopital Femme Mere Enfant - Hcl - Bron
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Lille, França
- Recrutamento
- Hôpital Calmette,CHU
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Investigador principal:
- Anne Prévotat, MD
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Marseille, França
- Recrutamento
- Aphm Hopital La Timone - Marseille
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Montpellier, França
- Recrutamento
- CHU Montpellier
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Paris, França
- Recrutamento
- Cmp Enfants Aphp Robert Debre - Paris
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Paris, França
- Recrutamento
- Hu Paris Centre Site Cochin Aphp - Paris 14
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Strasbourg, França
- Recrutamento
- Hopitaux Universitaires de Strasbour
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Critérios de participação
Critérios de elegibilidade
Idades elegíveis para estudo
Aceita Voluntários Saudáveis
Método de amostragem
População do estudo
Descrição
Critério de inclusão:
- Homens/mulheres adultos e menores de 8 anos ou mais
- Pacientes com fibrose cística e portadores de uma mutação nonsense nos 2 alelos do gene que codifica o canal CFTR.
- Pacientes cujo genótipo de pacientes referente ao gene CFTR é conhecido.
- Doentes com segurança social
- Pacientes graves que deram seu consentimento
- Pacientes menores com autorização dos pais
Critério de exclusão:
- Pacientes que têm uma mutação diferente de nonsense no gene CFTR
- Pacientes cujo gene CFTR não foi sequenciado nos 2 alelos
- Pacientes que não desejam participar deste estudo ou pessoas que não dão ou não podem dar consentimento.
- Mulheres grávidas ou lactantes
- Pacientes sob curadoria ou tutela
Plano de estudo
Como o estudo é projetado?
Detalhes do projeto
O que o estudo está medindo?
Medidas de resultados primários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
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Transporte de íons iodeto através da membrana CEVAS
Prazo: menos de 48hrs após a coleta.
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As células do paciente serão cultivadas em meio BEGM (Lonza) e incubadas com corretor de mutações nonsense por 20 horas e com uma molécula fluorescente denominada SPQ (para 6-metoxi-N-3'-sulfopropilquinolínio).
O iodo pode se ligar ao SPQ e extinguir a fluorescência do SPQ.
Os nitratos se ligam ao SPQ sem extinguir a fluorescência do SPQ.
Ao colocar as células do paciente primeiro em um meio rico em iodo para extinguir a fluorescência SPQ e depois em um meio rico em nitrato, seremos capazes de medir o nível de proteína CFTR funcional presente nessas células medindo a reaparição da fluorescência usando fluorímetro.
De fato, o nitrato será capaz de substituir o iodo no SPQ sem extinguir a fluorescência do SPQ somente se o iodo sair das células através dos canais CFTR.
Este ensaio permite determinar se um corretor de mutação nonsense é capaz de levar à síntese da proteína CFTR funcional
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menos de 48hrs após a coleta.
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Medidas de resultados secundários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
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Imortalização das células do paciente
Prazo: em média 12 meses
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A imortalização das células do paciente será tentada por transfecção de construto que expressa o SV40 defeituoso da origem da replicação, conforme descrito em Gruenert et al., 2004
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em média 12 meses
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Expressão do gene CFTR no nível de mRNA e proteína
Prazo: menos de 1 semana.
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menos de 1 semana.
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Colaboradores e Investigadores
Patrocinador
Colaboradores
Investigadores
- Investigador principal: Anne Prévotat, MD, University Hospital, Lille
Datas de registro do estudo
Datas Principais do Estudo
Início do estudo (Real)
Conclusão Primária (Estimado)
Conclusão do estudo (Estimado)
Datas de inscrição no estudo
Enviado pela primeira vez
Enviado pela primeira vez que atendeu aos critérios de CQ
Primeira postagem (Real)
Atualizações de registro de estudo
Última Atualização Postada (Real)
Última atualização enviada que atendeu aos critérios de controle de qualidade
Última verificação
Mais Informações
Termos relacionados a este estudo
Palavras-chave
Termos MeSH relevantes adicionais
Outros números de identificação do estudo
- 2013_59
- 2014-A01236-41 (Outro identificador: ID-RCB number, ANSM)
Plano para dados de participantes individuais (IPD)
Planeja compartilhar dados de participantes individuais (IPD)?
Informações sobre medicamentos e dispositivos, documentos de estudo
Estuda um medicamento regulamentado pela FDA dos EUA
Estuda um produto de dispositivo regulamentado pela FDA dos EUA
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