Pobieranie próbek tkanek do analizy i zakładania kultur komórkowych

Tło:

Obecnie jest oczywiste, że praktycznie każda ludzka tkanka pourodzeniowa zawiera pewien typ populacji komórek macierzystych/progenitorowych, który jest odpowiedzialny za obrót i naprawę tkanek. Nasze poprzednie badania zidentyfikowały podzbiór ludzkich komórek zrębowych szpiku kostnego (BMSC), które są multipotentne i zdolne do regeneracji kości, chrząstki, podścieliska szpikowego i adipocytów, podczas gdy komórki zrębowe pochodzące tylko z ludzkiej śledziony (SpSC) i grasicy (TSC) tworzą podścielisko mielopodtrzymujące. Ostatnie badania sugerują, że ludzkie komórki zrębowe pochodzące z tkanki tłuszczowej (ASC) mogą być podobne do BMSC, podczas gdy komórki zrębowe pochodzące z ludzkiej skóry właściwej (DSC) nie mają żadnej z tych właściwości (i służą jako kontrola negatywna dla większości eksperymentów in vitro i in vivo) . Nie ustalono jeszcze, jak podobne lub odmienne są te różne populacje komórek zrębowych. Potrzebne jest profilowanie molekularne, aby porównać te różne populacje i wyjaśnić czynniki, które kontrolują różnicowanie komórek zrębowych w jeden lub inny typ komórek.

Cele:

Odpady chirurgiczne (kości z czerwonym szpikiem kostnym, skórą właściwą i tkanką tłuszczową) pochodzące od mężczyzn i kobiet w różnym wieku poddawanych klinicznie wskazanym zabiegom chirurgicznym zostaną wykorzystane do stworzenia hodowli komórek zrębowych w celu zbadania profilu molekularnego i zdolności różnicowania populacji komórek zrębowych z różnych tkanek oraz dalsze scharakteryzowanie regulacji ekspresji genów i syntezy białek w tych komórkach macierzystych/progenitorowych.

Uprawnienia:

Każdy pacjent poddawany klinicznie wskazanemu zabiegowi chirurgicznemu polegającemu na usunięciu kości wraz z czerwonym szpikiem, skórą właściwą i tkanką tłuszczową.

Projekt:

Normalne odpady chirurgiczne (kości z czerwonym szpikiem, skórą właściwą i tkanką tłuszczową) z zabiegów wykonywanych na mężczyznach i kobietach w Szpitalu Dziecięcym zostaną umieszczone w pożywce (dostarczonej przez NIDCR) i wysłane do NIDCR w celu ustalenia szczepów do hodowli komórkowych. Rejestrowany będzie tylko wiek, płeć, miejsce, z którego usunięto tkankę oraz diagnoza kliniczna. Hodowle komórkowe z różnych tkanek zostaną wykorzystane do określenia ich charakteru fenotypowego i właściwości różnicowania poprzez profilowanie molekularne oraz do badań mających na celu wyjaśnienie regulacji ekspresji genów i syntezy białek. Podobnie część próbek pobranych w Szpitalu Dziecięcym zostanie wykorzystana do wygenerowania skrawków histologicznych tkanek. W niektórych przypadkach RNA zostanie wyekstrahowane z tkanek do analizy RT-PCR. Normalne próbki (komórki, skrawki, mRNA) będą również służyć jako normalne kontrole w badaniach przeprowadzonych na próbkach uzyskanych od pacjentów z różnymi chorobami rekrutowanych do NIH zgodnie z obowiązującymi protokołami NIH (97-D-0055, 97-D-0145, 01-D- 0184). Próbki patologiczne (komórki, skrawki, mRNA) będą badane w celu wyjaśnienia przyczyny choroby.