Prebiotyki w zmniejszaniu stanu zapalnego i klinicznych punktów końcowych wrzodziejącego zapalenia jelita grubego (PRInCE-UC) (PRInCE-UC)

To badanie dotyczące interwencji dietetycznej zostanie przeprowadzone metodą podwójnie ślepej próby, naprzemiennie, w ramach której 44 uczestników z łagodną do średnio aktywnej postaci WZJG zostanie poproszonych o spożycie odpowiedniej dawki kandydata na prebiotyk (2'-fukozylolaktozę, oligosacharyd mleka ludzkiego). ) przez 28 dni, po których następuje 28-dniowy okres karmienia równoważnym placebo (maltodekstryną) lub odwrotnie. Prebiotyki są ogólnie dostępne w postaci saszetek, a uczestnicy zostaną poinstruowani, jak je przyjmować każdego dnia.

Nawyk wypróżnień, punktacja objawów i dzienniczki nastroju: Podczas suplementacji i okresów wymywania ochotnicy otrzymają codzienny dzienniczek, w którym będą zapisywać nawyki wypróżnień i nastrój, stosowane leki i zdarzenia niepożądane. Wolontariusze będą rejestrować liczbę wypróżnień dziennie, wyniki w skali Bristolskiej oraz wszelkie objawy wzdęć lub dyskomfortu w jamie brzusznej (oceniane jako brak, łagodne, umiarkowane lub ciężkie). Ochotnicy zostaną poproszeni o ocenę wzdęć w pięciopunktowej skali (0 punktów dla „normalnych”, +1 lub +2 dla wzdęć częstszych niż zwykle oraz -1 lub -2 dla mniejszych niż zwykle). Nastrój zgłaszany przez pacjenta będzie oceniany przy użyciu pięciopunktowej skali, obejmującej witalność, stres, szczęście i czujność. Zamieścimy także kwestionariusze dotyczące ogólnego samopoczucia i snu. Potwierdzona aktywność specyficzna dla choroby będzie rejestrowana przy użyciu prostego wskaźnika aktywności klinicznego zapalenia jelita grubego.

Wskaźnik selektywności: Wpływ żywienia prebiotykami na względną liczbę potencjalnie prozdrowotnych Bifidobacterium, Roseburia, Faecalibacteria i Lactobacilli (korzystne), na liczbę komensalnych Eubacterium spp., Atopobium spp. oraz na liczbie potencjalnie szkodliwych członków mikroflory jelitowej, mianowicie Escherichia coli, proteolitycznych Bacteroides spp. a grupa Clostridium perfringens/histolyticum zostanie oznaczona w obrębie mikroflory kałowej. Co więcej, zdolność funkcjonalna mikrobiomu i wpływ na fenotyp metaboliczny gospodarza zostaną określone za pomocą metabonomiki opartej na spektroskopii magnetycznego rezonansu jądrowego 1H (NMR). Te globalne profile zawierają informacje odnoszące się bezpośrednio do procesów metabolicznych drobnoustrojów, interakcji transgenomicznych, a także endogennego metabolizmu gospodarza. Dzięki zastosowaniu tego odgórnego podejścia do biologii systemów można scharakteryzować reakcje biochemiczne żywiciela i mikroflory na ekspozycję na prebiotyki.

Badania składu mikroflory jelitowej: Fluorescencyjna hybrydyzacja in situ (FISH) zostanie wykorzystana do identyfikacji i zliczenia głównych bakterii beztlenowych w badaniach na ludziach, a cytometria przepływowa zapewni wysoką wydajność i czułość. Ponadto zastosowana zostanie pełna ocena jakościowa struktury społeczności poprzez podejście metagenomiczne z wykorzystaniem sekwencjonowania o dużej wydajności (pirosekwencjonowanie 454 lub podobne).

Badania profilowania metabolicznego oparte na spektroskopii 1H-NMR: W niniejszej propozycji spektroskopia 1H-NMR zostanie zastosowana do scharakteryzowania globalnych sygnatur metabolicznych z próbek biologicznych zebranych podczas badań na ludziach, przy użyciu standardowych jednowymiarowych eksperymentów NMR. Dane mikrobiologiczne jelit i dane metabonomiczne zostaną zintegrowane przy użyciu technik fuzji danych (na przykład dwukierunkowej, wieloblokowej analizy danych metodą najmniejszych kwadratów) w celu uzyskania mechanistycznego zrozumienia zmian na poziomie systemu i optymalizacji ekstrakcji klinicznie istotnych informacji molekularnych. Oczekuje się, że ta analiza umożliwi pomiar tego, jak interwencja oparta na prebiotykach podczas badania klinicznego wpłynęła na ludzki metabonom w sposób bardziej zbliżony do „zdrowia”.

Ocena immunologiczna: Próbki krwi i kału zostaną użyte do określenia liczby komórek odpornościowych i fenotypu. Dane te pokażą stan immunologiczny pacjentów w dowolnym momencie badania – w tym problemy zapalne.

Podzbiory komórek odpornościowych oddziałujące z populacjami komórek prezentujących antygen: Porównamy prezentację antygenu przez zróżnicowane typy komórek (profesjonalne i zrębowe) oraz stopień, w jakim oddziałują one z podzbiorami efektorowych komórek T. Jest prawdopodobne, że początkowa prezentacja antygenu układowi odpornościowemu będzie się różnić w poszczególnych grupach, a ilościowe określenie tych interakcji za pomocą czterobarwnej immunohistologii fluorescencyjnej dostarczy informacji mechanistycznych o tych procesach i postępie stanu chorobowego wrzodziejącego zapalenia jelita grubego.

Gromadzone dane będą obejmować profile społeczności bakteryjnych, markery immunologiczne, pomiary krwi/surowicy, kwestionariusze ochotników, dane metabonomiczne oparte na NMR, końcowe produkty mikrobiologiczne i objawy pacjenta. Dane te będą głównie numeryczne i w formie arkuszy kalkulacyjnych Excel, ale będą również obejmować pliki danych widmowych, pliki surowych sekwencji i zapisy dziennika żywności (MS word/REDCap). Oprogramowaniem do analizy danych będzie SAS (oprogramowanie do analizy statystycznej). Jedynie metabonomiczna spektroskopia NMR i pliki danych sekwencjonowania drobnoustrojów pozwolą wygenerować umiarkowanie duże ilości danych. Zidentyfikujemy standardy społecznościowe dotyczące formatowania danych w celu ewentualnego ich zdeponowania w repozytoriach danych.