Prebióticos na redução da inflamação e desfechos clínicos na colite ulcerativa (PRInCE-UC) (PRInCE-UC)

Este estudo de intervenção dietética será realizado de forma duplo-cega e cruzada, por meio do qual 44 participantes com UC leve a moderadamente ativa serão solicitados a consumir uma dose apropriada do prebiótico candidato (2'-fucosilactose, um oligossacarídeo do leite humano ) durante 28 dias seguido por um período de alimentação de 28 dias com um placebo equivalente (maltodextrina), ou vice-versa. Os prebióticos geralmente estão disponíveis em saquinhos e os participantes serão instruídos sobre como tomá-los todos os dias.

Hábito intestinal voluntário, pontuação de sintomas e diários de humor: Durante os períodos de suplementação e eliminação, os voluntários receberão um diário para registrar seus hábitos intestinais e humor, uso de medicamentos e eventos adversos. Os voluntários registrarão o número de evacuações por dia, as pontuações da escala de fezes de Bristol e quaisquer sintomas de inchaço ou desconforto abdominal (classificado como nenhum, leve, moderado ou grave). Os voluntários serão solicitados a avaliar a sua flatulência numa escala de cinco pontos (com uma pontuação de 0 para 'normal', +1 ou +2 para mais do que o habitual, e - 1 ou - 2 para menos do que o habitual). O humor autorrelatado será avaliado por meio de uma escala de cinco pontos, sendo registrados vitalidade, estresse, felicidade e estado de alerta. Também incluiremos questionários sobre bem-estar geral e sono. A atividade específica da doença validada será registrada usando o Índice de Atividade Clínica Simples de Colite.

Índice de seletividade: O impacto da alimentação prebiótica sobre o número relativo de Bifidobacterium, Roseburia, Faecalibacteria e Lactobacilli potencialmente promotores da saúde (benéficos), sobre o número de Eubacterium spp. comensais, Atopobium spp. e sobre o número de membros potencialmente prejudiciais da microflora intestinal, nomeadamente Escherichia coli, Bacteroides spp. e o grupo Clostridium perfringens/histolyticum será determinado dentro da microflora fecal. Além disso, a capacidade funcional do microbioma e o impacto no fenótipo metabólico do hospedeiro serão determinados pela metabonômica baseada em espectroscopia de Ressonância Magnética Nuclear de 1H (RMN). Esses perfis globais contêm informações relacionadas diretamente aos processos metabólicos microbianos, às interações transgenômicas, bem como ao metabolismo endógeno do hospedeiro. Através da aplicação desta abordagem de biologia de sistemas de cima para baixo, as respostas bioquímicas do hospedeiro e da microbiota à exposição aos prebióticos podem ser caracterizadas.

Estudos de composição da microbiota intestinal: A hibridização fluorescente in situ (FISH) será usada para identificar e enumerar as principais bactérias anaeróbicas nos estudos humanos, e a citometria de fluxo permitirá alto rendimento e sensibilidade. Além disso, será aplicada uma avaliação qualitativa completa da estrutura da comunidade através de uma abordagem metagenômica usando sequenciamento de alta capacidade (pirosequenciamento 454 ou similar).

Estudos de perfil metabólico baseados em espectroscopia de 1H-RMN: Nesta proposta, a espectroscopia de 1H-RMN será aplicada para caracterizar assinaturas metabólicas globais de amostras biológicas coletadas ao longo dos testes em humanos, usando experimentos de RMN unidimensionais padrão. A microbiologia intestinal e os dados metabonômicos serão integrados usando técnicas de fusão de dados (por exemplo, análise de dados multibloco de mínimos quadrados parciais bidirecionais) para gerar compreensão mecanicista das mudanças no nível do sistema e otimizar a extração de informações moleculares clinicamente relevantes. Prevê-se que esta análise fornecerá uma medida de como a intervenção baseada em prebióticos durante o ensaio clínico afetou o metabonome humano de uma maneira mais próxima da “saúde”.

Avaliações imunológicas: Amostras de sangue e fezes serão usadas para determinar contagens e fenótipos de células imunológicas. Esses dados mostrarão o estado imunológico dos pacientes em qualquer momento específico do estudo – incluindo questões inflamatórias.

Subconjuntos de células imunes interagindo com populações de células de apresentação de antígenos: Compararemos a apresentação de antígenos por tipos de células diferenciadas (profissionais e estromais) e até que ponto elas interagem com subconjuntos de células T efetoras. É provável que a apresentação inicial do antígeno ao sistema imunológico seja diferente entre esses grupos e a quantificação dessas interações usando imuno-histologia de fluorescência de 4 cores fornecerá informações mecanísticas desses processos e da progressão do estado da doença UC.

Os dados coletados serão perfis de comunidades bacterianas, marcadores imunológicos, medições de sangue/soro, questionários de voluntários, dados metabonômicos baseados em RMN, produtos finais microbianos e sintomas do paciente. Esses dados serão principalmente numéricos e na forma de planilhas Excel, mas também incluirão arquivos de dados espectrais, arquivos de sequência bruta e registros de diários alimentares (MS word/REDCap). O software para análise de dados será o SAS (Software de Análise Estatística). Somente a espectroscopia de RMN metabonômica e os arquivos de dados de sequenciamento microbiano gerarão volumes de dados moderadamente grandes. Identificaremos padrões comunitários para formatação de dados para eventual depósito em repositórios de dados.