Tricomoníase: correlações de genótipos e fenótipos em mulheres afro-americanas

Apesar das graves consequências para a saúde pública, sua prevalência generalizada, aumento da resistência aos medicamentos e falhas no tratamento, pouco foi feito para estudar o papel do genótipo T. vaginalis na transmissão, virulência, ocorrência de infecções mistas e disseminação da resistência aos medicamentos, principalmente devido a a falta de ensaios adequados para tipagem rápida de estirpes. Técnicas de genotipagem utilizadas anteriormente para Trichomonas são inadequadas devido a problemas com velocidade de análise, sensibilidade e reprodutibilidade entre diferentes laboratórios. A tipagem de sequência multilocus (MLST) combina velocidade, sensibilidade, portabilidade, precisão e confiabilidade, determinando polimorfismos de sequência de nucleotídeos (SNPs) presentes em pequenos fragmentos de DNA (300-400 nt) que são amplificados por reação em cadeia da polimerase (PCR) de um número ( geralmente 6-7) de genes de manutenção selecionados de forma neutra. O MLST atribui um número de fragmento de alelo (AFN) para cada SNP único ou combinação de SNPs presentes em um fragmento de gene e os usa para identificar tipos de sequências únicas (STs) com base nas combinações de AFN na coleção de todos os genes analisados. O MLST tem sido usado extensivamente para estudar epidemiologia, estrutura populacional, virulência e evolução em bactérias patogênicas, mas apenas para fungos entre eucariotos, devido à dificuldade de interpretar dados de MLST em organismos diplóides. No entanto, T. vaginalis difere de outros eucariotos, possuindo um conjunto haploide estável de seis cromossomos, e os investigadores desenvolveram um sistema de genotipagem MLST para isolados clínicos de T. vaginalis. Os dados (AFNs e STs) gerados para cada cepa de T. vaginalis pelo esquema MLST que desenvolvemos serão depositados em um banco de dados de acesso livre na Internet. Este esquema MLST será então usado para examinar as relações entre os genótipos da cepa e as manifestações clínicas, epidemiológicas e fisiológicas da tricomoníase.

A tricomoníase é caracterizada por um amplo espectro de apresentação clínica e sequelas da doença. Essa variabilidade clínica é acompanhada por um alto grau de diversidade genética em isolados clínicos de Trichomonas vaginalis, como demonstramos originalmente e outros confirmaram. Os investigadores levantam a hipótese de que as correlações entre o genótipo e a apresentação clínica são verdadeiras para a tricomoníase e que os isolados de T. vaginalis diferem em sua capacidade para doença clínica, gravidade, resistência a medicamentos e sequelas da doença. Em apoio, vários estudos (10-40 pacientes) mostram uma correlação estatisticamente significativa entre o parentesco genético de isolados de T. vaginalis, usando uma técnica de DNA polimórfico amplificado aleatoriamente (RAPD), com sua apresentação clínica. Também foram relatadas correlações entre a gravidade da doença na tricomoníase e as propriedades fenotípicas in vitro, como citoaderência, citotoxicidade e expressão da proteína cisteína proteinase 30 quilo-dalton (kDa). Diferenças significativas na citoaderência a monocamadas celulares, expressão diferencial de proteínas, fagocitose de células-alvo, capacidade de exercer dano citotóxico em células cultivadas e patogenicidade e mortalidade em camundongos foram demonstradas em isolados clínicos de T. vaginalis, indicando a ampla variação nas propriedades de virulência presentes em isolados de Trichomonas. Os investigadores também demonstraram diferenças de até quatro vezes na atividade de protease de cisteína secretada entre isolados clínicos de cultura de T. vaginalis. A evidência acumulada suporta fortemente uma correlação entre cepas individuais de T. vaginalis e sua capacidade de virulência.

Para este estudo específico, na visita inicial de inscrição/diagnóstico, os investigadores coletarão isolados de T. vaginalis acompanhados por uma avaliação clínica detalhada, informações epidemiológicas e os resultados dos testes in vitro de resistência a medicamentos. Esta informação permitirá aos investigadores determinar se determinadas cepas ou grupos de cepas (conforme determinado pela genotipagem MLST) estão associados a infecção assintomática, gravidade clínica, raça do paciente, falhas de tratamento, resistência a medicamentos, infecções mistas ou história sexual usando análise univariada e multivariada . Isso é significativo porque as associações positivas de determinadas cepas ou grupos de cepas com esses fatores, como os investigadores esperam encontrar, exigirão mudanças na forma como a tricomoníase é gerenciada e tratada com referência às cepas identificadas. Os investigadores também testarão independentemente essas variáveis ​​para correlações entre si para identificar variáveis ​​ou combinações de variáveis ​​que podem estar associadas a manifestações clínicas de tricomoníase.

As informações coletadas pelos investigadores também permitirão uma melhor compreensão da tricomoníase de muitas maneiras adicionais. Os investigadores irão cultivar T. vaginalis em visitas de acompanhamento de teste de cura (TOC) para genótipo e determinar sua resistência a medicamentos para distinguir possíveis falhas de tratamento ou conversão para resistência a medicamentos (mesmo genótipo da visita original) de reinfecção por outro contato (genótipo diferente). Isso é particularmente significativo para mulheres HIV+, pois suas infecções por Trichomonas vaginalis são mais difíceis de curar e T. vaginalis pode persistir, indetectável por cultura, apenas para ressurgir até seis meses depois. O Trichomonas vaginalis é detectado nas consultas de TOC em taxas muito mais altas (até 36%) em mulheres HIV+ do que em mulheres HIV- (8%) com a maioria dessas infecções atribuídas a falhas no tratamento. Relatórios recentes descrevem infecções persistentes e não detectadas por T. vaginalis cultivadas 3 e 6 meses após um resultado inicial negativo de TOC em mulheres que relatam nenhum contato sexual intermediário. Isso é significativo, pois uma correlação do genótipo da cepa com infecção persistente identificará indivíduos HIV+ que precisam de várias visitas ao TOC, uso de testes de diagnóstico mais sensíveis e talvez cursos de tratamento mais longos.