Tricomoniasis: Correlaciones de genotipo y fenotipo en mujeres afroamericanas

A pesar de las graves consecuencias para la salud pública, su prevalencia generalizada, el aumento de la resistencia a los medicamentos y los fracasos del tratamiento, se ha hecho poco para estudiar el papel del genotipo de T. vaginalis en la transmisión, la virulencia, la aparición de infecciones mixtas y la propagación de la resistencia a los medicamentos, principalmente debido a la falta de ensayos adecuados para la tipificación rápida de cepas. Las técnicas de genotipado utilizadas anteriormente para Trichomonas son inadecuadas debido a problemas con la velocidad de análisis, la sensibilidad y la reproducibilidad entre diferentes laboratorios. La tipificación de secuencias multilocus (MLST) combina velocidad, sensibilidad, portabilidad, precisión y confiabilidad mediante la determinación de polimorfismos de secuencia de nucleótidos (SNP) presentes en pequeños fragmentos de ADN (300-400 nt) que se amplifican mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) de un número ( generalmente 6-7) de genes de mantenimiento seleccionados neutralmente. MLST asigna un número de fragmento de alelo (AFN) para cada SNP único o combinación de SNP presentes en un fragmento de gen y los utiliza para identificar tipos de secuencia únicos (ST) en función de las combinaciones de AFN en la colección de todos los genes analizados. MLST se ha utilizado ampliamente para estudiar la epidemiología, la estructura de la población, la virulencia y la evolución en bacterias patógenas, pero solo para hongos entre eucariotas, debido a la dificultad de interpretar los datos de MLST en organismos diploides. Sin embargo, T. vaginalis difiere de otros eucariotas, ya que posee un conjunto haploide estable de seis cromosomas, y los investigadores han desarrollado un sistema de genotipado MLST para aislamientos clínicos de T. vaginalis. Los datos (AFN y ST) generados para cada cepa de T. vaginalis por el esquema MLST que desarrollamos se depositarán en una base de datos de Internet de libre acceso. Este esquema MLST se utilizará luego para examinar las relaciones entre los genotipos de las cepas y las manifestaciones clínicas, epidemiológicas y fisiológicas de la tricomoniasis.

La tricomoniasis se caracteriza por un amplio espectro de presentación clínica y secuelas de la enfermedad. Esta variabilidad clínica va acompañada de un alto grado de diversidad genética en los aislados clínicos de Trichomonas vaginalis, como demostramos originalmente y otros han confirmado. Los investigadores plantean la hipótesis de que las correlaciones entre el genotipo y la presentación clínica son verdaderas para la tricomoniasis y que los aislamientos de T. vaginalis difieren en su capacidad para la enfermedad clínica, la gravedad, la resistencia a los medicamentos y las secuelas de la enfermedad. En apoyo, varios estudios (10-40 pacientes) muestran una correlación estadísticamente significativa entre la relación genética de los aislamientos de T. vaginalis, utilizando una técnica de ADN polimórfico amplificado al azar (RAPD), con su presentación clínica. También se han informado correlaciones entre la gravedad de la enfermedad en la tricomoniasis y las propiedades fenotípicas in vitro, como la citoadherencia, la citotoxicidad y la expresión de la proteína cisteína proteinasa de 30 kilodalton (kDa). Se han demostrado diferencias significativas en la citoadherencia a las monocapas celulares, la expresión diferencial de proteínas, la fagocitosis de las células diana, la capacidad de ejercer daño citotóxico en las células cultivadas y la patogenicidad y mortalidad en ratones en aislamientos clínicos de T. vaginalis, lo que indica la amplia variación en las propiedades de virulencia presentes. en aislamientos de Trichomonas. Los investigadores también han demostrado diferencias de hasta cuatro veces en la actividad de la proteasa de cisteína secretada entre aislados clínicos cultivados de T. vaginalis. La evidencia acumulada apoya firmemente una correlación entre las cepas individuales de T. vaginalis y su capacidad de virulencia.

Para este estudio específico, en la visita de inscripción/diagnóstico inicial, los investigadores recolectarán aislamientos de T. vaginalis acompañados de una evaluación clínica detallada, información epidemiológica y los resultados de las pruebas in vitro de resistencia a los medicamentos. Esta información permitirá a los investigadores determinar si determinadas cepas o grupos de cepas (según lo determinado por el genotipado MLST) están asociados con una infección asintomática, gravedad clínica, raza del paciente, fracasos del tratamiento, resistencia a los medicamentos, infecciones mixtas o antecedentes sexuales mediante análisis univariados y multivariados. . Esto es importante porque las asociaciones positivas de cepas particulares o grupos de cepas con estos factores, como esperan encontrar los investigadores, requerirán cambios en la forma en que se maneja y trata la tricomoniasis con referencia a las cepas identificadas. Los investigadores también evaluarán de forma independiente estas variables en busca de correlaciones entre sí para identificar variables o combinaciones de variables que puedan estar asociadas con manifestaciones clínicas de tricomoniasis.

La información que recopilen los investigadores también permitirá una mejor comprensión de la tricomoniasis de muchas maneras adicionales. Los investigadores cultivarán T. vaginalis en las visitas de seguimiento de la prueba de cura (TOC) para determinar el genotipo y determinar su resistencia a los medicamentos para distinguir los posibles fracasos del tratamiento o la conversión a resistencia a los medicamentos (el mismo genotipo que la visita original) de la reinfección por otro contacto (genotipo diferente). Esto es particularmente significativo para las mujeres VIH+ ya que sus infecciones por Trichomonas vaginalis son más difíciles de curar y T. vaginalis puede persistir, indetectable por cultivo, solo para reaparecer hasta seis meses después. Trichomonas vaginalis se detecta en las visitas TOC en tasas mucho más altas (hasta un 36 %) en mujeres VIH+ que en mujeres VIH- (8 %), y la mayoría de estas infecciones se atribuyen a fallas en el tratamiento. Informes recientes describen infecciones persistentes por T. vaginalis no detectadas cultivadas 3 y 6 meses después de un resultado de TOC inicial negativo en mujeres que informan que no tuvieron contactos sexuales intermedios. Esto es importante ya que una correlación del genotipo de la cepa con la infección persistente identificará a las personas VIH+ que necesitan múltiples visitas de TOC, el uso de pruebas de diagnóstico más sensibles y quizás cursos de tratamiento más prolongados.